最新药物分析药品质量标准概述-PPT文档.ppt

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1、2） 兽药 是指用于畜禽等动物的药物, 包括能促进动物生长繁殖和提高生产性能的物质。,第一节,3） 药物分析学,是一门采用化学的、物理的或物理化学的方法和技术，研究药物及其制剂的的化学组成和测定药物组分含量的原理和方法的综合性应用学科。是药学科学的重要组成部分。,第一节,4） 药物分析的内容,检测药物的性状 鉴定药物的化学组成 检查药物的杂质限量 测定药物的含量,第一节,5） 药物分析常用的方法,容 量 法,化学分析法,重 量 法,仪器分析法,光 谱 法,色 谱 法,电 化学 法,物理常数测定法,第一节,光谱分析法,质谱法（ MS ） 高效毛细管电泳（HPCE） 电感耦合等离子体原子发射光谱

2、(ICP-AES ) 气（液）质联用（ GC/LC-MS ） 傅立叶变换红外分光光度法 FT-IR,其他分析法,第一节,第二节 药品质量标准与药典,一、质 量,质 量：指产品所具有的、能鉴别是否符合规定的特性。 Quality: 产品或服务满足明确或隐含需要的特征和特性的综合。,第二节,二、药品质量,药品质量特性：疗效确切，使用安全、毒副作用小、稳定性好，有效期长、给药方便、价格便宜、包装适合、便于贮存、运输和使用。 有效性和安全性,三、药品质量标准,药品质量标准是国家对药品质量、规格及检验方法所作的技术规定，是药品生产、供应、使用、检验和药政管理部门共同遵循的法定依据。,第二节,兽药的质量标

3、准，是国家为了使用兽药安全有效而制订的控制兽药质量规格和检验方法的规定；是兽药生产、经营、销售和使用的质量依据，也是检验和监督管理部门共同遵循的法定技术依据。,第二节,兽药的质量标准，一般应包括以下内容： 兽药名称、结构式及分子式、含量限度、理化性状、鉴别项目及方法、含量测定方法、检查项目及方法、作用与用途、用法与用量、注意事项，制剂的规格、贮藏等,第二节,1.中国兽药典及中国兽药规范,2. 行业标准：兽药暂行质量标准、 进口兽药暂行质量标准（中兽监）,我国现行兽药质量标准,第二节,3. 地方标准：广东省兽药标准汇编,是国家关于药品标准的法典，是国家管理药品生产与质量的依据，和其他法令一样具有

4、约束力。,第二节,四、 药典,（二）内 容,药典的内容一般分为凡例、正文、附录和索引四部分。,现行药典一般分为一、二两部。另还专门出版配套资料，如药品红外光谱集。,（一） 基本结构,1）凡例（General Notices） 是解释和使用药典、正确进行质量检定的基本原则，把一些与标准有关的共性问题用条文加以规定，以避免在全书中重复说明。,3） 附录（Appendix） 附录部分记载了制剂通则，兽用生物制品通则，一般鉴别试验，一般杂质检查方法，有关物理常数测定法，通用分析法，试剂配制法等内容。,1、制（修）订兽药质量标准的原则,质量第一的原则，确保药物的有效性和安全性是前提条件 临床内服药严于外

5、用药；注射药严于口服药 考虑生产实际，既要保证质量，又有利于促进生产 应遵循国家兽药标准工作管理办法,2、制（修）订兽药质量标准的基础,新药质量研究工作及其资料 （临床用药品质量标准和起草说明书； 生产用药品质量标准和起草说明书） 是制订药品质量标准的基础,3、制订兽药质量标准的内容,3、修订兽药质量标准的内容,第四节 全面控制药品质量的科学管理,GCP 药品临床试验管理规范（良好药品临床试验规范）1999.9.1 GMP 药品生产质量管理规范 1999.8.1 GSP 药品经营质量管理规范（良好药品供应规范）2000.7.1 GLP 药品非临床研究质量管理规范（良好药物实验研究规范）1999

6、.11.1 GAVP 中药材生产质量管理规范,第一节 药品检验的程序,一般包括：取样、检验（性状、鉴别、检查、含量测定）、出具检验报告。,第二章 药物分析基本知识,一、基本程序,1、取样（Sampling） 指从一批产品中，按取样规则抽取一定数量具有代表性的样品。 要考虑取样的科学性、真实性与代表性 (Random); 对相关情况进行详细登记。,2、检验（Analysis) 原则上按相应标准（规定）进行性状检测、鉴别、检查及含量测定； 获得的检验数据应完整、真实； 试验记录要保存3年以上，备查。,3、出检验报告（Assay report) 是对药品质量的评价，结论要明确、依据充分； 内容（抽样

