《2018年实训四微生物细胞数计数-文档资料.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《2018年实训四微生物细胞数计数-文档资料.ppt（12页珍藏版）》请在三一文库上搜索。
1、 使用血球计数板计数单细胞微生 物的数量。 一、实验目的一、实验目的 血球计数板是一块比普通载玻片厚的特血球计数板是一块比普通载玻片厚的特 制玻片制制玻片制成。玻片中央刻有四条槽，中央两成。玻片中央刻有四条槽，中央两 条槽之间的平面比其它平面略低，中央有一条槽之间的平面比其它平面略低，中央有一 小槽，槽的两边的平面上各刻有小槽，槽的两边的平面上各刻有9 9个大方格。个大方格。 中间的一个大方格为计数室，它的长、宽各中间的一个大方格为计数室，它的长、宽各 为为1mm1mm，深度为，深度为0.1mm,0.1mm,容积为容积为0.1mm0.1mm 3 3 。计数室。计数室 有两种规格，一种是把大方格
2、分成有两种规格，一种是把大方格分成1616个中格个中格 ，每一中格分成，每一中格分成2525小格，共计小格，共计400400小格；另一小格；另一 种规格是把大方格分成种规格是把大方格分成2525中格，每一中格分中格，每一中格分 成成1616小格，总共也是小格，总共也是400400小格。小格。 二、实验原理 血细胞血细胞 计数板计数板 正面、正面、 侧面与侧面与 正面方正面方 格放大格放大 示意图示意图 因此，在计算上可按下列两种公式进行：因此，在计算上可按下列两种公式进行： 1. 16251. 1625计数板的计算：计数板的计算： 细胞数细胞数/mL=/mL= （100100小格内的细胞数小格
3、内的细胞数/100/100）400 10000 400 10000 稀释倍数稀释倍数 2. 25X162. 25X16计数板的计算：计数板的计算： 细胞数细胞数/mL= /mL= （8080小格内的细胞数小格内的细胞数/80/80）400 10000 400 10000 稀稀 释倍数释倍数 式中，式中，400400为计数板的小格总数；为计数板的小格总数； 1000010000为由计数室为由计数室0.1mm0.1mm 3 3 换算成换算成lmLlmL体积的体积的 系数系数 二、实验原理二、实验原理 1.1.材料材料 酵母菌悬液酵母菌悬液 2.2.用具用具 显微镜、血球计数板显微镜、血球计数板 三
4、、实验材料和用具 四、实验方法 1.1.取清洁干燥的血球计数板，在计数室取清洁干燥的血球计数板，在计数室 上面加盖玻片。在显微镜下找到计数室。上面加盖玻片。在显微镜下找到计数室。 2.2.取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片 边缘滴一小滴边缘滴一小滴( (不宜过多不宜过多) )。菌液可自行渗。菌液可自行渗 入计数室。计数室不得有气泡，然后置高入计数室。计数室不得有气泡，然后置高 倍镜下计数。倍镜下计数。 3.样品浓度要求每小格内有510个菌体为宜。 4.计数时，用1625的计数板要按对角线方位 ，取左上、左下、右上，右下四个中方格(即 100小格)计数酵母菌液，用2
5、516的计数板， 除计数上述对角线的四个方格外，还需数中央 一个方格的酵母菌数(即80小格)。 四、实验方法 5.每个样品重复计数23次，取其平均值， 按上述公式计算每毫升菌液所含的酵母细 胞数。 6.计数完毕，将计数板在水龙头上冲洗，切 勿用硬物洗刷，自行晾干或吹风机吹干， 或用擦镜头纸轻轻擦拭。 四、实验方法 使用血球计数板对样品酵母菌液进行计 数，并计算菌液浓度。 五、实验内容五、实验内容 将微生物计数的结果填入下列空白 1.第一次计数的酵母细胞数目 个。 2.第二次计数的酵母细胞数目 个。 3.从两次的计数结果中求出酵母细胞的平均数目 4.稀释倍数 倍。 5.求出每毫升酵母菌液中的细胞数 个。 六、实验报告六、实验报告 七、思考题 1.为什么两种不同规格的血球计数板测 定同一样品时，其结果是一样的？ 2.使用细胞计数板应注意什么问题?