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1、1,第 10 章 基因诊断 Gene diagnosis China Medical University Department of Medical Genetics,p480,猩德阁占砸乖殖盂拧豹潮碌早掌投痘芹躇益会儒税虎巳瓢啤喀屋嘱了沼七第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi,2,本章内容提示,基因诊断概念 基因诊断方法 直接诊断（Southern） 间接诊断（PCR-RFLP） DNA多态 基因诊断 实例：,授草场侥恳裁陪窒逮瀑晴瞄闯梢娜祖牢摸们编汗椅咋袋滨多蚂觉导捏眷尹第10章基因诊断Genediagn
2、osisChinaMedi第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi,3,第一节 基因诊断技术 第二节 基因诊断方法及实例,距晤戳图莹反桐切土箕桩仲欣盅们枪檬腿摹首酬赣议钎浩落淀舜摊诅镜舷第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi,4,基因诊断： 利用分子生物学技术从DNA 水平检测人类遗 传性疾病的基因缺陷，又称DNA分析法。 传统的诊断：表现型基因型 基 因 诊 断：基因型表现型 （ 逆向诊断）,菌绽代坞搪寐镁睁惨颜拾右疑做拣唯盯锌擦假狸虎魄遁忠酒烃俺踩箩诅民第10章基因诊断Genediagno
3、sisChinaMedi第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi,5,基因诊断的特征：,1 不受材料来源影响 外周血、活体穿刺组织、孕妇外周血、血斑等 2 症状前诊断 尤其对于一些延迟显性疾病如Huntingtong舞蹈病 3 产前诊断 避免患儿出生，提高人口质量,乞铡舶闸允添氰定晴腿口懂枫屉东摘鳃百逮步拈向捧沙娥裁踩窥屉崖炉异第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi,6,第一节 基 因 诊 断 技 术,Southern印迹杂交,蜜杠握重松于鸭群残删弊北匹涌躲衙渣诀刷临游塑抨辞氛机脑析牵炽瘦例第
4、10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi,7,基 因 诊 断 技 术,Northern印迹杂交,怯笋蔗钎玻林云书胀第吏衙柑竭甄辗测饼澈眯锥酉闯安揪喜捻柒丝商决淳第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi,8,基 因 诊 断 技 术,斑 点 杂 交,点样,Probe-32P,检测,A B,1 2 3 4,巢拇具蔬踪杀卓梗庐慧昼头德婚桑掸簇励穗雁色敷放塘槽按认嚼潞场觉丙第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi第10章基因诊断
5、GenediagnosisChinaMedi,9,基 因 诊 断 技 术,荧光原位杂交,谜财站竭钾醉起茬戍獭谤论恭氯填芥撤寇冀黎涣樱奈羡咐缴罚衷词厄仰窒第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi,10,基 因 诊 断 技 术,荧光原位杂交,焊尉辽谅霹袜采磋火改悯纽获捏翟悦颗魏烫逢轧愿缓绵脚啤套奥啼必栽庚第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi,11,基 因 诊 断 技 术,聚合酶链反应,甭贿曙鳖嗜挛凹巍攫盆遵熟救啤霖勇削给组靶芥交从厩眨弗
6、笆碍讼挤亥卡第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi,12,基 因 诊 断 技 术,聚合酶链反应,奴栓诧霸绚婪颇祟帛睬撅搅冤瓜拈辜焦汀液将斑庚辫瓶型番座蹄卫洱怯宝第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi,13,基 因 诊 断 技 术, 多重PCR,在一个PCR体系中加入数对PCR引物，覆盖区域不重叠 用于检测同一基因多个外显子的缺失,E1 E2 E3,鞋泳舌蛛轩楞嚷集镊衰仟宦扭寡绰耐莎孵痈谁呐鸡恰城剥箩妖骡延乌撂仕第10章基因诊断Gen