7、情况、样品检验、结论） 三级签名（章）,为保证实验数据的准确、可靠、公正，国家规定向社会提供公正数据的产品质量检验机构，必须通过计量认证。,第二节 计量认证知识,1） 计量认证 是指计量行政部门对有关技术机构计量检定、测试的能力和可靠性进行的考核和证明。,计量检定、测试设备的性能； 工作环境和人员的操作技能； 相关管理制度。,考核内容,分析,受各种主客观因素影响和限制（分析人员操作技术水平、仪器和试剂、分析方法等），任何测定结果都不是绝对准确的，与真值之间总是存在差异误差（error)。,第三节 误差及数据处理,分析,1）误差 = 测量结果-真值 = 测量结果-总体均值+总体均值-真值 = 随

8、机误差+系统误差 测量结果是被测量的最佳估计 测量不确定度？,2）有效数值及其运算,（1）有效数字定义 k 10m （1k 10的任意数） M为自然数， k的位数即是有效数字位数,（2）有效数字的运算,加减运算：18.3 + 1.454 6 + 0.876 （小数点位数） 18.3 + 1.45 + 0.88 = 20.6320.6 乘、除等：1.10.326 80.103 00 （有效数字位数）1.10.3270.103=0.037 0 0.037,（4) 数值的舍入规则,8 765.43 8 765 （被舍数字第一位5） 1 234.5 1 234；8 765.5 8 766（奇偶规则）

9、1 234.6 1 235；9 876.54 9 877（被舍数 字后5）,验证药分方法的目的是证明所采用的方法适合于相应检测的要求。,第四节 药物分析方法的验证,1）需验证的项目 鉴别试验方法、杂质定量或限度检查方法、原料药或制剂中有效成分含量测定的方法以及制剂中其他成分（如降解产物、防腐剂等）的测定方法、溶出量测试方法,2）验证的内容 准确度、精密度 检测限、定量限 线性、线性范围 耐用性、专属性,1) 准确度(accuracy) 指测量结果与被测量的真值或参考值之间的接近程度。 一般以回收率（%）表示； 或与经典方法进行t检验评价。,2） 精密度(precision) 不同领域概念不一，

10、故在VIM中未定义。 在化学领域中，精密度指在规定的条件下所获得的测量结果之间的一致程度。（重复性、重现性） 一般用偏差、标准偏差S或RSD表示。,3） 检测限和定量限(LOD、LOQ) 指样品中被测物能被检测出的最低量。 指样品中被测物能被定量测定的最低量。,目视法：用已知浓度的被测物，试验出能可靠地目视出特定现象的被测成分的最低浓度或量。 信噪比法 LOD: 31 或 21 LOQ: 101,4) 专属性(specificity) 指在其他成分（杂质、降解产物、辅料等）可能存在下，所采用分析方法能准确测定出被测物的能力，是方法抗干扰程度的量度。,5) 线性和线性范围(linearity)

11、线性：指在一定的浓度范围内，测试结果与试样中被测物浓度呈正比的关系程度。 线性范围：指能达到一定精密度、准确度和线性的前提下，测试方法所适用的高、低限浓度或量的区间。,6) 耐用性（ruggedness) 指在测定条件有小的变动时，分析相同样品所测定试验结果的重现程度，旨为常规检验提供依据。,2.1 性状（Description） 性状项下记述药品的外观、臭、味和一般的稳定性情况，以及物理常数等。,第一节 药品检验的程序,例：苯甲酸 性状 本品为白色有丝光的鳞片或针状结晶或结晶性粉末；质轻；无臭或微臭；在热空气中微有挥发性；水溶液显酸性反应。本品在乙醇、氯仿或乙醚中易溶，在沸水中溶解，在水中微

12、溶。 熔点 本品的熔点（附录 C）为 121124.5。,2.2 鉴别（Identifcation） 判断已知药物及其制剂的真伪；采用一组（二个或几个）试验项目全面评价一个药物。,第一节,2.3 检查(Detection) 包括有效性、均一性、纯度要求及安全性四个方面。 纯度要求即药物的杂质检查，亦称限度检查、纯度检查（Detection of Impurities）,第一节,2.4 含量测定（Assay）,判断一个药物的质量是否符合要求，必须全面准确测定有效成分的含量， 综合考虑鉴别、检查与含量测定三者的检验结果。,第一节,2.5 检验报告(Assay report) 必须有检验人员、复核人

13、员及部门负责人签名或盖章，以及检验单位盖章 。,第一节,标 准（Standard) 为在一定的范围内获得最佳秩序，对活动或其结果规定共同的和重复性使用的规则、导则或特性文件。 (GB/T 3935.1-1996) 其本质统一性,标 准（Standard) 为在一定的范围内获得最佳秩序，对活动或其结果规定共同的和重复性使用的规则、导则或特性文件。 (GB/T 3935.1-1996) 其本质统一性,标 准分类 层级分（国家、行业、地方、企业） 性质分（强制、推荐） 属性分（技术、管理、工作） 对象分（基础、安全、卫生、产品、 方法、环保、管理等）,中国兽药规范是兽药典颁布施行前有关兽药的国家标准

14、，也分为两部，是兽药典的补充。,为保证实验数据的准确、可靠、公正，国家规定向社会提供公正数据的产品质量检验机构，必须通过计量认证。,第一节 计量认证知识,（部门、企事业单位）,1） 计量认证 是指计量行政部门对有关技术机构计量检定、测试的能力和可靠性进行的考核和证明。,计量检定、测试设备的性能； 工作环境和人员的操作技能； 相关管理制度。,考核内容,一、药物的杂质 (foreign、 impurities),药物的纯度是指药物纯净的程度，反映药物质量的优劣。含有杂质是影响药物纯度的主要因素。 药物的杂质是指药物中存在的无治疗作用或影响药物的稳定性和疗效，甚至对动物有害的物质。,杂质包括： 1.

