1、1第三章第三章 方法学方法学选择与与评价价2第三章第三章 方法学选择与评价方法学选择与评价第一节第一节 实验方法的评价与选择实验方法的评价与选择第二节第二节 量值溯源、误差及不确定度量值溯源、误差及不确定度第三节第三节 方法学的评价方法学的评价3第一第一节 实验方法的方法的评价与价与选择方法学方法学评价价(evaluation of methodology)是通是通过实验途径途径测定分析方法的技定分析方法的技术性能性能,并并评价其是否可接受，其目的在价其是否可接受，其目的在于明确于明确该方法是否具有足方法是否具有足够的方法性能的方法性能来来说明明检测系系统的可靠性及可以的可靠性及可以满足足临床
2、需求。床需求。4第一节第一节 实验方法的评价与选择实验方法的评价与选择一、实验方法的分级一、实验方法的分级二、参考物的分级二、参考物的分级三、方法选择的原则三、方法选择的原则四、方法选择与评价基本步骤四、方法选择与评价基本步骤五、定量实验的方法学评价五、定量实验的方法学评价六、定性实验的方法学评价六、定性实验的方法学评价5实验方法的分方法的分级n实验方法方法n决定性方决定性方法法n参考方法参考方法nA级nB级nC级n常常规方法方法61.1.决定性方法决定性方法(definitive method)n定定义：是指准确度最高，系统误差最小，经过详细的研究，没有发现产生误差的原因或在某些方面不够明确
3、的方法，其测定结果与真值最为接近。n主要方法：主要方法：重量分析法、中子活化法、同位素稀释-质谱分析法（ID-MS）n用途：用途：由于技术要求太高，费用昂贵，这类方法不直接用于鉴定常规方法的准确性，只用于评价参考方法和一级参考物定值。72.2.参考方法参考方法(reference method)n定定义：是指准确度与精密度已经被充分证实，且经公认的权威机构（国家主管部门、相关学术团体和国际性组织等）颁布的方法。这类方法干扰因素少，系统误差很小，有适当的灵敏度、特异度、较宽的分析范围并且线性良好，重复测定中的随机误差可以忽略不计。n主要方法：主要方法：原子吸收分光光度法、火焰光度法、免疫化学法，
4、离子交换层析法等n用途：用途：主要用于鉴定常规方法，评价其误差大小、干扰因素并决定是否可以被接受；用于鉴定二级参考物和为质控血清定值；用于商品试剂盒的质量评价。8 3.3.常常规方法方法(routine method)n定定义：应具有足够的精密度、准确度和特异度，有适当的分析范围，经济实用，其性能指标符合临床或其它目的的需要。n主要方法：主要方法：溴甲酚绿法、双缩脲法、J-G法等。n用途：用途：临床常规检验使用，常规方法在作出评定以后，经有关学术组织认可，可以作为推荐方法（recommended method）。临床生化部分床生化部分项目的三目的三级方法方法9 决定性方法 参考方法 常规方法钾
5、 ID-MS 火焰光度法 离子选择电极钠 中子活化法 火焰光度法 离子选择电极总蛋白 凯氏定氮法 双缩脲法肌酐 ID-MS 离子交换层析 苦味酸比色法葡萄糖 ID-MS 己糖激酶法 葡萄糖氧化酶法三三级检测方法关系方法关系图常规方法常规方法参考方法参考方法决定性方法决定性方法加加围围增增范范用用应应加加增增度度确确准准分级依据：分级依据：IFCCIFCC根据分析方法的准确性与精密度的不同。根据分析方法的准确性与精密度的不同。10n应应用用范范围围增增加加n准准确确度度增增加加11参考物分参考物分级 n参考物也称参考物也称标准品或准品或标准物准物质n国国际标准化委准化委员会定会定义：它的一种或几
6、种物理或化学：它的一种或几种物理或化学成分已成分已经充分确定，可用于校准充分确定，可用于校准仪器、器、评价价测定方法定方法或或给其他物其他物质定定值的物的物质n其定其定值由建立了溯源性的由建立了溯源性的测量程序确定量程序确定n每个参考物都附有其置信水平的不确定度每个参考物都附有其置信水平的不确定度:标准准值总不确定度不确定度12一级参考物一级参考物 特点：特点：含量确定，稳定均一，数值由决定性方含量确定，稳定均一，数值由决定性方法或由高度准确的若干方法确定法或由高度准确的若干方法确定用途：可用于校正决定性方法，评价及校正参考用途：可用于校正决定性方法，评价及校正参考方法以及为方法以及为“二级参
