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1、原 理 在细胞的生长周期中，中期染色体的长短、 大小、恒定性正适合我们对其进行分析、研 究。 因此利用人工的方法，使大部分分裂细胞处 于中期而不向后期转化，并获得之，经处理 ，制片后观察分析。 器材与试剂 器材 ： 人外周血5ml。 培养箱、普通光学显微镜、离心机、水浴箱、天 平等。 试管架、刻度离心管、滴管和滴头、酒精灯、冰 载玻片等。 器材与试剂 试剂： 肝素 含10%小牛血清RPMI1640 植物血凝素（PHA） 秋水仙素（5微克/毫升） 0.075MKCl， 固定液（甲醇/冰乙酸3:1） Giemsa染液。 操 作 1、采血： 取血3-5ml,肝素抗凝。 2、接种： 5ml培养液中加入
2、0.3-0.5ml全血并摇匀， 每份血样接种2瓶，置37,培养72h。 3、秋水仙素处理：终止培养前1.5-2h加秋水仙素（ 终浓度为0.07 ug/ml），混匀，37继续培养。 4、收集细胞 ：将培养细胞混匀吸入刻度离心管（2 瓶培养物吸入1支刻度离心管内），1500r/min离 心，10min。 5、低渗处理：弃上清，加8ml 0.075M KCl溶液，混 匀，置37水浴20min。 操 作 6、预固定 ：低渗处理后，加1 ml固定液混匀，5min 后1500r/min离心，10min。 7、固定 ：弃上清，加8 ml固定液，混匀，室温静置 30min，1500r/min离心， 10min
3、。 8、再固定 ：同上（省略）。 9、制备细胞悬液 ：弃上清，视细胞数量多少加适量 固定液制成细胞悬液。 10、制片 ：取细胞悬液2-3滴，滴于冰玻上，并迅速 吹片，酒精灯火焰烤干。 11、观察： Giemsa染色，5min，自来水冲洗，镜 检。 结 果 光镜100倍下人染色体G带照片 注意事项 培养温度应严格控制在370.5。 培养液的pH值7.40.1，偏酸细胞发育不良，偏 碱则细胞出现轻度固缩。 PHA的质量和浓度很关键，它对淋巴细胞的刺激效 应有个体差异较大。 （肝素） 秋水仙素一般最终浓度以0.04-0.08ug为宜，处理 时间为1-4h。 低渗的浓度与时间应掌握好。 固定液应临用时新鲜配制，固定时一定要彻底打 匀。 单击单击 此处编辑处编辑 母版标题标题 样样式 单击此处编辑 母版副标题样 式 8 LOGO