15、 有毒副作用的物质 如：砷盐和重金属 2. 本身无毒副作用，但影响药物的稳定性和疗效的物质 如：水分、异构体 3. 本身无毒副作用，也不影响药物的稳定性和疗效，但影响药物的科学管理的物质 如：Cl-、 SO42-信号杂质反映工艺或纯度？,二、药物中杂质的来源,1. 生产过程中引入,（1）原料、反应中间体及副产物,（2）试剂、溶剂、催化剂类,（3）生产中所用金属器皿、装置以及其他不耐酸、碱的金属工具所带来的杂质(AsPbFe),三、杂质的分类,药物中的杂质按来源分为,一般杂质：在自然界分布广，容易引入药物中的物质 。 如氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属、砷盐、酸、碱、水分、易炭化物、炽灼残渣等。 其

16、检查方法收载在药典的附录中,2. 特殊杂质：指在有关药物生产或贮藏过程中，因其生产工艺或药物本身的性质可能引入的杂质。 随药物的品种而异，如：Aspirin中的游离水杨酸、甾体激素中的其他甾体,来源分为,检查方法收载在药典正文各药品的质量标准中,均规定所含杂质的种类和限量.,四、药物的纯度与化学试剂的纯度,Drugs & Reagents 共同点：,a. 药物纯度又称为药用规格,主要从用药安全、有效和对药物稳定性等方面考虑, 只有合格品和不合格品. b. 化学试剂的纯度是从杂质可能引起的化学变化对使用的影响以及试剂的使用范围和使用目的加以规定,它不考虑杂质对生物体的生理作用及毒副作用.,Dru

17、gs & Reagents 不同点：,化学试剂一般分为4个等级基准试剂、优级纯或特种试剂(光谱纯、色谱纯、农药残留检测级)、分析纯和化学纯,不同点：,例：硫酸钡（BaSO4） 试剂规格 对可溶性钡盐不做检查. 检查：氯化物、铁、灼烧失重等 药用规格 如存在可溶性钡盐则导致 医疗事故. 检查：酸溶性钡盐、重金属、砷盐等,化学试剂不能代替药品使用,Drugs & Reagents,三种检查方法,比较法,灵敏度法,标准对照法,五 杂质检查方法 (限量检查法),操作: 平行试验比较两比色管的颜色或浊度,判断杂质限量是否符合规定.,管2 （对照管）,管1 （样品管）,取限度量的待检杂质对照品配成的对照溶

18、液, 与一定量供试品配成的供试品溶液在相同条件下处理, 比较反应结果, 判断供试液中所含杂质限度是否符合规定.,标 准 对 照 法,在供试品溶液中加入试剂,在试验条件下反应,不得出现正反应. 既以检测条件下反应灵敏度控制杂质限量.,如：蒸馏水中氯化物的检查,5滴 1mL,0.2mg/50mL 4g/mL,灵 敏 度 法,取一定量供试品,在规定条件下测定待检杂质吸光度, 与规定限量比较, 判断供试品中杂质限量.,比 较 法,第二节 药物的杂质限量及其计算,一、杂质限量,在不影响药物疗效、稳定性及不发生毒性的前提下,药物中所含杂质的最大允许量. 通常用百分之几或百万分之几（ppm）来表示,二、 杂

19、质限量的计算,m,m,* 已知：cAs1 g/ml1106 g/ml VAs2.0 ml L=1 ppm= 0.0001% 砷斑法检查Glucose中的As,* 对乙酰氨基酚中氯化钠的检查,对照品溶液: 标准NaCl溶液(10g Cl-/ml),方法：取5.0ml 同法操作比较,浊度不得更大. 计算：氯化物限量是多少(% )？,四、氯化物检查法,（一）原理 标准对照法,样品管,对照管,1.0mL,用水稀释至50mL,6.0mL,0.60g,0.010%,(浓度：10gCl/ml),（二）检查方法 药典附录,除另有规定外，取各药品项下规定量的供试品,葡萄糖中氯化物检查,在暗处放置5min (避免