7、考物二级参考物”定值，一级参考物均定值，一级参考物均有证书有证书13二二级参考物参考物n特点：特点：纯溶液（水或有机溶溶液（水或有机溶剂）或某特殊基）或某特殊基质的的纯溶液。可由溶液。可由实验室自己配制或室自己配制或为商品，其物商品，其物质的量由参考方法定的量由参考方法定值或用一或用一级参考物比参考物比较而确定。而确定。n用途：主要用于用途：主要用于 常常规方法的方法的标化化 为控制物定控制物定值。14校准物校准物 n特点：特点：冻干品或溶液，可以用一干品或溶液，可以用一级或二或二级参考物参考物以参考方法定以参考方法定值。n用途：用途：用于用于对常常规方法和方法和仪器的校准。器的校准。15控制
8、物控制物即即质控品控品n特点：与特点：与检测过程相适程相适应，成分及基，成分及基质与与检测的的样本本相同或相似，且均匀、相同或相似，且均匀、稳定。定。n用途：控制物用于常用途：控制物用于常规质量控制，采用控制物和量控制，采用控制物和样品品同步同步进行行测量，将量，将测试结果与控制物保果与控制物保证值相比相比较，以以评价其准确度和价其准确度和检查实验室内是否存在系室内是否存在系统误差。差。16决定性决定性方法方法评价参考方法；价参考方法；为一一级参考物定参考物定值一一级参考参考物物发展及展及评价参考方法；校正决定性方价参考方法；校正决定性方法；法；为二二级参考物定参考物定值参考参考方法方法评价常
9、价常规方法；方法；为二二级参考物及参考物及质控控物定物定值；评价商品价商品试剂盒盒质量量二二级参考参考物物常常规方法方法标化；校准物校准及控制物定化；校准物校准及控制物定值校准校准物物对常常规方法和方法和仪器校准器校准常常规方法方法分析分析临床床标本，本，报告告检验结果果控制控制物物控制控制临床床标本的本的测定定误差差各级实验方法和参考物的相互关系各级实验方法和参考物的相互关系 17参考物参考物 n参考物也称参考物也称标准品或准品或标准物准物质n国国际标准化委准化委员会定会定义：它的一种或几种物理或化学成：它的一种或几种物理或化学成分已分已经充分确定，可用于校准充分确定，可用于校准仪器、器、评
10、价价测定方法或定方法或给其他物其他物质定定值的物的物质n“参考物参考物证书”的参考物称的参考物称为有有证参考物（参考物（certified certified reference material,CRMreference material,CRM）n其定其定值由建立了溯源性的由建立了溯源性的测量程序确定量程序确定n每个参考物都附有其置信水平的不确定度每个参考物都附有其置信水平的不确定度:标准准值总不确定度不确定度18第二第二节 量量值溯源、溯源、误差及不确定度差及不确定度一、量值溯源的概念和意义一、量值溯源的概念和意义 二、参考物的量值溯源二、参考物的量值溯源 三、误差的分类和表示三、误差的
11、分类和表示 四、测量不确定度四、测量不确定度 19第二第二节 量量值溯源、溯源、误差及不确定度差及不确定度一、量值溯源的概念和意义一、量值溯源的概念和意义 二、参考物的量值溯源二、参考物的量值溯源 三、误差的分类和表示三、误差的分类和表示 四、测量不确定度四、测量不确定度 20一、量一、量值溯源的概念和意溯源的概念和意义n溯源性：通过一条具有规定不确定度的不间断的传递链，使测定结果或标准值能够与规定的参考标准联系起来，使测定结果的准确性得到技术保证和验证。21溯源认识溯源认识为什么要量值溯源为什么要量值溯源The Dilemma:The Dilemma:Reporting of the val
12、ues:The same name for the analyteReporting of the values:The same name for the analytee.g.e.g.“Serum-aspartate-aminotransferase(AST)Serum-aspartate-aminotransferase(AST)”AST(Company A)AST(Company B)AST(Company C)AST(Company A)AST(Company B)AST(Company C)The same reference intervals were usedThe same
13、 reference intervals were used -Gerhard Schumann -Gerhard Schumann 2009.8.24 2009.8.24 北京北京对于于临床床实验室定量室定量检测来来说，最基本的要求是要保，最基本的要求是要保证试验结果足果足够准确（正确准确（正确度度和精密和精密度度），以保），以保证临床的正确床的正确诊断并且具有断并且具有时间和空和空间的可比性。的可比性。22为什么要量值溯源为什么要量值溯源23溯源认识溯源认识量值溯源解决的问题量值溯源解决的问题抗干扰性抗干扰性线性性准确度准确度精密度精密度灵敏度灵敏度24溯源认识溯源认识ISO15189IS