7、ediagnosisChinaMedi第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi,14,基 因 诊 断 技 术, RT-PCR,以mRNA为模板，经逆转录酶合成cDNA 用于研究基因表达 使微量mRNA迅速扩增，提高mRNA检出的灵敏度,励蔡啡换乖糯戏卧诊矛语绒宋怖莽衰恬赊哲关滩良凉载蔚寿衷谱记吴均习第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi,15,基 因 诊 断 技 术, PCR-SSCP （Single Strand Conformation Polymorphism）,单链DNA由于碱基序列不
8、同可引起构象差异，这种差异将造成相同或相近长度的单链DNA电泳迁移率的不同。据此，可用于DNA中单个碱基的替代、微小的缺失或插入的检测。,蚁螟谦冉弱冷靠干仆坪廓潮姬揭乙归炕六吸综让爪叼服咐大疽舞谰梢惟哩第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi,16,基 因 诊 断 技 术,- primer - 32P-dNTP掺入 PCR扩增 产物 变性 单链DNA 中性聚丙烯酰胺凝胶电泳 1 2 3 4 5 自显影 1为正常 结果分析 2、4、5为纯合患者 3为杂合子 .,受极庸寿闽胜储碧恿加烂狂裴潘酵友征佬抹殆室捞忆是话缮熙始
9、固浅痛骸第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi,17,基 因 诊 断 技 术,生 物 芯 片,碑幢妊侦鼓殷柱组爆侗兴危韩害明柑号铃韧祥桂放彪郊妈囤报分卡障刽季第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi,18,第二节 基 因 诊 断 方 法及实例,直接诊断直接检测致病基因的突变 基因突变类型缺失、点突变、重复、插入等,间接诊断应用DNA多态为遗传标记进行连锁 分析，确定待测者是否得到带有致病的染色体，从而间接地作出诊断 DNA多态RFLP
10、、VNTR、SNP,肚戎墓冈脚铸郝资宵擎唾啦格窖平牧朋管疯洗期晦荡迹程毯恢浦灼据遭埃第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi,19,一 DNA多态,DNA多态（DNA Polymorphism）： 群体中每个个体DNA区域中等位基因（或片段）存在两种或两种以上的形式，对基因功能没有影响，称DNA多态。 它通过孟德尔方式遗传。常用做遗传分析中的标记。,屎冉哩胯占釉支肌桔焰掌核搓居恼茹挥匪激朱辞舰辖育踞嘲寡澈鞍份恬古第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi第10章基因诊断GenediagnosisC
11、hinaMedi,20,DNA分析中常用的遗传性多态性标记有3类：,1）RFLP：称限制性片段长度多态性，为第一代多态性标记； 2）重复序列多态性（VNTR）：如短串联重复序列（STR），为第二代多态性标记； 3）单碱基多态性（SNP）：DNA序列的单个核苷酸的差别，为第三代多态性标记。,时喝羽探桑扔卜熟耘讹绿描流廉牙彻儿聚碧囱诅某诱戈钠涂似源诵蛀勒驴第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi,21,一) 限制性片段长度多态性,Restriction Fragment Length Polymorphism ，RFL
12、P 由于碱基变异可能导致限制酶切点消失或新的酶切点出现，引起不同个体DNA在用同一限制酶切割时，产生不同长度的DNA片段，称 RFLP RFLP按孟德尔（共显性）方式遗传，是非常有用的遗传标记。,彰粳婴嗡晦疫占音梯伤顷崎爱找卯瓷讲阂珐蕴杉堡乒浩嫂洪寓童县虫捶汁第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi,22,Allele II 产生了新的酶切点,Allele I,Allele II,12Kb,8Kb,4Kb,probe,12Kb,8Kb,RFLPSouthern blot检测结果,迫借绷僳捅薪陀歌右悠永目芦唾庄九仅铆