20、AgCl分解),同置黑色背景上，从比色管上方向下观察，比较即得,（三）测定条件,1. 标准NaCl溶液 10g Cl/ml，50ml供试溶液中含5080g的Cl所显浑浊梯度明显，相当于标准NaCl溶液58ml。,2. 反应需在硝酸酸性条件下进行，且以50ml供试溶液中含稀HNO3 10ml为宜。,a) 加速AgCl浑浊的形成；,b) 产生较好的乳浊；,c）避免弱酸银盐如Ag2CO3、 Ag3PO4以及Ag2O沉淀的形成。,需在硝酸酸性条件下？,（三）测定条件,3. 试剂：硝酸银,5. 避光、暗处放置5分钟后比浊，因AgCl见光易分解。,4. 供试液和对照液稀释后，再加AgNO3溶液，使生成白色

21、浑浊而不是白色沉淀,（三）测定条件,6. 比浊方法：同置于黑色背景上，自上向下观察。,7. 务必遵循平行操作原则,（三）测定条件,（四）干扰及排除,1. 若供试品有色，需经处理后方可检查。,（1）内消色法：倍量法，如枸橼酸铁铵中 氯化物 的检查。,（2）外消色法：如高锰酸钾中氯化物的检查，可先加乙醇适量，使其还原褪色后再依法检查。,a.内消色法 如枸橼酸铁铵中氯化物的检查.,（四）干扰及排除,向供试品溶液中加入某种试剂,使溶液颜色褪去后再依法检查.,例：高锰酸钾中氯化物的检查 因溶液呈紫色,加入适量乙醇,使颜色消失后再检查.,b. 外消色法,（四）干扰及排除,五、硫酸盐检查法,（一）原理 对照

22、法,（二）测定条件,1. 标准K2SO4溶液0.1mg/ml，50ml溶液中含0.10.5mg的所显浑浊梯度明显，相当于标准K2SO4溶液15ml。,2. 反应需在盐酸酸性条件下进行，且以50ml供试溶液中含稀盐酸2ml为宜。,3. 试剂：氯化钡,5. 比浊方法：同置于黑色背景上，自上向下观察。,4. 供试液和对照液稀释后，再加BaCl2溶液，使生成白色浑浊而不是白色沉淀,（二）测定条件,*药物中硫酸盐检查时，所用的标准对照液是 A. 标准氯化钡 B. 标准醋酸铅溶液 C. 标准硝酸银溶液 D. 标准硫酸钾溶液 E. 以上都不对,七、重金属检查法,以铅为代表，共有4种方法,系指在实验条件下，能

23、与CH3CSNH2或Na2S作用显色的金属杂质。 五毒/Ag/Cu/Sn/Ni/Co/Zn,第一法 硫代乙酰胺法,适用于溶于水、稀酸和乙醇的药物,1. 原理,悬浊液,操作方法,样品管,对照管,2. 测定条件,（1）用Pb(NO3)2 配制标准铅贮备液（加硝酸防止Pb2+水解），标准铅溶液临用前稀释而成，标准Pb(NO3)2溶液10g Pb2+/ml，适宜比色范围为27ml溶液中含1020g的Pb2+。,硫代乙酰胺法,（2）本法用2ml pH3.5的醋酸盐缓冲液控制溶液pH值为33.5,（3）显色剂：CH3CSNH2,硫代乙酰胺法,供试品如有色，需处理后方可检查。,A. 外消色法：在对照管中加稀

24、焦糖溶液或其他无干扰的有色溶液（指示剂调节）,B. 内消色法,C. 改用第四法，微孔滤膜过滤法,3. 干扰及排除,硫代乙酰胺法,第二法 炽灼残渣法,适用于含芳环、杂环以及不溶于水、稀酸、乙醇及碱的有机药物。,1. 原理：500600炽灼，使有机结合的重金属游离，经处理后，依一法检查。,2. 操作方法,炽灼残渣法,H2SO4,进一步消化,溶解,含钠及氟的有机药物应用铂坩埚、石英坩埚或硬质玻璃蒸发皿（因可腐蚀瓷坩埚，带入大量重金属）,炽灼残渣法,HNO3处理后,必须蒸干除尽NxOy,炽灼温度严格控制：500-600,3. 注意事项,（三）第三法 硫化钠法,适用于溶于碱而不溶于稀酸或在稀酸中生成沉淀

25、的药物。如磺胺类、巴比妥类。,1. 原理 对照法,悬浊液,2. 测定条件,（1）NaOH碱性条件下（5 mL),（2）显色剂：Na2S （5d),硫化钠法,（四）第四法 微孔滤膜法,适用于含25g重金属杂质及有色供试液的检查。 依一法检查，经微孔滤膜过滤后比较色斑。,*重金属检查中，加入CH3CSNH2时溶液控制最佳的pH值是 A. 1.5 B. 3.5 C7.5 D. 9.5 E. 11.5,*微孔滤膜法是用来检查 A. 氯化物 B. 砷盐 C. 重金属 D. 硫化物 E. 氰化物,*Ch.P(2000年版)重金属检查法中，所使用的显色剂是 A. 硫化氢试液 B. 硫代乙酰胺试液 C. 硫化