14、O15189对溯源的要求对溯源的要求5.6.3 5.6.3 应设计并实施测量系统校准和真实度验证计划，以确保结果应设计并实施测量系统校准和真实度验证计划，以确保结果可溯源至可溯源至SISI单位，或可参比至自然常数或其他规定的参考值。如单位，或可参比至自然常数或其他规定的参考值。如果上述无法实现或不适用，应其他方式提供对结果的可信度，包果上述无法实现或不适用，应其他方式提供对结果的可信度，包括但不限于以下方法：括但不限于以下方法：a)a)参加适当的实验室间比对计划；参加适当的实验室间比对计划；b)b)有证参考物质；有证参考物质；c)c)用其他程序进行验证或校准；用其他程序进行验证或校准；d)d)
15、比率或倒易型测量；比率或倒易型测量；e)e)使用各方承认的协议标准或方法；使用各方承认的协议标准或方法；f)f)若由供应商或制造商提供溯源性，应有关于试剂、程序或检验若由供应商或制造商提供溯源性，应有关于试剂、程序或检验系统溯源性的声明文件。系统溯源性的声明文件。25溯源认识溯源认识量值溯源的重要性量值溯源的重要性量值溯源的一致性是国际间相互承认结果的前提条件前提条件，中国合格评定国家认可委员会（简称CNAS）将量值溯源视为测定结果可信性的基础结果可信性的基础，CNAS对量值溯源的要求与国际规范的相关要求一致相关要求一致。CNAS-CL06 CNAS-CL06量值溯源要求量值溯源要求Trace
16、ability as a Traceability as a uniqueunique tool tool to improve standardization in laboratory medicine to improve standardization in laboratory medicine IFCC Scientific Division ChiarIFCC Scientific Division Chiar Mauro PanteghiniMauro Panteghini量值溯源的可追溯性是提高医学实验室标准化的重要手段。量值溯源的可追溯性是提高医学实验室标准化的重要手段。2
17、6量值溯源量值溯源溯源定义（国际计量学词汇，溯源定义（国际计量学词汇，VIMVIM）溯源性（溯源性（traceabilitytraceability）:通过一条具有规定不确定度的不间断的比较链，使测通过一条具有规定不确定度的不间断的比较链，使测量结果或测量标准的值能够与规定的参考标准，通常是与量结果或测量标准的值能够与规定的参考标准，通常是与国家标准或国际标准联系起来的特性。国家标准或国际标准联系起来的特性。以上定义引自以上定义引自VIM:1993,VIM:1993,定义定义6.106.10溯源性溯源性应用原理用原理n利用参考系统（尤其是参考方法和参考物质）提高检验结果的准确性和可比性n参考系
18、统是溯源的基础，包括三个方面：参考方法参考物质参考实验室27参考方法参考方法n参考方法分为一级参考方法/决定性方法二级参考方法/参考方法n在临床检验领域所指的参考方法一般为二级参考方法。28参考物参考物质n一级参考物质：稳定、均一，采用高度准确可靠的若干方法定值n二级参考物质：用一级参考物质校准，由二级参考方法定值n校准物：用二级参考物质校准，由常规方法定值2930决定性决定性方法方法评价参考方法；价参考方法；为一一级参考物定参考物定值一一级参考参考物物校正决定性方法；校正决定性方法；为二二级参考物定参考物定值；发展展及及评价参考方法；价参考方法；参考参考方法方法评价常价常规方法；方法；为二二
19、级参考物及参考物及质控控物定物定值；评价商品价商品试剂盒盒质量量二二级参考参考物物常常规方法方法标化；校准物校准及控制物定化；校准物校准及控制物定值校准校准物物对常常规方法和方法和仪器校准器校准常常规方法方法分析分析临床床标本，本，报告告检验结果果控制控制物物控制控制临床床标本的本的测定定误差差各级实验方法和参考物的相互关系各级实验方法和参考物的相互关系 溯源性有关文件溯源性有关文件nISO17511（2003），体外诊断医学器具生物样本中量的测量校准物质和质控物质定值的计量学溯源nISO18153（2003），体外诊断医学器具生物样本中量的测量 酶催化浓度校准物质和质控物质定值的计量学溯源n