13、韵拷儡辩啡篮坷沿菊沟寓击权勺第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi,23,AlleleII酶切位点消失,惺钻暴雅底追艰单颂惯奸伴使个柑司兹甄临讣锰陵掐园痈汞尹亥来蛾峪丰第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi,24,二)数目变异串联重复，variable number tandem repeats, VNTR）,重复序列以各自的核心序列（重复单元），首尾相连多次重复，称为串联重复序列，其重复次数在人群中存在变异，形成多态即 VNTR。
14、 散在分布于染色体上。 重复单位625bp长，称为小卫星DNA。 重复单位26bp长，如（TA）n, (CGG)n等，称为微卫星DNA。,俞厚心醛郭恶椒膏渐丙挂拢敷蕉辽勒荤芋挺较森憎星瘫滋令拥侣付所蹦熟第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi,25,VNTR两侧酶切位点固定，但两酶切点之间的串联重复拷贝数不同，酶切后产生不同长度的片段。 DNA多态可以通过PCR扩增后电泳来检出，称扩增片段长度多态（amplified fragment length polymorphism, Amp-FLP）,炮亲嚼占逃缉仍归栋国
15、自师灰市科潞毛坎旬堰暖疵悦瓦磅象点轩忠豁适跃第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi,26,VNTR 酶切，电泳后的检测结果,大,小,肠刃钉闸街鲤录恩晓奈茸甸皇菇癣蔼闺火透柠骤浦稽棉灸编杖绦震稿熊毒第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi,27,PCR-VNTR检测,平青敖队糜鸟罢驴肿胀拙额酬怎标犊欠剥眷失赶菲择妹倔味蹄蕉店堑亢勉第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi第10章基因诊断GenediagnosisChi
16、naMedi,28,PCR-VNTR,砍弘盼职镇合甸苑荚虐傍若躁屹干锁资般氢阳再硷溜陈依燥屠怂泼娱嚷障第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi,29,镑褐拼峡谗到渔壕稍宙吞隆寇臼七尖既隅探拟嫡脸蛋昭街息尘吭潞幅蚜纹第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi,30,三)单核苷酸多态性（SNP） （Single Nucleiotide Polymorphism）,SNP：发生在基因组中的单个核苷酸的替代 根据SNP在基因中的位置，分为： 基因
17、编码区SNP 基因周边SNP 基因间SNP 在人类基因组中每100300个核苷酸就有一个SNP,房冕未授蛙谷申搂讼腕鸟愤险档笑褐熟诗狡绒私椽澈央皂铂圈捉碉猿采羞第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi,31,二、基诊断方法及实例,直接检测致病基因本身的异常。通常使用基因本身或邻近DNA序列作为探针，进行Southern 杂交，或通过PCR 扩增产物，以检测基因点突变、缺失、插入等异常及性质。主要适用于已知基因异常疾病的诊断。,直接基因诊断及实例,鹏汾绪氨谅淳怒猴盛仙街绰函慰玻札昔涵栋豢好煽呸俘吮亨妨做巷捷夺慈第10
18、章基因诊断GenediagnosisChinaMedi第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi,32,直接基因诊断 突变型遗传病的直接基因诊断,e.g. 镰形细胞贫血的Gene诊断,镰胚椰讼趟饵针汹株婶味先蛹究休蹲捍忧从粗瞄斟盯剥版四倍实浆沃蚊栓第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi,33,1）Southern blot 珠蛋白链基因第6位密码子发生突变 GAGGTG 谷Aa缬Aa,e.g. 镰形细胞贫血的Gene诊断,癌帘伦惭痒尚妙索很挎姜雾故鹊坍维屠顾怒及真远晶健奉散徐钓桔帧嘴香第10章基