26、钠试液 D. 氰化钾试液 E. 硫氰酸铵试液,* 葡萄糖中进行重金属检查时，适宜的条件是 A. 用硫代乙酰胺为标准对照液 B. 用10ml稀硝酸/50ml酸化 C. 在pH3.5醋酸盐缓冲溶液中 D. 用硫化钠为试液 E. 结果需在黑色背景下观察,* 现有一药物为苯巴比妥，欲进行重金属检查，应采用中国药典上收载的重金属检查的哪种方法 A. 一法 B. 二法 C. 三法 D. 四法 E. 以上都不对,* 下面哪些方法为中国药典收载的重金属检查方法 A. 500600炽灼残渣后,按一法操作 B. pH33.5条件下，加入硫化氢试液 C. 碱性下，加入硫化钠试液 D. 按一法操作，结果用微孔滤膜过滤

27、后观察色斑 E. 以上都对,八、砷盐检查法,（一）古蔡法 Ch.P（2000）、BP（2000）采用,As毒须严格控制，常有3种方法,1. 原理,遇HgBr2试纸生成黄色棕色的砷斑，与2ml 标准砷溶液在相同条件下生成的砷斑比较,古蔡法,2. 操作方法,（1）标准砷斑用2ml 标准砷溶液制备,（2）供试品需经有机破坏，则标准砷溶液应平行操作,古蔡法,3. 测定条件,（1）标准砷溶液临用新配，1g As/ml。,（2）酸为反应物，酸量应足够，所以加浓盐酸 5ml。,（3）酸性氯化亚锡及碘化钾的作用是：,古蔡法,A. 还原As5+为As3+，加快反应速度；,C. SnCl2与锌作用，在锌表面形成锌

28、锡齐，使氢气均匀而连续地发生；,（3）酸性 SnCl2 及 KI 的作用是：,D. 可抑制微量Sb的干扰，在实验条件下，100 g Sb存在不干扰。,（4） Pb(Ac)2棉花的作用是消除锌粒及供试品中少量硫化物的干扰，Pb(Ac)2棉花60mg装管高度6080mm。,（5）锌粒应无砷,（6）砷斑不稳定，应立即观察,3. 测定条件,古蔡法,4. 干扰及排除,（1） 供试品若为硫化物、亚硫酸盐、硫代硫酸盐时，加HNO3，使氧化成硫酸盐，以除去干扰，如Na2S2SO3中砷盐的检查。,古蔡法,（2）供试品若为铁盐，需先加酸性氯化亚锡试液，将Fe3+还原为Fe2+。 如枸橼酸铁铵中砷盐的检查,（3）具

29、环状结构的有机药物，要先把有机物破坏后, 再进行检查。,4. 干扰及排除,（4）本法适用于不含Sb或含Sb量小于100g 的供试品。,酸破坏法：加稀硫酸与溴化钾如葡萄糖中砷盐的检查 碱破坏法：石灰法、无水碳酸钠碱融法 如：无水碳酸钠碱融苯甲酸钠,常用的有机破坏方法：,4. 干扰及排除,（二）Ag-DDC法 Ch.P(2000)、USP（25）,标准对照法,砷化氢与Ag-DDC溶液作用，还原 AgDDC为红色胶态银，直接比色或于510nm波长处测定吸收度，进行比较。,a 灵敏度高 0.5 g As/30ml b 可仪器测定, 还可定量 c Sb干扰小,（二）Ag-DDC法,用有机碱吸收反应产生的

30、HDDC有利于反应的进行。USP（25）用吡啶，ChP（2000）用三乙胺。,本法适用于含Sb量小于500g的供试品。,Ag-DDC法,（三）白田道夫法 Ch.P（2000） 含Sb药物中砷盐的检查 如葡萄糖酸锑钠,原理 对照法,一法,不受Sb干扰 但灵敏度低,*在药物的杂质检查中，其限量一般不超过百万分之十的是 A. 氯化物 B. 硫酸盐 C. 醋酸盐 D. 砷盐 E. 淀粉,与药物的稳定性、理化特性及生理功能相关，须控制其限量,十三、水分测定法,1. Karl-Fisher 水分滴定法,十三、水分测定法,2. 甲苯共沸法 适用于,颜色较深的药物 氧化剂、还原剂 皂类、油类,*药典（2000

31、年版）中规定的一般杂质检查中不包括的项目是 A. 硫酸盐检查 B. 氯化物检查 C. 溶出度检查 D. 重金属检查 E. 砷盐检查,*在药物生产过程中引入杂质的途径为 A. 原料不纯或部分未反应完全的原料造成 B. 合成过程中产生的中间体或副产物分离不净造成 C. 需加入的各种试剂产生吸附，共沉淀生成混晶等造成 D. 所用金属器皿及装置等引入杂质 E. 由于操作不妥，日光曝晒而使产品发生分解引入的杂质,* 临床所用药物的纯度与化学品及试剂纯度的主要区别是 A. 所含杂质的生理效应不同 B. 所含有效成分的量不同 C. 所含杂质的绝对量不同 D. 化学性质及化学反应速度不同 E. 所含有效成分的