20、ISO15193（2002），体外诊断医学器具生物样本中量的测量参考参考测量程序量程序的表述nISO15194(2002),体外诊断医学器具生物样本中量的测量参考物参考物质的描述nISO15195(2002),体外诊断医学器具生物样本中量的测量参考参考测量量实验室室的要求3132怎样溯源怎样溯源国际溯源组织国际溯源组织检验医学溯源联合委员会检验医学溯源联合委员会(Joint Committee for Traceability in Laboratory Medicine，JCTLM）2002年由国际计量局（年由国际计量局（BIPM），国际临床化学联合会（IFCC），国际实验室认可合作组织（I
21、LAC）联合成立。联合成立。WG 1：参考物：参考物质和参考方法的和参考方法的筛选和确定；和确定；WG 2：组织参考参考实验室能力室能力验证；参考；参考实验室室认可；推荐参考可；推荐参考测量服量服务。33怎样溯源怎样溯源全国医学计量技术委员会、卫生部临床检验中心全国医学计量技术委员会、卫生部临床检验中心国内溯源组织国内溯源组织20102010年，年，国家质量监督检验检疫总局批准国家质量监督检验检疫总局批准中国计量科学研究中国计量科学研究院（院（National Institute of MetrologyNational Institute of Metrology）成立成立“全国医学全国医学
22、计量技术委员会计量技术委员会”20052005年起，卫生部临床检验中心每年举行酶学参考实验室会年起，卫生部临床检验中心每年举行酶学参考实验室会议议组织参考实验室基础能力测试；组织参考实验室基础能力测试；组织参考实验室能力测试；组织参考实验室能力测试；34二、参考物的量值溯源二、参考物的量值溯源溯源链：溯源链：在临床实验室的定量分析中，通过不同级别的测在临床实验室的定量分析中，通过不同级别的测量程序、参考物和校准物，实现连续测量。量程序、参考物和校准物，实现连续测量。用一个测量程序为某种物质定值，该物质用做下用一个测量程序为某种物质定值，该物质用做下一级测量程序的校准物一级测量程序的校准物依此类
23、推，形成一条不间断的比较链依此类推，形成一条不间断的比较链35材料材料 校准校准方法方法定定值SI-单位位一一级参考参考测定方法定方法二二级参考参考测定方法定方法厂家厂家选择的的测定方法定方法厂家的工作厂家的工作测定方法定方法临床用床用户的的常常规测定方法定方法一一级参考物参考物二二级参考物参考物厂家工作校准品厂家工作校准品厂家生厂家生产的校准品的校准品常常规样本本测定定结果果溯溯源源不不确确定定度度1.1.溯源链和校准层次溯源链和校准层次 n参考物的量值溯源等级图参考物的量值溯源等级图量值溯源的理想情况是可溯源至国际单位制SI，要溯源至国际单位，必须有一级参考测量程序目前满足上述条件的检验指
24、标有25-30种定义明确的小分子化合物（如某些电解质，代谢产物和底物类、甾体激素、甲状腺激素）362.2.参考物量值的传递方案参考物量值的传递方案 检测不能溯源到SI的情况有国际约定参考测量程序（非一级参考测量程序）和一种或多种用此参考测量程序定值的国际约定校准物质，如GHb有一种国际约定参考测量程序,无国际约定校准物质，如HDL-C一种或多种国际约定校准物质及定值方案，无国际约定参考测量程序，如抗体和肿瘤标记物等300多种指标既无参考测量程序也无校准的参考物质372.2.参考物量值的传递方案参考物量值的传递方案 38量值溯源量值溯源检验试剂的溯源链检验试剂的溯源链(JCTLM)(JCTLM)
25、不确定度不确定度不确定度不确定度二级参考物质二级参考物质二级参考物质二级参考物质一级参考物质一级参考物质一级参考物质一级参考物质工厂主校准品工厂主校准品工厂主校准品工厂主校准品试剂盒内校准品试剂盒内校准品试剂盒内校准品试剂盒内校准品 一级参考方法一级参考方法二级参考方法二级参考方法 工厂选定的工厂选定的检测方法检测方法 工厂标准检测法工厂标准检测法 医院常规检测法医院常规检测法 常规样本常规样本常规样本常规样本结果结果结果结果研研研研究究究究机机机机构构构构参参参参考考考考实实实实验验验验室室室室医医医医院院院院检检检检验验验验国际单位国际单位国际单位国际单位39溯源认识溯源认识量值溯源是系统
