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1、实用标准文案植物呼吸酶的测定植物体内的呼吸酶，是催化植物在呼吸过程中，进行氧化还原的 一些酶类。植物体内的末端氧化酶是将从基质传递来的电子，直接交给氧并产生H20或H2O2。植物体内的末端氧化酶有抗坏血酸氧化 酶、多酚氧化酶等。这个复杂的氧化酶系统，有助于植物对不良外界 环境条件的适应。通过本实验，掌握一个简便快速测定抗坏血酸氧化酶及多酚氧化 酶活性的方法-滴定法测定抗坏血酸氧化酶和多酚氧化酶活性。 实验原理1. 抗坏血酸氧化酶活性的测定抗坏血酸在抗坏血酸氧化酶的作用下，可以氧化为脱氢抗坏血 酸。抗坏血酸 1/2O2抗坏血酸每脱氢抗坏血酸以抗坏血酸为底物，加入酶的提取液，酶与底物充分反应，此时
2、 抗坏血酸氧化酶将抗坏血酸消耗掉一部分，根据消耗的多少来计算酶 的活性。抗坏血酸消耗的多，说明酶的活性强。抗坏血酸的消耗量，可用碘液滴定剩余的抗坏血酸来测定。12 的产生：KIO3+5KI+6HPO 33 I2+6KPO 3+3H 20用碘液滴定剩余的抗坏血酸：抗坏血酸 I 2抗坏血酸氧化酶脱氢抗坏血酸2. 多酚氧化酶活性的测定多酚氧化酶在有氧存在的条件下，可以将酚氧化成醌，其反应如下:邻苯二酚1/2O2多酚氧化酶 邻醌邻醌再与抗坏血酸作用，将它氧化成脱氢抗坏血酸。抗坏血酸邻醌 脱氢抗坏血酸 邻苯二酚上述反应，由于醌类物质的氧化还原电位比抗坏血酸的高（邻醌 E=0.696抗坏血酸厶 E=0.1
3、66所以邻醌能夺取抗坏血酸上的氢， 生成邻苯二酚。因此，多酚氧化活性的测定，参加反应的底物有两种： 即邻苯二酚和抗坏血酸。多酚氧化酶的活性，也用抗坏血酸的消耗量 求得。实验材料、试剂与仪器设备（一）实验材料：马铃薯芽（二）试剂1. PH6.0的磷酸盐缓冲液：A液为1/15mol/L 磷酸氢二钠溶液， B液为1/15mol/L 磷酸二氢钾溶液，取A液10mL与B液90mL混 均即可。2 . 0.1 %抗坏血酸，试验当天配制。3. 0.02mol/L焦儿茶酚（邻苯二酚）：称取0.22g焦儿茶酚溶 于100mL水中，试验当天配制。4 . 10 %偏磷酸（HPOs）5 . 1 %淀粉溶液。6 . 0.
4、005mol/L 碘液：碘化钾2.5g溶于200mL蒸馏水中，加 冰醋酸1mL ,再加0.1mol/L碘酸钾（0.3567g碘酸钾溶于水，定容 至100mL ） 12.5mL，最后加蒸馏水成 250mL。（三）仪器设备（1）研钵1个；（2）容量瓶50mL1个；（3）三角瓶50mL6 个；（4 ）微量滴定管及滴定架；（5）移液管5mL1支、2mL2支、 1mL1支；（6）恒温水浴；（7）刀片、剪子。实验步骤1. 酶液的提取：取马铃薯 2g，放入研钵中，加少量石英砂，加 PH6.0的磷酸盐缓冲液约 5mL，迅速研成匀浆，研碎后迅速放入 50mL容量瓶中，把全部材料都用蒸馏水洗入50mL容量瓶中，最
5、后 用缓冲液定容至刻度。在室温下，每隔3min摇动一次，共摇5次，共计15min，再 静止20min，其上清液即为酶的提取液。2. 酶活性的测定：取6个50mL干净干燥的三角烧瓶，标上号码， 除酶液外，按下表准确加入各试剂：表酶活性测定加入的各试剂量瓶号缓冲液抗坏血酸焦儿茶酚偏磷酸酶液偏磷酸备注142-21测抗坏血酸氧化酶242-21测抗坏血酸氧化酶342-12-空白测定4421-21测抗坏血酸氧化酶及多酚氧化酶5421-21测抗坏血酸氧化酶及多酚氧化酶642112空白测定先在各瓶中加缓冲液、抗坏血酸及焦儿茶酚，并向（3）及（6） 号瓶加入1mL偏磷酸，准确记录加入酶液的时间。反应 3min后
6、立 即按原次序向（1 ）、（2）、（ 3）、（4）号烧瓶中加入偏磷酸1mL， 停止酶的活动。然后加入3滴淀粉溶液做指示剂，用0.005mol/L碘 液滴定。滴定到出现浅兰色为止。记录消耗碘液的数值。四、结果计算酶活性以每克鲜组织，每分钟氧化抗坏血酸的毫克数表示。 计算 方法如下：（1 ）抗坏血酸氧化酶活性：_、x酶提取液总量（沁）抗坏血酸氧化島舌性=祎品至曇匚.小咗盯间&闵曲炷对醉隹用壘&邛式中：0.44 每毫升0.005mol/L碘液氧化抗坏血酸毫克数。（2）多酚氧化酶活性：由于多酚氧化酶提取液中有两种酶，（4）瓶与（5）号瓶中又 有两种底物，所以（4）号瓶与（5）号瓶中包括两种酶的活性，在 求多酚氧化酶的活性时必须减去抗坏血酸氧化酶的活性。多酚氧化酶活性=1:样品亘置日冥测定时间:mm） k测定时酶液用量加1精彩文档