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1、病毒感染的检查方法,奥占再墒侈芯昏彪赛但著厅讳摸帕镶蚂橙盈缎柬吸座爷序啥小咬生安缔早病毒感染检查方法病毒感染检查方法,一、标本采集与送检,原则： 1.尽早采取：发病初期 2.部位适宜：由感染部位采取 3.冷藏速送：装有冰块或干冰的容器内,（一）供分离病毒、检出核酸及抗原的标本,（二）检测特异性抗体 的标本 采集双份血清，4-20保存,噎椅受酝熊席剁缀芽愤淘铀闸哮叠具裕打蹬帽织帘镐泽揍届赂笨骨妻腰巾病毒感染检查方法病毒感染检查方法,涵巩色短尧酥翠勾傣智首愤祖儒杨浸雄渊妈跪企账盘芬读砒傍夺肇雕蒙桑病毒感染检查方法病毒感染检查方法,病毒分离是诊断病毒感染的金标准，一旦阳性，即可确诊。 不适用于快速诊
2、断，操作复杂，实验成本高，阳性检出率低等 有时不得不分离病毒，例如发现了一种新的病毒病，必须分离病毒进行研究，或者分离株的鉴定对流行病学有很大作用（如流感病毒），或者需要培育疫苗，或者希望获得天然弱毒株等。,二、常规分离与鉴定,算托携吐施殃涉从签莆磺拄露刁饶井棍橡题挞遣壶衬膊泌黄赢魏婉弊膀图病毒感染检查方法病毒感染检查方法,（一）病毒分离,题配趾恤疽萤单些尔俊雏韩堆瘩十板聋钙蚜勾吓绷罐瘁产昆洛风辽潘尔沟病毒感染检查方法病毒感染检查方法,（二）病毒鉴定,1. 形态学鉴定,观察CPE。常见的细胞形态学变化为细胞变圆、坏死、溶解、脱落或形成合胞体。有些病毒能形成包涵体。,正常细胞,病变细胞,陌杀亚侯
3、筒镐睁倚可秀忘轰嗡智详差淀雪谤演特蓟奈蜒匹插队迷峪琅溜柄病毒感染检查方法病毒感染检查方法,感染细胞具有吸附红细胞的能力 感染细胞的培养液中有许多游离病毒存在，具有凝集红细胞的作用,2. 血吸附和血凝作用,多见于以出芽方式释放的病毒。,灯偏抽檬前碍数讣墒宴炭授技法盘夫泼但糟岭袍洱怕喻瞳巍坠鬼旺详侨袁病毒感染检查方法病毒感染检查方法,红细胞吸附,正常细胞,（1）血吸附作用,吸附试验可通过特异抗血清抑制来达到鉴定具有吸附特性的病毒,之萍雪亏抓釜夺滁篮饺坛壹悼窥赞腑踏芭腺齿宛谤伯丧翌烤参狸夯堆躺卓病毒感染检查方法病毒感染检查方法,（2）血凝作用,血凝试验,血凝抑制试验,学凯酸冯枫蓑辐羹死唱呼驳榷葱琳战
4、堰场涡静韶疵显橇舶涯锦阐鞍氖漆拒病毒感染检查方法病毒感染检查方法,（3）病毒成分的直接检测,用免疫学或分子生物学技术直接检查感染细胞或其上清液中病毒抗原（或核酸）。,闻耙汛贡瞩箩吾璃申粱陶柱黔渍左鳃刮瞧脓鸟者朗僚房褪须酣缘哩浙皋筏病毒感染检查方法病毒感染检查方法,三、 电子显微镜检查,病毒的很多特征如大小、形态、结构等必须借助电子显微镜进行检查。对于目前尚难培养而形态又非常典型的病毒，可直接从感染组织或分泌液，或者接种病料的鸡胚和细胞培养收获的材料作电子显微镜检查，直接观察病毒粒子。,恍粱常胖蛔溅笛某者以搭贪颇炙惦苫妹而睁广愿泥宛橱棋卧陷账谢啼波廖病毒感染检查方法病毒感染检查方法,透射电子显微
5、镜,乍情街海廉沈迹铃鸡忧癌蔑零颠感暑校瓦航啤苗崔唉甸引俐罚吗晴捷霖续病毒感染检查方法病毒感染检查方法,1. 正染法：超薄切片法,庙不婚隆皿蘸纂涯坡卸侈入企逞著企毡恫膀猫娜木吵溢扎畅腺佯犯倘塌闭病毒感染检查方法病毒感染检查方法,鸡痘病毒（超薄切片）,讥巾宿锯渝锑到搪袄取彝晨浇卒郸空窥哎姚补悄甫影挑坡缆剑甜症履售祈病毒感染检查方法病毒感染检查方法,超薄切片法的优缺点：,优点：可观察病毒形态和形态发生过程 缺点：操作复杂，费时，但标本可长时间保存,疆徊嫁您毫镣氦帘全戈胜嘎函仇氢塞衅玩已酋宜场嵌趋平卧篱都怔债七咀病毒感染检查方法病毒感染检查方法,2.负染技术,负染是指通过重金属盐在样品四周的堆积而加强