26、溯源量值溯源是系统溯源n靶值n校正品n分析仪n试剂S O PS O P40检测系统溯源体系建立检测系统溯源体系建立1.1.选用选用JCTLMJCTLM网站的参考方法和参考物质；网站的参考方法和参考物质；2.2.找回参考方法原文找回参考方法原文,购回参考物质；购回参考物质；3.3.根据参考方法原文写出中文根据参考方法原文写出中文SOPSOP文件；文件；4.4.根据根据ISO17511(GB/T21415)ISO17511(GB/T21415)规定，作出溯源图；规定，作出溯源图；5.5.根据根据ISO17511(GB/T21415),ISO17511(GB/T21415),制定出溯源赋值方制定出溯
27、源赋值方案文件；案文件；6.6.按照按照QUAMQUAM和和CNAS-GL05CNAS-GL05要求要求,评定不确定度。评定不确定度。41怎样溯源怎样溯源溯源步骤溯源步骤1 1：确定参考方法：确定参考方法2012-06-0542怎样溯源怎样溯源溯源步骤溯源步骤2 2：找回参考方法原文：找回参考方法原文43检测系统溯源体系建立检测系统溯源体系建立1.1.选用选用JCTLMJCTLM网站的参考方法和参考物质；网站的参考方法和参考物质；2.2.找回参考方法原文找回参考方法原文,购回参考物质；购回参考物质；3.3.根据参考方法原文写出中文根据参考方法原文写出中文SOPSOP文件；文件；4.4.根据根据
28、ISO17511(GB/T21415)ISO17511(GB/T21415)规定，作出溯源图；规定，作出溯源图；5.5.根据根据ISO17511(GB/T21415),ISO17511(GB/T21415),制定出溯源赋值方案制定出溯源赋值方案文件；文件；6.6.按照按照QUAMQUAM和和CNAS-GL05CNAS-GL05要求要求,评定不确定度评定不确定度。4445怎样溯源怎样溯源酶学类溯源酶学类溯源-参考方法参考方法 根据ISO18153文件4.0，IFCC推荐的一级参考方法能溯源到SI单位，在参考实验室用理论K值计算结果，要求：1.方法完全是IFCC等推荐的标准方法；2.实验设备必须精
29、确（溯源）；3.实验室条件必须严格控制；4.操作者的技能必须娴熟；5.试剂原料必须符合方法要求。46怎样溯源怎样溯源酶学类溯源酶学类溯源-参考物质参考物质参考物质（ERM）用作参考方法验证。判断：测定值在靶值不确定度范围内，该方法成立；否则试剂重新配制。47怎样溯源怎样溯源赋值第一步：参考方法验证赋值第一步：参考方法验证 参考物质项目实测值 (U/L)(U/L)均值(U/L)(U/L)靶值不确定度/参考值(U/L)(U/L)CV(%)CV(%)偏倚(%(%)123ERM-AD454ALT188.42188.50187.57188.1618640.221.16JC-ERM（N）AST49.484
30、9.5849.6549.57500.14-0.86JC-ERM（A）131.31131.25131.22131.261310.030.20ERM-AD452GGT114.26114.53114.34114.38114.12.40.100.24ERM-AD453LDH502.61502.58502.66502.6250270.070.12ERM-AD455CK101.50101.56102.46101.8410140.430.83ERM-AD456AMY551.44550.83550.67550.98546180.060.9148怎样溯源怎样溯源赋值第二步：公司主校准品赋值主校准品初步赋值：用参
31、考方法对公司主校准品重复测定主校准品初步赋值：用参考方法对公司主校准品重复测定5 5次；次；血清参考定值：用参考方法对血清参考定值：用参考方法对5 5例临床标本测定（含高、中、低值）；例临床标本测定（含高、中、低值）；49怎样溯源怎样溯源赋值第三步：参考方法到主校准品赋值第三步：参考方法到主校准品血清主校准品定值：在血清主校准品定值：在3个实验室多台生化分析仪用初步赋值的主校准品校准个实验室多台生化分析仪用初步赋值的主校准品校准生化仪，测定上述生化仪，测定上述5例临床标本。例临床标本。临床标本参考值为横坐标（临床标本参考值为横坐标（x x），主校准品），主校准品校准的常规方法值为纵坐标（校准的