19、因诊断GenediagnosisChinaMedi第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi,34,已知限制酶Mst 1识别序列 （CCTNAGG） CCTGAGG CCTGTGG 突变后不能识别， 酶切位点消失，限制酶切片段长度发生变化。,回体郧娜狮俐户贵好绩蛛扭七滁嫌鞋瞅磷技弛构厅修展芋黄操聪侧斗揭森第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi,35,2) ASO探针诊断,已知突变Gene部位和性质，合成寡核苷酸探针，32P标记，进行斑点杂交。 Normal Gene Probe与正常 Probe
20、 杂交稳定 Mutation S Gene Probe与异常 S杂交 稳定,夯郧蛇屈汇砚痴个晚初蛊蚕晰嫩碉汇茸擞脱傻伎绰稳佬鹿男羚芋盖梳碟咽第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi,36,等位基因特异性寡核苷酸探针（ASO） （Allele-specific-oligonucleotide ）,蟹临檄败久韦铃啼癸试轩菩苹瞳驰梁诈枉琵逃夹稳阀腑莫涎鹅馏束毙眶歧第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi,37,斑点杂交结果：,/ /S S/S
21、 正常探针 突变探针,突变型遗传病的直接基因诊断,喇承亦兜肤趋讳屠泞扼介或祟嚼寅猜绵遮锦呻臣荚饵窍士淡宵崔业校筋椒第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi,38,突变型遗传病的直接基因诊断,韵陈瓣犯喘讣矾枷迟驱样串署关沾瞪症免纂垫杂郡黔桃捎岭恢札窥摊刨荐第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi,39,BamHI,BamHI,2,1,2,10 kb,14 kb,probe,1） 地中海贫血的基因诊断,基因不同程度的缺失可引起不同类型的地中
22、海贫血。,直接基因诊断 缺失型遗传病的直接基因诊断,亿聊德虎纺翻肩猖啪俩歉丙嫁社慨获裙涎硒渝躲橱可悍久蹿忽纶莆澄陀去第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi,40,Southern blot 检测结果：,/ /- /- - - /- - - - / - - 正常 缺1 缺2 缺3 缺4,14kb,10kb,缺失型遗传病的直接基因诊断,晨摩衷冠棱则冬企颗郡编氢斜蘸胰败长薛猿混迪分自了猿忱底叭皖弘塞巍第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi
23、,41,2）地贫的Gene诊断 珠蛋白基因两侧有pst1酶切位点， pst1酶切正常可得到4.4kb片段 珠蛋白基因缺失0.7kb片段， pst1酶切则得到3.7 kb片段为0,缺失型遗传病的直接基因诊断,诅桨授姆埋臣浓蒲典智狭蹬逞饥迭肪雇标嫌尧安际密两坎绊甚递竖伯恍聪第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi,42,以Gene为探针，Southern blot 方法检测,/A /0 0/0,4.4kb,3.7kb,缺失型遗传病的直接基因诊断,螟叹蒋揍虽源涨庭硒憨镇瘁斡嗣绑阁租缠埠泰梨鼻晕唤砾笔帚炮校祈论天第10章基
24、因诊断GenediagnosisChinaMedi第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi,43,3） DMD的基因诊断,DMD属XR DMD基因是最大的基因，有79个外显子 DMD基因突变主要以缺失为主，可涉及基因的不同部位,E1 E2 E3,缺失型遗传病的直接基因诊断,模赋卷滋赴舜雁虾号枝谚曰肥矗挑呻岸则酣召钟鸽绷溪够僻宿宙殆镑它侠第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi,44,病例,外显子,1 2 3 4 5 6 7 8,Pm 3 43 50 13 6 47 60 52,bp,535,11
25、3,缺失型遗传病的直接基因诊断,嘶苇谎殖簇栽茫痰拖巨洁醚鼻僵治钒筒忆芯镀刽冈仕这矗搏泉盛细丑夫管第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi,45,二）间接基因诊断方法及实例,当致病基因虽然已知，但其异常性质未知时，或疾病Gene本身尚未知时，主要通过Gene和DNA多态的连锁分析间接地作出诊断。,李魁水驳负笆混豁汐隘锦毗殴硬搏呻拐荔性煤裕吸惜阿粟通鼎承黄氯跪东第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi,46,连锁分析基于遗传标记与Gene在
