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1、实验一 普通光学显微镜的使用及细菌形态的观察,主 讲:徐尔尼 生命科学学院生物技术系,一、目的与要求 了解显微镜的构造和各部分的作用，掌握显微镜的 使用方法 学习并掌握油镜的原理和使用方法 了解细菌的三种基本形态,二、显微镜的基本结构及油镜的工作原理 1、普通光学显微镜的基本结构 普通光学显微镜的构造可分为两部分： 1）机械装置：镜座、镜筒、镜臂、物镜转换器、载物台、标本移动螺旋、粗调螺旋和细调螺旋等部件组成。 2）光学系统：目镜、物镜、聚光器、虹彩光圈、光源等组成,普通光学显微镜基本构造,放大倍数= 物镜放大倍数目镜放大倍数,在显微镜的光学系统中，物镜的性能最为关键，它直接影响着显微镜的分辨
2、率。而在普通光学显微镜配置的几种物镜中，油镜的放大倍数最大，对微生物学研究最为重要。与其他物镜相比，油镜的使用比较特殊，需在载玻片和镜头之间加滴镜油。,二、显微镜的基本结构及油镜的工作原理 2、油镜的工作原理 1）增加照明亮度 2) 增加数值孔径(NA)，提高显微镜的分辨率,三、实验器材 1、标本片：细菌三形片 2、试剂：香柏油、二甲苯 3、仪器及其它用具：显微镜、擦镜纸等,四、操作步骤 1、显微观察步骤 1）低倍镜观察（10）： 2）高倍镜观察（40）： 3）油镜观察（100）：,低倍镜的操作 1. 置显微镜于固定的桌上。 2. 旋动转换器，将低倍镜移到镜筒下方与之对直。 3. 转动反光镜向
3、着光源处，同时用眼对准目镜，仔细观察，视野亮度均匀。 4. 将标本放在载物台上，使观察的目的物置于圆孔的正中央。 5. 将粗调节器向下旋转，眼睛注视物镜，以防物镜和载玻片相碰，当物镜的尖端距载玻片约0.5cm处时停止旋转。 6. 左眼向目镜观察，调节粗、细调节器直至目的物清晰为止。,高倍镜的操作 1. 使用高倍镜之前，先用低倍镜观察，将目的物移至视野正中央。 2. 旋动转换器换成高倍镜，调节细调节器直至目的物清晰；如果高倍镜触及载玻片应立即停止旋动，说明原来低倍镜没有调准焦距，应重调低倍镜，找到目的物。,油镜的操作 1. 如果用高倍镜未能看清目的物，则可用油镜。应先用低倍镜和高倍镜检查标本片，
4、将目的物移到视野正中。 2.下降载物台在载玻片上滴一滴香柏油，将油镜移至正中央，使油镜头浸没在油中，刚好贴近载玻片。用细调节器微微向上调即可。,四、操作步骤 2、显微镜用毕后的处理 拔掉电源插头 下降载物台 取干净擦镜纸拭去镜头上的香柏油 取干净擦镜纸蘸少许二甲苯擦去镜头上的残留油迹 取干净擦镜纸擦去残留的二甲苯 将显微镜的各部位还原，物镜转成“八”字形，擦干净镜体，罩上防尘罩。,五、实验数据及处理结果 绘出你在油镜下观察到的细菌的三种形态及其不同细菌细胞的排列方式。,六、思考与讨论 用油镜观察时应注意那些问题？在载玻片和镜头之间加滴什么油？起什么作用？ 下次实验项目名称：细菌的简单染色和革兰
5、氏染色,增加照明亮度 油镜的放大倍数可达100 ，放大倍数这样大的镜头，焦距很短，直径很小，但所需要的光照强度却最大。,从承载标本的玻片透过来的光线，因介质密度不同（从玻片进入空气，再进入镜头），有些光线会因折射或全反射，不能进入镜头，致使在使用油镜时会因射入的光线较少，物像显现不清。所以为 了不使通过的光线有所损失， 在使用油镜时需在油镜和玻 片之间加入与玻璃的折射率 相仿的镜油（通常使用香柏 油，其折射率n =1.52）。 增加了视野的进光量，从而 使物象更加清晰。,增加显微镜的分辨率 显微镜的分辨率或分辨力（resolution or resolving power）是指显微镜能辨别两点
6、之间的最小距离的能力。从物理学角度看，光学显微镜的分辨率受光的干涉现象及所用物镜性能的限制，可表示为：,式中：=光波波长（平均0.55m) NA=物镜的数值孔径值。,数值孔径则取决于物镜的镜口 角和玻片与镜头间介质的折射率， 可表示为： NA=n sin(/2） n: 物镜和被检标本间介质的折 射率。 ：镜口角。 以香柏油为介质的油镜所能达 到的数值孔径（NA一般在1.2 1.4）要高于低倍镜、高倍镜 等物镜（NA都低于1.0）。数值孔径通常在0.65左右的高倍镜只能分辨距离不小于0.4m的物体，而油镜的分辨率却可达到0.2m左右。,实验报告格式,一、实验项目名称 二、实验目的 三、实验基本原理 四、主要仪器设备及耗材 五、实验步骤 六、实验数据及处理结果 七、思考讨论题,