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1、1/20,液相分析中样品溶剂的选择,2/20,目 录,溶剂效应的概念 含有离子对试剂实验中的溶剂效应 梯度洗脱方法中的溶剂效应 抗生素与甲硝唑实验中的溶剂效应,3/20,什么是溶剂效应？,溶剂效应的现象,色谱图上较早洗脱的峰前沿或者开叉，与此同时较晚洗脱的峰则较为正常，这些现象可能是有以下原因引起的样品溶液的溶剂很可能强于流动相。,可能发生溶剂效应的情况,出峰时间早 保留弱 进样量大,溶剂效应,样品溶液的溶剂强度强于流动相溶剂强度时可能会造成的峰展宽、峰分叉现象。,4/20,离子对方法中的溶剂效应,5/20,0,5,10,15,20,5 mL,10 mL,20 mL,30 mL,40 mL,5
2、0 mL,75 mL,100 mL, min ,硫胺,吡哆醇,核黄素,样品溶剂 : CH3CN/H2O=10/90,1,2,6/20,0,5,10,15,20, min ,5 mL,10 mL,20 mL,30 mL,40 mL,50 mL,75 mL,100 mL,吡哆醇,硫胺,核黄素,样品溶剂 : 流动相,1,2,7/20,使用10%乙腈作为样品溶剂时，随着进样量的增加，保留较弱的吡哆醇和硫胺出现裂峰 使用含有离子对试剂的流动相作为样品溶剂时，则不会发生上述现象。,结论,8/20,CAPCELL PAK C18 MG, 2.0 mm i.d. X 150 mm, 40 H2O, CH3OH
3、, 0-100% 梯度分析, 200 mL/min 杀虫剂的标准混合物质(10 g/mL) 用甲醇溶解, Injection vol. 10 mL,Leading,梯度洗脱时的溶剂效应,9/20,结论,出峰早的峰受溶剂效应影响发生前沿 解决方案: 降低进样量； 使用初始有机相进行样品溶解,10/20,抗生素甲硝唑分析中的溶剂效应,实验背景：我们按照2007版化妆品卫生规范中抗生素与甲硝唑的方法进行分析，在实验中发现溶剂效应。,11/20,化妆品中抗生素与甲硝唑的分析,1、盐酸美满霉素（M.W.493.9）Minocycline hydrochloride,2、甲硝唑（M.W.171.15） M
4、etronidazole,3、二水土霉素（M.W.496.46） Oxytetracycline dihydrate,4、盐酸四环素（M.W.480.9）Tetracycline hydrochloride,5、盐酸金霉素（M.W.515.34）Chlortetracycline hydrochloride,6、盐酸多西环素（M.W.480.9） Doxycycline hydrochloride,7、氯霉素（M.W.323.13） Chloramphenicol,12/20,07版卫生规范实验条件,实验方法介绍,甲醇+0.1mol/L盐酸=1+1,色谱柱：C18 250mm*4.6mm I.
5、D.，5m； 检测器：二极管阵列检测器，检测波长268nm； 流动相：0.01mol/L草酸溶液（磷酸调节水溶液的pH至2.0）+甲醇+乙腈=67+11+22（HPLC分析前，经0.45m滤膜过滤及真空脱气）； 流 量：0.8mL/min； 柱 温：室温。,样品溶剂,13/20,MG混标结果：按照07版化妆品卫生规范的样品提取溶液（甲醇+0.1mol/L盐酸=1:1 ）溶解,基线抬高，影响定量,07版化妆品卫生规范方法,14/20,MG空白结果,由于出现未知的基线抬升，为确定是何原因引起的，分别对空白溶剂和各个单标进行分析,MG单标1结果,MG单标2结果,各单标及空白均无杂峰,15/20,通过
6、混标与单标对比，发现每个单标均无杂峰； 单标1、2在混合进样后峰高降低了（实际样品量同为1ug）； 因此确定1、2号峰中间的物质为1、2号标准品在卫生规范溶剂中相互作用的结果。,1,2,3,4,16/20,样品溶解方法：取单标1、2各100L混合用卫生规范溶剂定溶至1mL结果,不同溶剂下单标1、2混合物的出峰行为,样品溶解方法：取单标1、2各250L混合用流动相定溶至1mL结果,样品溶解方法：取单标1、2各100L混合用流动相定溶至1mL结果,随着样品溶剂中流动相比例增大会逐渐消除单标1和2之间的相互作用,17/20,MG流动相溶解标准品结果,用流动相溶解标准物质,1和2之间基线未抬升,HPL
7、C Conditions ： 色谱柱：CAPCELL PAK C18 MG 250mm*4.6mm I.D.，5m； 检测器：二极管阵列检测器，检测波长268nm； 流动相：0.01mol/L草酸溶液（磷酸调节水溶液的pH至2.0）+甲醇、乙腈=74+26（HPLC分析前，经0.45m滤膜过滤及真空脱气）； 流 量：0.8mL/min； 柱 温：30。,18/20,结论,综上所述，样品1-盐酸美满霉素与样品2-甲硝唑在07版卫生规范中的提取溶液内会发生某种相互作用，导致混合样品中相应峰高降低，基线抬升； 若在提取后用流动相进行10倍稀释，或直接用流动相对标准品进行溶解则可解决该问题。,19/20,结论,尽可能选用流动相作为样品溶剂,20/20,谢谢！,