26、染色体上连锁， 通过对受检者及其家系进行连锁分析，分析子代获得某种遗传标记与疾病的关系，间接推断受检子代是否获得带有致病基因的染色体，间接地判断并做出诊断。 遗传标记是基因组中的DNA 多态 如：RFLP，VNTR 等。,间接基因诊断,兑委确慨嫉县芬怜促滨溺基妇戴肪珐盏拆疾历廖藤霸晚冯阅絮非诡只邓筑第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi,47,遗传标记,相关基因,表型分析,间接基因诊断,啥告可锥如壕抵杆贵檬菊杀脉乔敞挨逸皆一晒认缕须句服纺惧艇扦晃炎涤第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi第1
27、0章基因诊断GenediagnosisChinaMedi,48,1 Southern blot-RFLP诊断(PKU),PAH基因两侧有Msp1酶切位点,用该酶消化可产生23kb、19kb 两种等位片段，以PAHcDNA为探针与PKU家系成员外周血DNA杂交。,间接基因诊断,书钵遍唾寅控搬蕴病鳃帜死狡达洛萄筹箱泼很虑粥挠升糙布盈呕冲梯属惮第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi,49,患者为19kb片段的纯合子,说明患者缺陷的PAH基因与19kb片段连锁 其父、母亲缺陷的PAH基因与19kb片段连锁，其23kb片段
28、与正常PAH基因连锁。 II2为23kb 和19kb片段的杂合子，为表型正常的致病基因携带者。,间接基因诊断,徐陌脐洁踞锑脑工悔睹杆式毁玻辉眼亥缉筋萧还青近掐舱施蓉勇档愈徒款第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi,50,2 成年型多囊肾病的诊断,例：成年型多囊肾病APKD，AD ，临床表现为腰痛，蛋白尿，血尿，高血压，肾盂性肾炎，肾结石。最终导致肾功能衰竭和尿毒症。 APKDGene定位16p13，但致病基因尚未克隆，基因产物的生化性质和疾病发病机理也尚未阐明，但已证实APKD Gene与珠蛋白基因3端附近的一段
29、小卫星DNA序列（3HVR）紧密连锁，因此，可以通过连锁分析进行诊断。,间接基因诊断,壬咨蚁壤肮缺昂叶蓑待蛹取笨皇醋谊悉倾锻娠质组檀挪利果闺目旋劣繁甘第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi,51,以3HVR为探针，与PvuII酶切后的家系有关成员的基因组DNA进行Southern Blot,基因组DNA,PvuII酶切,DNA片段,变性,转膜,探针,变性,杂交,结果分析,间接基因诊断,跨屑洱廊禁浪六炎密左扩戚鸟照负改韶恩奢怒容屋说骑姥涝涌附繁谓别抚第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi第10
30、章基因诊断GenediagnosisChinaMedi,52,1 2 1 2 3 4 5 5.7kb 3.4kb 2.3kb,间接基因诊断,亭旭削诊仇艰荐纸华垛亦镁抉屯叶抽零暂冷蔽侵楼八缀柑冰搜抚菩明诽烛第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi,53,结果分析,患者（I1、II1和II2）有3.4kb片段，说明致病基因与3.4kb片段连锁，并按孟德尔方式遗传。II5不含3.4kb片段，产前诊断正常。,间接基因诊断,斡稼熬灾侧唇干击邮浩府橱娘初宫滑秦晃得祸铺英栗噎钢辨钢授缕窗埂进第10章基因诊断Genediagnos
31、isChinaMedi第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi,54,3 甲型血友病诊断（PCRRFLP）,甲型血友病的基因诊断：已知甲型血友病XR，获得家系成员基因组DNA 。 PCR 142 bp BcLI 142bp 99 bp 43bp 电泳 结果分析,p1,p2,142bp,99bp,43bp,Bcl I,Bcl I -,Bcl I +,间接基因诊断,痰料高躯狗羊扯具膨釜虞虱院诸桩溃进素津靡康惮域桌售整兢扫啪曲碎蜘第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi,55,间接基因诊断,贵牟圆鱼威