32、生理效应不同,*检查某药物中的砷盐，取标准砷溶液2ml（每1ml相当于1g的As）制备标准砷斑，砷盐限量为0.0001，应取供试品的量为,A. 0.20g B. 2.0g C0.020g D. 1.0g E. 0.10g,色谱法 (一) 薄层色谱法(TLC) (二) 高效液相色谱法(HPLC) (三)气相色谱法(GC),三 色 谱 行 为 差 异,根据药物与杂质对吸附剂的吸附或对展开剂的解析能力不同 (Rf 值的差异), 加以分离和检查.,(一) 薄层色谱法 (TLC),三 色 谱 行 为 差 异,本法灵敏、简便、快速； 不需特殊的设备、费用低； 分离和鉴定同步进行.,1. TLC法特点,三

33、色 谱 行 为 差 异,1) 杂质对照品法,适用于杂质已知并有杂质对照品的情况. 方法 根据杂质限量, 取供试品溶液和一定浓度的杂质对照品溶液,分别点于同一薄层板上展开,定位后进行检查.,三 色 谱 行 为 差 异,2. TLC法应用,适用于杂质的结构不能确定或无杂质对照品的情况.,2) 供试品自身对照法,三 色 谱 行 为 差 异,2. TLC法应用,三 色 谱 行 为 差 异,三 色 谱 行 为 差 异,(三) 气相色谱法(GC),用于药物中挥发性杂质的检查, 如药物中残留溶剂、农药残留量等.,三 色 谱 行 为 差 异,(一) 紫外分光光度法 (二)可见分光光度法,四 光 谱 行 为 差

34、 异,光谱法,规定：A310nm0.05,方 法,限量计算,杂质限量 % =,例: 肾上腺素中肾上腺酮的检查,肾上腺酮的,C(g/100mL)=A/E1%1cm,1. 药典中的杂质检查按照操作方法不同可分为下列 三种类型 、 、 。 2.药物中存在的杂质，主要来源于两个方面，即 和 。 3.药物中微量的氯化物在 酸性条件下与 反应， 生成氯化银的胶体微粒而显白色浑浊，与一定量的 标准氯化钠溶液（浓度为 ）在相同条件下产生 的氯化银浑浊程度比较，判断供试品中氯化物是 否符合限量规定。 4. 肾上腺素中肾上腺酮的检查：称取肾上腺素0.250g， 置于25mL量瓶中，加0.05mol/L盐酸液至刻度

35、，量取5mL置另一 25mL量瓶中，用0.05mol/L盐酸液稀释至刻度，用此液照分光光 度法，在310nm处测定吸收度，不得大于0.05，问肾上腺素的限 量是多少？（以百分表示，肾上腺素 Ecm1% =453）,5.胃复康中检查二苯羟基乙酸的方法如下：取本品0.5g， 酸性下用乙醚提取后蒸干，残渣用无水乙醇10mL溶解后，在258nm波长处测定吸收度，不得超过0.02,求胃复康中二苯羟基乙酸的限量（以百分表示，二苯羟基乙酸在258nm波长处的E1 % cm =19.7） 6.溴化钠中硫酸盐检查法如下：称取溴化钠0.5g，置50mL纳氏比色管中，加水使成约40mL，加稀盐酸2mL，加入25%氯

36、化钡溶液5mL，用水稀释至刻度。精密吸取硫酸钾标准溶液 （100gSO42-/mL）2.0mL，依法检查，求溴化钠中的硫酸盐 的限量为百分之几？ 7.异戊巴比妥钠中重金属的检查：取本品1.0g，加水43mL溶解后，缓缓加稀盐酸3mL，随加随用强力振摇，滤过，弃取初滤液； 取续滤液23mL，加醋酸盐缓冲液（pH3.5）2mL，依法检查， 含重金属不得超过20ppm，求应取标准铅溶液（浓度为10g Pb2+/mL）多少mL？,第一节 结构与性质,一、结构分析,包括：芳酸、芳酸盐、芳酸酯,共同点：苯环、羧基,不同点：不同的取代基（如酚羟基、芳伯氨基等）,二、性质,（一）物理性质,（1）固体 具有一定

37、的熔点,（2）溶解性,芳酸碱金属盐及其它盐易溶于水，难溶于有机溶剂。,游离芳酸类兽药几乎不溶于水，易溶于有机溶剂；,（二）化学性质,1. 芳酸具游离羧基，呈酸性，其pKa在36之间，属中等强度的酸或弱酸；,X、NO2等吸电子取代基存在使酸性增强,CH3、NH2 、OH等斥电子取代基存在使酸性减弱,邻位取代间位、对位取代，尤其是邻位取代了酚羟基，由于形成分子内氢健，酸性大为增强,（二）化学性质,2. 芳酸碱金属盐易溶于水，水解，溶液呈碱性，但碱性太弱，所以其含量测定方法为双相滴定法或非水碱量法。,（二）化学性质,利用芳酸酯水解定量消耗氢氧化钠的性质，可用水解后剩余滴定法测定其含量；,芳酸酯类药物

