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1、实验一 普通光学显微镜的使用及细菌三形观察,一、目的要求,了解显微镜的构造和各部分的作用，掌握显微镜的使用方法 学习并掌握油镜的原理和使用方法 了解细菌的三种基本形态,普通光学显微镜的基本结构,普通光学显微镜的构造可分为两部分：一为机械装置，二为光学系统 。 机械装置由镜座、镜筒、物镜转换器、载物台、推动器、粗动螺旋和微动螺旋等部件组成。 光学系统由目镜、物镜、聚光器、光源、滤光片、虹彩光圈等组成,二、基本原理,普通光学显微镜基本构造,油镜的工作原理,滴加镜油的作用 （1） 增加照明亮度 （2） 增加显微镜的分辨率 分辨率（最大可分辨距离）=/2NA 式中=光波波长 ； NA=物镜的数值孔径值
2、 NA= nsin(/2 ) n: 物镜和被检标本间介质的折射率 ：镜口角（即入射角）,油镜，即油浸接物镜。当光线通过玻片与镜头之间的空气时，由于空气与玻片的密度不同，使光线受到曲折，发生散射，降低了视野的照明度。若中间的介质是一层油（其折射率与玻片的相近），则几乎不发生折射，增加了视野的进光量，从而使物象更加清晰。,三、实验器材,显微镜、擦镜纸、双层瓶（香柏油、二甲苯）等。 细菌三型标本片（球菌、杆菌、螺旋菌）,四、操作步骤,（一）观察前的准备 1.取镜和安放 置显微镜于平稳的实验台上，镜座距实验台边沿约为34cm。镜检者姿势要端正。 2.光源调节 安装在镜座内的光源灯可通过调节电流或电压来
3、获得适当的照明亮度，使视野内的光线均匀，亮度适宜。 3.根据使用者个人情况，调节双目显微镜的目镜 双目显微镜的目镜间距可以适当调节，使其与观察者两个眼睛瞳孔的距离相符。,（二）显微观察 1.低倍镜观察 将标本片放在载物台上，用标本夹夹住，调节标本移动螺旋，使目的物处于物镜的正下方。 调节粗调螺旋，使物镜（10）与标本靠近，眼睛在侧向注视物镜，防止物镜和载玻片相碰。 张开双眼向物镜里观察，如果见到目的物，但不十分清楚，可用细调螺旋，至目的物清晰为止。,2.高倍镜观察 使用高倍镜前，必须先用低倍镜观察，发现目的物后将它移至视野正中处。 旋动转换器换高倍镜。如果高倍镜触及载玻片立即停止旋动，这说明原
4、来低倍镜并没有调准，目的物并没有真正找到，必须用低倍镜重新调节。（物镜的同焦现象） 如果高倍镜下观察目的物有点模糊，调节细调螺旋，直到视野清晰。,3.油镜观察 先用低倍镜和高倍镜检查标本片，将目的物移到视野正中。用粗调螺旋下降载物台。 在载玻片上滴一滴香柏油，将油镜移至正中，缓慢调节粗调螺旋使油镜头浸没在油中，尽量贴近载玻片。然后再用细调螺旋微微向上调（切忌用粗调螺旋）。 油镜观察完毕，用油镜纸将镜头上的油揩净，另用擦镜纸蘸少许二甲苯揩拭镜头，再用擦镜纸揩干。 （应特别注意不要因在下降镜头时用力过猛，或者调焦时误将粗调节螺旋向反方向转动而损坏镜头及载玻片）,实验结束时 请确保油镜头擦拭干净！,
5、1.不准擅自拆卸显微镜的任何部件,以免损坏。 2.镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光洁度 3.观察标本时，必须依次用低、高倍镜，最后用油镜。当目视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可使用粗调节器，以免压碎玻片或损伤镜面。 4.观察时，两眼睁开，养成两眼能够轮换观察的习惯，以免眼睛疲劳，并且能够在左眼观察时，右眼注视绘图。 5.拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不可单手拿，更不可倾斜拿。,显微镜保养和使用中的注意事项,五、实验结果,绘图，记录所观察到的细菌三种基本形态。,六、问题与讨论,1、使用高倍镜与油镜调焦时应注意什么？ 2、使用油镜时，在载玻片和镜头之间加滴什么油？起什么作用？ 3、什么是物镜的同焦现象？它在显微镜观察中有什么意义？,