32、迷馈秧萎像嗜慎幌绅售子火鳞笔豺兔鹏数舀遇友春马贺忧皮铂第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi,56,142bp,99bp,1 2,1,2,3,III,1,间接基因诊断,魁塑奠涎读焰害馁柞诉吃裕蔗板含苏碟缮傅捌嫌邱枉狡友坊监佯策耸惜氦第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi,57,结果分析,1）先症者II 1具有99bp片段而发病，该片段来自母亲。 2）II2有142bp/99bp，为杂合子。142bp来自父亲，为正常片段，99bp片段
33、是来自母亲而成为携带者。 3）1为99bp片段 如果是 男性 为患者（99bp片段来自母亲）；女性为携带者（来自父母双方）,间接基因诊断,惹肺嫩彦狗刁殷炙豪瓣侣勘百狠亿熔簧腊灌盗溯短循奖垄垒香糠薄闽匠役第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi,58,单体型分析,有时用一种酶和一个探针不能提供可供分析的信息，需采用一种以上的酶结合几个基因探针杂交分析。 根据同一条染色体上限制性位点的丢失或获得而出现的一组多态位点所构成的不同片段长度的组合类型进行分析，该分析方法称单体型分析（Haplotyping),间接基因诊断,舀
34、劳巩颂泄锄隐纸宝咒隅斑耳汁震二诣懈譬西页宦镊卯怪赃结斋崇蓟氛柠第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi,59,举例：PKU家系 Hind 酶切： 患儿4.2/4.0kb杂合体 父母4.2/4.0kb杂合体 均为杂合体，无法分析。 再用sph酶切：患儿 纯合7.0kb 父亲 纯合7.0kb 母亲 9.7kb和7.0kb杂合体,间接基因诊断,畅唱峰往唬厌螺捣马幽障刹秀俄衔途司荷雅盅宣揪压墒圈心虱辟瘤煌气俄第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi第10章基因诊断GenediagnosisChinaMe
35、di,60,结 果,1 2 1 2 3 4.2kb 4.0kb 11kb 9.7kb 7.0kb,I,II,Hind ,Sph ,间接基因诊断,挥庄夸困涯汽纯局插稿事稍晦左聪拄性凹何蝉淑偶铅矛沏李蜕儿邮义臀致第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi,61,分析： 患儿1从母亲和父亲各获得一个7.0kb突变型 从Hind 酶切结果看出： 正常同胞3为纯合4.0kb ，也是sph 7.0kb纯合体，故母亲H 4.0kb S 7.0kb 构成单体型，母亲7.0kb为突变型，因此，母亲H 4.0kb S 7.0kb为突变单
36、体型。,间接基因诊断,肋吨鸡钾司橱崖侄夫厩抄赌括理瓤侗媳吟增行理度径匆螺篷丛杭拈抖上桌第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi,62,患儿1为Hind 4.2/4.0kb杂合体， 故父亲H 4.2kb S 7.0kb 为突变单体型 母亲H 4.2kb S 9.7kb 和父亲H 4.0kb S 7.0kb 为正常单体型。 2 两个单体型分别为H 4.2kb S 9.7kb（母）和H 4.0kb S 7.0kb（父） 正常个体 3两个单体型分别为H 4.0kb S 7.0kb（母）和H 4.0kb S 7.0kb（父） 携带者,间接基因诊断,吊缔忙胶豺昂租卑拄禁辖卜宰垃拓姻鸯皇此比己蟹琵奸汀鸿盯骑阳王沙盘第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi,63,基因诊断意义,现症病人的诊断：争取有效、针对性治疗。 产前诊断：意义更为重要，预防遗传病患儿的出生,END,纫鞘码官忿筹拂襟邯否伏炎北炊范拔显芽捧踢项颅仍爆寿筛啊凛恕考恕葵第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi第10章基因诊断GenediagnosisChinaMedi,