38、还应检查因水解而引入的特殊杂质。,化学性质,4. 取代芳酸类药物可利用其取代基的性质进行鉴别和含量测定。如: 具有酚羟基的药物可用FeCl3反应鉴别； 具芳伯氨基的药物可用重氮化偶合反应鉴别、亚硝酸钠滴定法测定含量。,（二）化学性质,第二节 鉴别试验,1、FeCl3反应,具酚羟基或水解后能产生酚羟基的药物,水杨酸(紫堇色) 对氨基水杨酸钠(紫红色) 水杨酸二乙胺 对乙酰氨基酚 (蓝紫色),直 接 FeCl3 反应 ：,酚羟基,鉴别,2、重氮化偶合反应,芳香第一胺类鉴别反应 具芳伯氨基或潜在芳伯氨基的药物,鉴别,3、水解反应,鉴别,水煮,第三节 特殊杂质检查,一、水杨酸中苯酚的检查,1. 杂质来

39、源,原料残存（生产过程中原料反应不完全）,特杂,特杂,二、阿司匹林中水杨酸的检查,原料残存（生产过程中乙酰化不完全）,水解产生（贮存过程中水解产生）,1. 杂质来源（ 有毒、氧化为醌有色物质）,第四节 含量测定,一、中和法,1. 直接滴定法 pKa 36,含量,醇中,阿司匹林直接滴定法,酚酞,（1）测定方法及计算 Ka=3.2710-4 ；反应摩尔比为11,（2）讨论,含量, 中性乙醇溶解阿司匹林且防止酯键水解。“中性”是对中和法所用的指示剂而言, 优点：简便、快速 缺点：酯键水解干扰（不断搅拌、快速滴定） 酸性杂质干扰（如水杨酸） 适用范围：不能用于含水杨酸过高或制剂分析，只能用于合格原料药

40、的含量测定,含量,2. 水解后剩余滴定法,阿司匹林原料药,含量,酯的一般含量测定方法,USP（25）方法：取本品约1.5g，精密称定，加入NaOH滴定液（0.5mo1/L）50.0m1，混合，缓缓煮沸10min，放冷，加酚酞指示液，用H2SO4滴定液（0.25mo1/L）滴定剩余的NaOH ，并将滴定结果用空白试验校正。每1ml的NaOH滴定液（0.5mol/l）相当于45.04mg的C9H8O4。,2NaOH（过量）H2SO4 Na2SO42H2O,剩余滴定：,水解：,含量,反应摩尔比为12,优点： 消除了酯键水解的干扰 缺点： 酸性杂质干扰尚存在,水解后剩余滴定法,含量,每1 ml的NaO

41、H滴定液（0.5 mol/l）相当于 45.04 mg 的C9H8O4,3. 两步滴定法,如阿司匹林片的测定：,阿司匹林片、阿司匹林肠溶片,含量,取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于阿司匹林0.3g），置锥形瓶中，加中性乙醇（对酚酞指示液显中性）溶解后，振摇使阿司匹林溶解，加酚酞指示液3滴，滴加NaOH滴定液（0.1mol/L）至溶液显粉红色，再精密加NaOH滴定液（0.1mol/L）40m1，置水浴上加热15分钟并时时振摇，迅速放冷至室温，用硫酸滴定液（0.05mol/L）滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每lml的NaOH滴定液（0.1mo1/L）相当于18.02mg的C

42、9H8O4。,第一步 中 和,含量,两步滴定法,第二步 水解后剩余滴定,含量,两步滴定法,2NaOH（过量）H2SO4 Na2SO42H2O 反应摩尔比为11,剩余滴定：,含量,降低了 酯键水解的干扰,本法消除了酸性杂质的干扰，,片剂含量测定结果的计算,含量,剩余滴定：,4. 双相滴定法 芳酸碱金属盐,如苯甲酸钠 Ch.P(2000),溶剂：水乙醚,乙醚的作用是：萃取反应生成的苯甲酸，使水相中的中和反应进行到底滴定中要强力振摇。随着滴定不断进行，苯甲酸不断被萃取入有机溶剂层，使滴定反应完全，终点清晰。,优点：消除了反应产物的干扰,二、亚硝酸钠滴定法,含量,具芳伯氨基或潜在芳伯氨基（芳酰氨基水解

43、或硝基还原）的药物,2. 柱分配色谱紫外分光光度法,水杨酸的限量测定 固定相：FeCl3, SA保留，冰醋酸洗脱，306nm测水杨酸的量,USP（25）阿司匹林胶囊 可同时定量测定阿司匹林和水杨酸,1. 阿司匹林栓剂 Ch.P（2000） 离子抑制 色谱法 内标法定量,2. 对氨基水杨酸钠 USP（25） 离子对反相 HPLC 内标法定量,四、HPLC,3. 酚磺乙胺 Ch.P（2000） 正相 HPLC 内标法定量,*鉴别水杨酸及其盐类，最常用的试液是（C） A. 碘化钾 B. 碘化汞钾 C. 三氯化铁 D. 硫酸亚铁 E. 亚铁氰化钾,*测定阿司匹林片和栓中药物的含量可采用的方法是（BC）

