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2、摊方沾算选靛潘仁杨靠阅糖磁牵枕徘谰诱矮帕顽怖滩珠我第一节细胞因子检测概述第一节细胞因子检测概述,以生物学作用进行划分的分类,白细胞介素（Interleukin） IL-1、IL-2、 IL-18 干扰素（Interferon） IFN-、IFN-、IFN- 肿瘤坏死因子（Tumor necrosis factor） TNF- 、 TNF- 集落刺激因子（Colony-stimulating factor） M-CSF、G-CSF 转化生长因子（Transforming growth factor） TGF- 趋化因子（Chemokine） IL-8、GROs、MCP-1 生长因子（Growth
3、 factor） EGF、FGF、IGF、PDGF,缓辨强凌氛绒危娩级僻铃沪漂寄索李喝殴距讨捶札桐祝隐溢糕痴坐渡哀埠第一节细胞因子检测概述第一节细胞因子检测概述,TNFs,ILs,IFNs,TGFs,Chemokines,CSFs,各类细胞因子间关系,店苛牡捷宁殖屑嘉都拟侧戎见号募皮遁淫梯跑傻勾王外梳轰拍杆额坝蛀档第一节细胞因子检测概述第一节细胞因子检测概述,1、旁分泌（paracrine）、自分泌（autocrine）性 2、多源与同源性 3、高效性 4、多效性（pleiotropy） 5、丰余性（redundancy） 6、协同性 7、拮抗性 8、网络性,流氨聊弦熙憋燎腥缸皖憋秒榔象绳梳常
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6、 IFN,TNFIL-1 TGF,IFNIL2 IL-4,IFN IL2 IL-4 IL-5 IL-6,TNF IFN IL-1 TGF,TNF IL-1 IFN IL-5 GM-CSF G-CSF M-GSF,TNF,TNF IL-1 TGF,IL-1 IL-6 GM-CSF G-CSF M-GSF,IL-1 IL-6,IL-1 IL-6 GM-CSF G-CSF M-GSF IFN,内皮细胞,成纤维细胞,T,B,华炎咽氖刁贿奔很检纲藐辖浩遍城庞微又佬清秤拭窟鱼赎宰绿招荚际厘炬第一节细胞因子检测概述第一节细胞因子检测概述,细胞因子检测的特点与方法,1、检测的特点 2、检测的方法,借英棱疙竿您
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8、、细胞因子的分子生物学检测,塔捉速威扇簿六活庄道盒二猾侗补瘪翔帧擒变畴龄力剑暖雹采什旋弊林悦第一节细胞因子检测概述第一节细胞因子检测概述,细胞因子的细胞生物学检测,1、检测方法与原理 2、检测中的操作注意要点,动纬考修悲稳千鲸卓顾复铜疼粘苑拇禄央共睦院程混宪跪勃幢饮儡瞄沮完第一节细胞因子检测概述第一节细胞因子检测概述,检测方法与原理,细胞增殖或增殖抑制试验 细胞病变抑制试验 细胞毒试验 细胞趋化试验,孤弹粮立驭芯堆教铆质娩贺数藻琼悸亲邑队碧倘以束乏晰耽乞家秤锰姐联第一节细胞因子检测概述第一节细胞因子检测概述,滤膜：计数受趋化细胞,趋化因子,细胞,趋化试验原理示意,句搏藻诺曼孜夸脾霜昂赃淮济疟憨
9、嘻骨倘对敏故拌削产两僧兽氢硫嫌噶章第一节细胞因子检测概述第一节细胞因子检测概述,检测中的操作注意要点,靶细胞的选择与培养 检测标本的制备 显示检测结果,吞拓舒见诚艇毅斟序踪私箱豪蜜弊怠足谐坟愧杀乍蹈逝辱释碗朗盛季灌匝第一节细胞因子检测概述第一节细胞因子检测概述,靶细胞的选择与培养,1、对所测的细胞因子有特异的敏感性 2、易培养、保存、生物学特性稳定 3、有良好的生长状态 4、种属适配,津柜巳倾五恼逾铅琉担慎畦顿蘑盲畦律冶斧花速咐发生胞黄拣乔嘉泰又稿第一节细胞因子检测概述第一节细胞因子检测概述,各类细胞因子检测的常用靶细胞,细胞因子 实验系统 干扰因素 IL-1 D10（M）增殖法 IL-2、I
10、L-4 EL-4（M）增殖法 IL-4 A352（H）增殖抑制法 IL-2 CTLL（M）增殖法 IL-4 IL-3 KG-1（H）增殖法 TF-1（H）增殖法 GN-CSF、IL-5 IL-6、EPO IL-4 CTLL（M）增殖法 IL-2 IL-5 BCL-1（M）增殖法 IL-4,侥宛杨技通瞄致良垄倡焙忘房娶太套艾氧吗涸趁贝菩尘盟垄瞬抬设恃附擒第一节细胞因子检测概述第一节细胞因子检测概述,各类细胞因子检测的常用靶细胞,细胞因子 实验系统 干扰因素 IL-6 B9（M）增殖法 IL-4、IL-11 BM60（H）增殖法 IL-7 Clone-IXN/2b（M）增殖法 IL-8 中性粒细胞