32、常规方法值为纵坐标（y y）做线性回归，此时的斜率反映两种方法系统）做线性回归，此时的斜率反映两种方法系统比率；比率；用此斜率调节主校正品值后再校准仪器重新测定临床血清，以参考值为用此斜率调节主校正品值后再校准仪器重新测定临床血清，以参考值为X X，主，主校准品值为校准品值为Y,Y,满足斜率近于满足斜率近于1.001.00，截距近于，截距近于0 0最好。最好。主校准品定值：每个实主校准品定值：每个实 验室重复上述过程验室重复上述过程3 3次，次，计算主校准品值。计算主校准品值。50怎样溯源怎样溯源赋值第四步：校准品赋值赋值第四步：校准品赋值在在3 3个实验室用主校准品校准生化分析仪，测定公司校
33、准品个实验室用主校准品校准生化分析仪，测定公司校准品5 5次，次，得到初步赋值；得到初步赋值；在两个通道上分别用主校准品和用初步赋值的校准品校准生化仪，在两个通道上分别用主校准品和用初步赋值的校准品校准生化仪，测定上述测定上述5 5例临床标本。例临床标本。51怎样溯源怎样溯源赋值第五步：主校准品到校准品赋值第五步：主校准品到校准品临床标本主校准品校准值为横坐标临床标本主校准品校准值为横坐标（x x），校准品校准值为纵坐标（），校准品校准值为纵坐标（y y）作回归分析；作回归分析；用斜率调节校准品值后重新校准仪器用斜率调节校准品值后重新校准仪器测定临床血清，作回归分析，满足斜测定临床血清，作回归
34、分析，满足斜率率1.000.021.000.02，截距近于，截距近于0 0最好。最好。校准品定值：每个实验室重复上述过校准品定值：每个实验室重复上述过程三次，计算校准品值。程三次，计算校准品值。52怎样溯源怎样溯源赋值第六步：校准品验证赋值第六步：校准品验证用定值后的校准品校准生化分析仪，测定用定值后的校准品校准生化分析仪，测定2020例临床血清（包含高、例临床血清（包含高、中、低值）；中、低值）；以参考方法测定上述以参考方法测定上述2020例临床标本；例临床标本；以血清参考值为横坐标（以血清参考值为横坐标（X X），常规值为纵坐标），常规值为纵坐标(Y)(Y)作回归分析；作回归分析；两方法的
35、值作配对两方法的值作配对T T检验。检验。两方法的相关性两方法的相关性R R大于大于0.990.99；配对；配对T T检检 验证明两方法没有显著差异，则赋值验证明两方法没有显著差异，则赋值 有效。否则从赋值第一步做起。有效。否则从赋值第一步做起。53怎样溯源怎样溯源赋值第七步：不确定度计算赋值第七步：不确定度计算主校准品的不确定度计算；主校准品的不确定度计算；不确定度A类评定；不确定度B类评定；合成不确定度；扩展不确定度。校准品的不确定度计算。校准品的不确定度计算。不确定度A类评定；不确定度B类评定；合成不确定度；扩展不确定度。临床实验室的量值溯源临床实验室的量值溯源欲使医学实验室的测量结果具
36、有溯源性，最直接、简便的途径是进入“不间断的溯源链”54量值溯源是系统溯源量值溯源是系统溯源56量值溯源量值溯源检验试剂的溯源链检验试剂的溯源链(JCTLM)(JCTLM)不确定度不确定度不确定度不确定度二级参考物质二级参考物质二级参考物质二级参考物质一级参考物质一级参考物质一级参考物质一级参考物质工厂主校准品工厂主校准品工厂主校准品工厂主校准品试剂盒内校准品试剂盒内校准品试剂盒内校准品试剂盒内校准品 一级参考方法一级参考方法二级参考方法二级参考方法 工厂选定的工厂选定的检测方法检测方法 工厂标准检测法工厂标准检测法 医院常规检测法医院常规检测法 常规样本常规样本常规样本常规样本结果结果结果结
37、果研研研研究究究究机机机机构构构构参参参参考考考考实实实实验验验验室室室室医医医医院院院院检检检检验验验验国际单位国际单位国际单位国际单位5758怎样溯源怎样溯源596061623.3.校准溯源的校准溯源的验证三要素三要素 n由体外诊断试剂生产厂家测定的值应与用参考方法测定的数值相同。n由体外诊断试剂生产厂家用参考方法测定结果在数学上相等的评估，即线性回归方程斜率为1、截距为0。n要求厂家参考物测定结果有互通性。63n校准品在溯源中的作用校准品是实现溯源的“桥梁”是最可取而可靠的办法n欧盟指令要求：“校准物和（或）质控物的定值，必须通过现有较高级别的参考测量程序和（或）参考物质保证其溯源性”4
38、4.校准品在溯源中的作用校准品在溯源中的作用645 5.实现溯源性的目和评估实现溯源性的目和评估 实现溯源性的目的：结果的可靠体外诊断试剂厂家按照ISO 17511的要求，对校准品的定值实现计量溯源，为用户提供常规测定方法的溯源文件 实现溯源性的评估 室间质量评价是最易实现量值溯源长期评估方法 65（二）参考物量值溯源的意义（二）参考物量值溯源的意义临床实验室通过溯源的校准品校准常规检测系统，测定患者样本结果的准确性可溯源到参考方法。参考物是处理过的样本与新鲜患者样本的基质有差异，参考方法的准确度不能完全通过参考物传递给患者样本，对参考物的量值有一定的调整。66量值溯源量值溯源检验试剂的溯源