44、 A. 重量法 B. 酸碱滴定法 C. 高效液相色谱法 D. 络合滴定法 E. 高锰酸钾法,*苯甲酸钠的含量测定，Ch.P（2000）采用双相滴定法，其所用的溶剂体系为（D）,A. 水乙醇 B. 水冰醋酸 C. 水氯仿 D. 水乙醚 E. 水丙酮,* 双相滴定法可适用的药物为（E） A. 阿司匹林 B. 对乙酰氨基酚 C. 水杨酸 D. 苯甲酸 E. 苯甲酸钠,* 阿司匹林加碳酸钠试液加热后，再加稀硫酸酸化，此时产生的白色沉淀应是（C） A. 苯酚 B. 乙酰水杨酸 C. 水杨酸 D. 醋酸钠 E. 醋酸苯酯,* 水杨酸与三氯化铁试液生成紫堇色产物的反应，要求溶液的pH值是（D） A. pH1

45、0.0 B. pH2.0 C. pH78 D. pH46 E. pH2.00.1,* 两步滴定法测定阿司匹林片或阿司匹林肠溶片时，第一步滴定反应的作用是（B） A. 测定阿司匹林含量 B. 消除共存酸性物质的干扰 C. 使阿司匹林反应完全 D. 便于观测终点 E. 有利于第二步滴定,* 采用双相滴定法测定苯甲酸钠含量时，加入乙醚的目的是（A） A. 防止反应产物的干扰 B. 乙醚层在水上面，防止样品被氧化 C. 消除酸碱性杂质的干扰 D. 防止样品水解 E. 以上都不对,* 区别水杨酸和苯甲酸钠，最常用的试液是（C） A. 碘化钾 B. 碘化汞钾 C. 三氯化铁 D. 硫酸亚铁 E. 亚铁氰化

46、钾,* 在中性条件下，可与三氯化铁试液反应，生成赭色沉淀的药物是（D） A. 水杨酸钠 B. 对氨基水杨酸钠 C. 乙酰水杨酸 D. 苯甲酸钠 E. 扑热息痛,巴比妥类药物是一类临床常用的催眠镇静药。由于这类药物应用广泛，容易因不合理使用而引起中毒，因此，需要对本类药物的原料、制剂进行分析，有时也需要对生物样品中微量巴比妥类药物进行分析。,第六章,5,5-取代的巴比妥类药物,5,结构与性质,区别各种巴比妥类药物,环状丙二酰脲、1,3-二酰亚胺基团 决定巴比妥类药物的特性,1. 环状母核部分,2. 取代基部分,结构与性质,二、性质 (Physical and chemical propertie

47、s),（一）物理性质,1. 白色结晶或结晶性粉未，具有固定的熔点,2. 游离巴比妥类药物微溶或极微溶于水，易溶于乙醇及有机溶剂；其钠盐则易溶于水，而不溶于有机溶剂。,（二） 化学性质,巴比妥类药物分子结构中都有1,3-二酰亚胺基团，能发生酮式和烯醇式的互变异构，在水溶液中可以发生二级电离。因此，本类药物的水溶液显弱酸性（pKa为7.3-8.4），可与强碱形成水溶性的盐类。,1. 弱酸性,性质,3. 与重金属离子反应,（1） 与银盐的反应,性质,AgNO3,+,（2） 与铜盐的反应,与重金属离子反应,第二节 鉴别试验 (Test of identification),苯巴比妥 Ch.P（2000

48、） 【鉴别】 （1）本品显丙二酰脲类的鉴别反应,一、丙二酰脲类反应,取供试品约0.1g，加碳酸钠试液1ml与水10m1，振摇2min，滤过，滤液中逐滴加入硝酸银试液，即白色沉淀，振摇，沉淀即溶解；继续滴加过量的硝酸银试液，白色沉淀不再溶解。,1. 与银盐的反应,鉴别,取供试品约50mg，加吡啶溶液（110）5m1，溶解后，加铜吡啶试液（硫酸铜4g，水90ml溶解后，加吡啶30m1，即得）1m1，即显紫色或生成紫色沉淀。,2. 与铜盐的反应,鉴别,巴比妥类的钠盐酸 游离巴比妥类药物 过滤 洗涤 干燥 测熔点,二、熔点测定及衍生物熔点测定,1. 熔点测定,鉴别,取本品约0.5 g，加水5 ml溶解后，加稍过量稀盐酸，即析出白色结晶性沉淀，滤过；沉淀用水洗净，在105干燥后，依法测定，熔点为174-178。,苯巴比妥钠的鉴别 Ch.P（2000）,以苯巴比妥为例，特殊杂质有苯丙二酰脲 以苯巴比妥钠为例，游离的 苯巴比妥为特殊杂质,第三节 特殊杂质检查 (The relative substance test),用碱滴定液测定酸类物