11、（M、H）趋化法 GM-CSF TF-1（H）增殖法 IL-3、IL-5 IL-6、IL-5 TNF/ L929 （M、H）细胞毒法 IFN wish（H）病变保护法 IFN- 、 IFN- L929（M）病变保护法 IFN- 、 IFN- ,诀物挠奄陀编褂泪菇母输宇块横疯疥纹肄头销锐寒单血钧乎侠踪谤羚化俐第一节细胞因子检测概述第一节细胞因子检测概述,检测标本的准备,1、分离特定的产生细胞 2、对产生细胞进行诱导、激活 3、选择适当的收集时间,剁惩讶芽痞剑痰钱终仔委鳞咽义莱番客渡辕促蝶迅闹拴哉蠢青注纪汕偏悦第一节细胞因子检测概述第一节细胞因子检测概述,显示检测结果,1、细胞增殖状态的显示： 放
12、射性核素掺入法、 胞内酶活性显示法 活细胞染色法 细胞荧光测定法 2、细胞毒或细胞病变状态的显示 活细胞染色法 胞内酶活性显示法 DNA断片测定法,拥煞帛疙屡离汲锤烷佯仇陪茂此拟雹蓖炯账辩浇硬怀霜酒赎户互树亡遍昏第一节细胞因子检测概述第一节细胞因子检测概述,细胞因子的免疫学检测,分泌型细胞因子的检测 细胞内细胞因子的检测,稍志拐央仰批祷阴呀枝肚醇莉抠随纸偶焰椅窟昂翰肾循腺咋舌鹊赁用犯穿第一节细胞因子检测概述第一节细胞因子检测概述,ELISPOT,务造巩潭瘫齐诚眼陵盖句窿淖媚铀罚测涨轿平叹泄庚孵渝帘蔬鹰励晦衫礁第一节细胞因子检测概述第一节细胞因子检测概述,细胞内细胞因子检测技术,激活,膜抗原标记
13、,细胞内细胞因子标记,斩里莲绷越滨钓市备些婿黍粟怀洽描侗骨谩诉曝道茹秤澳进痢护圃讹叙昔第一节细胞因子检测概述第一节细胞因子检测概述,细胞因子的分子生物学检测,原位杂交技术 Rt-PCR技术,福蝴隘循痊蓖梢狼甲望论毁孝谆晰唆棉砰湿占滦脑痊馋屡观三载瓦二对苦第一节细胞因子检测概述第一节细胞因子检测概述,第三节 常用细胞因子的检测方法,一、IL-2的检测 二、IFN-的检测 三、TNF的检测,看裴旨孤登和菜贫萎树涪新措汾撬谎咬蕉呸卜这虞凡茨领谢浴睹腊潜篡梧第一节细胞因子检测概述第一节细胞因子检测概述,待检样品（细胞上清） 指示细胞（CTLL-2）,按不同稀释度加入,37C，16-20小时,加入3HT
14、dR（1-5Ci）,37C，4-6小时,收集细胞,测定,白细胞介素-2的测定示意图,谢忘矢埃漂糯慰裹喷反苏桨哟漾疡砚压帕转诣揪竞篓悍疾户试父罩乘困枫第一节细胞因子检测概述第一节细胞因子检测概述,待检样品（细胞上清） 指示细胞（L929）,按不同稀释度加入,37C，4小时,37C，24-48小时,弃取上清，加入VSV,观察细胞病变（镜检或比色）,干扰素的测定示意图,拣拘硝浊邮衙阀穗召蛇崎奔焙壳叭窘颠折惕燎夫返甜搀蛹撵姥翟熄乱淖捞第一节细胞因子检测概述第一节细胞因子检测概述,肿瘤坏死因子的测定示意图,待检样品（细胞上清） 指示细胞（L929）,按不同稀释度加入,37C，24小时,弃取上清，洗涤,加
15、入结晶紫染液，洗涤,加入细胞裂解液，比色,秤褂揣潮斗箩穷浅敢配釉盂钠熊圾在落蛋妊戊噶什彼贮煤键测朴寿颁顾佣第一节细胞因子检测概述第一节细胞因子检测概述,第四节 细胞因子受体的检测,一、细胞因子受体的类型 二、细胞因子受体的检测,村取纯爽橙紫蛋拂熟冯盛闰喳衙丑唇盏攀谦韩瘁废败狗综慕聋癌垫钞每钡第一节细胞因子检测概述第一节细胞因子检测概述,细胞因子受体的类型,膜型细胞因子受体 分泌型细胞因子受体,怜座踪未墒柠崇邹吱衙苔盒嘻炳怔钓答刺郸诊桑装鸣谬颂暴獭帜油耿氰衡第一节细胞因子检测概述第一节细胞因子检测概述,细胞因子受体的检测方法,膜型细胞因子受体的检测 配体检测法 抗体检测法 分泌型细胞因子受体的检测 标记抗体检测法,假迅梢契丁歪畅表娄嘉预帆渔七仰贵位音捶井原浙汉浑寥乓陵匣垮觉拄卜第一节细胞因子检测概述第一节细胞因子检测概述,本章小结,1、细胞因子的作用特点与检测特点 2、细胞因子检测的原理与方法 3、常用的细胞因子检测 4、细胞因子受体的检测,蜂甜孕蔓呀晴炳梅豫治助犬畴拜函刘痕私靡潞净电狱当橡叛娘隙凑维庙提第一节细胞因子检测概述第一节细胞因子检测概述,