39、链检验试剂的溯源链(JCTLM)(JCTLM)不确定度不确定度不确定度不确定度二级参考物质二级参考物质二级参考物质二级参考物质一级参考物质一级参考物质一级参考物质一级参考物质工厂主校准品工厂主校准品工厂主校准品工厂主校准品试剂盒内校准品试剂盒内校准品试剂盒内校准品试剂盒内校准品 一级参考方法一级参考方法二级参考方法二级参考方法 工厂选定的工厂选定的检测方法检测方法 工厂标准检测法工厂标准检测法 医院常规检测法医院常规检测法 常规样本常规样本常规样本常规样本结果结果结果结果研研研研究究究究机机机机构构构构参参参参考考考考实实实实验验验验室室室室医医医医院院院院检检检检验验验验国际单位国际单位国际
40、单位国际单位67第二第二节 量量值溯源、溯源、误差及不确定度差及不确定度一、量值溯源的概念和意义一、量值溯源的概念和意义 二、参考物的量值溯源二、参考物的量值溯源 三、误差的分类和表示三、误差的分类和表示 四、测量不确定度四、测量不确定度 68误差差n误差是指测量结果与被测量的真值之差n从误差的性质上，可以将误差分为随机误差和系统误差n性能评价实验也相应设计，了解不同性质的误差n最后，还需综合起来反映总误差水平。69（一）随机误差（一）随机误差（random error，RE）1.定义 随机误差是指在对同一被测量的多次测试中，它受偶然因素影响而以不可预知的方式变化。测量结果与在重复性条件下。对
41、同一被测量进行无限多次测量所得结果平均值之差，称之为随机误差。随机误差影响不定，无大小和方向，呈正态分布。2.来源 随机误差反映分析方法的不精密度不可避免难以预测的测定仪器、试剂、环境、人严格按照标准化的操作规程可减少随机误差。70n检验的特点是每个标本之作一次就发出检验报告，因此，检验结果Xi是对标本多次检测的一个抽样。n所有重复检验的Xi值以均值为中心，他们和均值的差异有大有小，方向各异；这就是随机误差的表现。n临床希望同一标本各次检测值重复性好，这是人们对精密度的要求。n检验结果具有随机误差，常以95%可能性出现的最大随机误差量表示。即1.96S。以此表示标本只做一次检验发出报告中具有的
42、随机误差估计量。71（二）系统误差（二）系统误差（systematic error，SE）1.1.定义定义 是指在对同一被测量的多次测试中，它保持不变或按某种规律而变化。又称方法误差、固定误差。由恒定因素引起，多次重复出现，可被认识并校正。重复性条件下，对同一被测量进行无限多次测量所得结果的平均值与被测量的真值之差，称之为系统误差2.2.来源来源以检测均值和真值的一致性表示，称为偏倚。方法误差：由检测方法固有的缺陷所致仪器误差：未经校准的仪器所产生的误差，仪器波长漂移、量器不准、温度或pH不准等引起试剂误差：试剂质量差、实验水不合格、参考物不纯操作误差：操作不规范，保温时间不足、加样不准72（
43、三）（三）误差的表示方法差的表示方法 n绝对误差：指检测值与真值或约定真值之间的差值。其单位与检测值相同，可用于评价检测结果的准确程度。n相对误差：指检测值绝对误差与真值或约定真值之比，通常以百分数表示，它能客观的表示出检测结果的准确程度。73（三）（三）误差的表示方法差的表示方法 n总误差：常规样本测定结果与真值的差异是随机误差和系统误差的总和。n标本一次检验结果，结果中误差有95%可能性“最坏”表现即为误差的加成。nTE=1.96SD+|bias|74（三）（三）误差的表示方法差的表示方法 n从质量管理角度，可将误差分为：n固有误差稳定状态误差n外加误差不稳定状态误差n分析性能是对检测系统
44、稳定状态（固有）误差的估计。75第二第二节 量量值溯源、溯源、误差及不确定度差及不确定度一、量值溯源的概念和意义一、量值溯源的概念和意义 二、参考物的量值溯源二、参考物的量值溯源 三、误差的分类和表示三、误差的分类和表示 四、测量不确定度四、测量不确定度 不确定度定义n不确定度表明准确度可靠性的高低(程度)。76 有个形象的比喻：一升刻度的容器，盛满水，严格来说，我们不能确定它是否是准确的一升水，但我们可以判断它大约在995至1005毫升之间，就是1000士5毫升，但是具体和真实测量值差多少，我们不知道，但肯定在5毫升以内，这个5毫升就是测量不确定度。再比如我们日常生活中常常遇到的象灌装啤酒净