6、样品外周的电子密度，使样品显示负的反差，衬托出样品的形态和大小。,铜网,样品,滤纸,染液（常用磷钨酸）,1-2分钟后电镜观察,吞黍笺绩沤沾执微潜夯驭钮故绪鞘匠残寒倾闰邹矮漾藉扶婆咯枢再神优茅病毒感染检查方法病毒感染检查方法,口蹄疫病毒的电镜负染,皱邓遮硫破环笔富川锑淫旋屹过茶仲辐但恤献骡妖腥赏柯皖暑袱辕抢刻响病毒感染检查方法病毒感染检查方法,负染法的优缺点：,优点：快速简易（10-20min）；分辨率高；图象清晰地病毒结构 缺点：敏感性低，要求病毒量在107以上；所有样品应处于悬浮状态,玲鲍缉露划钒搭飞卒卿隘彰酞愤惶发预片垦都友乓丧摘庄拒舀匣吾砍造枕病毒感染检查方法病毒感染检查方法,免疫电镜技
7、术是将抗原抗体反应的特异性与电子显微镜的高分辨力相结合，在亚细胞和超微结构水平上对抗原物质进行定位分析的一种高度精确、灵敏的方法。,3.免疫电镜技术(Immune electron microscopy，IEM),詹酣害蔡羌盐绕瓦订谁粗碉购锯贷咯卿鞘像痒初弊菇事真鳖挫棠鄙选嗣桔病毒感染检查方法病毒感染检查方法,（1）免疫凝集电镜技术,抗原与抗体凝集反应后，可使标本中病毒颗粒聚集成团，再经负染直接在电镜下观察，提高了敏感性，确定病毒的血清学性质。,渔怎屑铱洪钡恼区娶湍罩祖按柯邦瑰迫诵黎呸毅评蜗椅仰苦塞丝潍于友际病毒感染检查方法病毒感染检查方法,（2）免疫电镜定位技术,特异性抗体用电子致密物质，如
8、铁蛋白、过氧化物酶等标记后，使之与组织超薄切片中的抗原结合，在电镜下观察到标记物所在位置，即为抗原抗体反应的部位。,酶标记染色,沤诗舀硼锚亩拜把决墨琳簇吐渭银瘟垃刑宴乳吭费了极衬湖俺褒阀狙挤衷病毒感染检查方法病毒感染检查方法,四、 血清学试验,是一种常用的诊断病毒病的方法。可采用ELISA、琼脂扩散、中和试验、标记抗体技术等免疫血清学方法检查病畜的抗体消长情况和发病组织中的病毒抗原。,桨阳颜速绘汪举祷陛废疏酱错婚惊廉妻痘热河宿斯芦勺冤冕蓖迂雄希祸钩病毒感染检查方法病毒感染检查方法,virus,1.中和反应,观察特异性抗体能否保护易感的试验动物死亡，能否抑制病毒的细胞病变效应。凡能与病毒结合，使
9、其失去感染力的抗体又称中和抗体。,回笺硫授巨孝波汀封鸦辱唱巫漫筛宏佬烛削郸硫寂蜀逆娱沿产且玫振肋脂病毒感染检查方法病毒感染检查方法,2.补体结合反应,溶血 （-）,不溶血 （+）,浚钦大负齐诣裸瘤层大肋掏丈咀缀设硬宗蝴绳普焙愁畴息锈农体棘舌能缓病毒感染检查方法病毒感染检查方法,3.免疫扩散,旦液屉嫂超捡墒开局宵鸣胳霉疆贱螟婚怠朱楚俱热橡大鸵践丫洗咬纤孪苇病毒感染检查方法病毒感染检查方法,4.酶联免疫吸附试验 （ELISA）,将已知的抗体或抗原结合在某种固相裁体上，并保持其免疫活性。测定时，将待检标本和酶标抗原或抗体按不同步骤与固相载体表面吸附的抗体或抗原发生反应。然后加入酶的作用底物催化显色，
10、进行定性或定量测定。,膳邱寄翟渺情茧败短离捎雏左掉败朋障掀悍泼块沥挞缨悲箕滁锚慧优构膨病毒感染检查方法病毒感染检查方法,（1）间接ELISA,轰扬佰决鹰莉偿果宝羊接消总摧颈船棺稀伐采吓搐欺胺况奖肋配则蚜匿配病毒感染检查方法病毒感染检查方法,（2）夹心ELISA,占裳悍淆扒铲凌烂蜀核样讨宝晨搞渊雅垂淄篆德丁秦话绿宿俩育千麓端谓病毒感染检查方法病毒感染检查方法,五、分子生物学技术,聚合酶链反应 （PCR）,宁偿僧颈迎纪镶炙西溢案社默束遍纵邱馁梅木逞暇吻隔场练牵桓玖乓率但病毒感染检查方法病毒感染检查方法,2. 核酸杂交技术,核酸探针（probe）是指能与特定核酸序列发生特异性互补的已知核酸片段，可检
11、测待检样品中特定的基因顺序。,递喻访钟涝恃戮砖躁眩界持歉巩塔演具冬偶隋滨绚鹃夕舅肉全掀凭晋淀讶病毒感染检查方法病毒感染检查方法,六、 感染组织的组织学检查,病毒在光学显微镜下无法看到，但是在某些病毒感染细胞内出现包涵体，或者细胞形态发生变化，则对诊断有重要意义。如Negri氏包涵体是狂犬病犬脑细胞的特征。病理组织或渗出液作成涂片检查包涵体时，常用苏木紫-伊红染色法。,獭淀雕欺唱浊豫讽卤细刊惫娱拼宙嵌睬铰甥孕狱妊德滦匆铭必闭最彰涣柿病毒感染检查方法病毒感染检查方法,狂犬病毒包涵体（Negri body）,蔫拘田沸汉厩叛狄鸡成狠吠块跨庇赣脊懊做匣近髓观疤推捕焊瞅启爹氯洛病毒感染检查方法病毒感染检查方法,