45、含量为355ml、袋装的牛奶净重230g看到这样的标识,我们对其可信度就不会那么认同，如果是355ml5ml、230g5g那那么我们对他的可信度就会大大提升了。这是对不确定度的粗浅的理解。7778不确定度定不确定度定义 n不确定度的定义：表征合理地赋予被测量之值的分散性，与测量结果表征合理地赋予被测量之值的分散性，与测量结果相联系的参数。相联系的参数。n 不确定度的含义：测量误差怀疑及可信赖程度n与测量结果关系：不确定度愈小，结果与被测量的真值愈接近，质量越高，水平越高，其使用价值越高；不确定度越大，测量结果的质量越低，水平越低，其使用价值也越低。n作用：给出相应的不确定度，一方面便于使用它的
46、人评定其可靠性，另一方面也增强了测量结果之间的可比性。79不确定度分不确定度分类 测量不确定度测量不确定度不确定度不确定度相对不确定度相对不确定度标准不确定度标准不确定度扩展不确定度扩展不确定度A类标准不确定度类标准不确定度B类标准不确定度类标准不确定度合成标准不确定度合成标准不确定度（=2）（=3）9599相对标准不确定度相对标准不确定度相对扩展不确定度相对扩展不确定度A A类相对标准不确定度类相对标准不确定度B类相对标准不确定类相对标准不确定合成相对标准不确定合成相对标准不确定rel（=2）rel（=3）rel95rel9980不确定度分不确定度分类n标准不确定度：准不确定度：是指以标准差
47、表示的测量不确定度。n相对不确定度：是指标准不确定度除以被测量之值。nA A类标准不确定度：准不确定度：是指用统计分析的方法来评定出的不确定度，其评定方法为A类评定nB B类标准不确定度：准不确定度：是指用非统计分析的方法来评定出的不确定度，其评定方法为B类评定n合成合成标准不确定度：准不确定度：是指当测量结果是由若干个其他的值求得时，按其他各量的方差和协方差算得的标准不确定度。81不确定度分类不确定度分类扩展不确定度：扩展不确定度：是指确定测量结果区间的量，合理赋予被测量之值分布在指定概率内含于此区间。具有一定可信度的测量值都处于此区间内。包含因子包含因子:为获得扩展不确定度，而对合成标准不
48、确定度所乘 的数字，包含因子一般以k 表示。扩展不确定度和扩展不确定度和包含因子包含因子测量结果的取值区间，在被测量值概率分布中所包含的百分数，被称为该区间的置信概率、置信水准或置信水平，用P表示。包含因子的取值决定了扩展不确定度的置信水平。当k=2时，P=95%；当k=3时，P=99%。大多数情况下，推荐k 为2。n根据“GUM”（“测量不确定度表述指南”）、“GUAM”（化学测量中不确定度的评定）等，不确定度的评定有两个基本模式：由下而上（Bottom-Up）由上而下（Top-Down）。82测量不确定度的量不确定度的评估估过程程Bottom-upBottom-up？n对测量过程的仔细、全
49、面分析，识別出每一个可能的不确定度来源。对一系列测量值，用统计学方法A类评定或可根据经验或其它信息假设的概率分布B类评定来评定每一来源对不确定度贡献的大小。通讨不确定度方差传播律得到合成标准不确定度。n此类办法常称为GUM的“modelling approach”。n显然医学实验室很难使用此类办法。,83Top-downTop-down？n在不需要了解每个来源情况下，得到一个可靠的评定不确定度。它建立在由实验室内部或组织间实验得到的总的复现性（数据）。n虽然我们没有分别分析人员、仪器、方法等具体因素，但这些因素已包含在室内质控和室间质评结果。n主要从本实验室数据评定测量过程的测量不确定度。即依
50、据下面2个主要不确定度来源：n-正确度/偏移trueness/bias；n-精密度人们相应将其与系统误差和随机误差相联系。8485不确定度不确定度计算算 n“室内质控”所要达到的目的恰恰是要使整个临床标本的测量工作处于统计控制的状态下。因而室内质控所得出的分散性就可以代表临床标本在统计控制状态下的分散性。n因而从获得的大量测量数据计算出的标准差(S)和变异系数(CV)可以真实、可靠地反映测量数据的分散性，完全可以用于该项目的测量不确定度的评估。86不确定度不确定度计算算 n标准不确定度即为室内质控品测量所得出的标准差(S).n相对标准不确定度即为室内质控品测量所得出的变异系数(CV)n扩展不确
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