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1、,对三种食物腐败抑制效果研究,中 草 药 提 取 物,,Contents,小组成员,组长：莫达康 组员：温影珍 陈宏伟 袁浩彬 黄伟华 指导老师：鲍波 许碧莲,,Contents,研究目的,添加食品防腐剂,益于人体健康，有一定的营养价值， 消费者认可度高,天然防腐剂,化学防腐剂,民以食为天，食以安为先。近年来食品安全问题一次又一次的进入公众的视野，其中食品安全又以食品腐败问题尤为严重，全世界农副产品、果蔬等食品因腐烂变质而引起的经济损失十分巨大。所以延长保存期限、 防止食品腐败变质是食品工业的重要任务。,传统方法如干制、 盐腌、加热、罐藏,冷冻干燥、气调贮藏 辐射保藏、微波杀菌,工艺程序复杂,
2、耗能大、投资成本高,价格低廉，但若超过安全剂量存在致癌性、 致畸性、易引起食物中毒等问题,,Contents,研究目的及现状,市面上使用的防腐剂大多是化学防腐剂，对人体有不同程度的危害。因此，天然防腐剂的研发拥有巨大的前景。其中中药防腐剂益于健康，性质稳定，可作为天然防腐剂的首选。 但是目前对中药防腐剂的基础研究缺乏，对中药防腐剂的开发缺乏系统的理论指导，研究成效并不显著。 此番研究的目的就是在广谱、高效、低毒的抗菌中草药中，找出抗致病菌功效显著的中药，为制成有效的重要防腐剂提供理论基础。,,Contents,研究内容,1.比较八种中药提取物体外抗三种食物腐败菌的能力，选择抗菌效果最好的一种中
3、药进行下一步研究。 2.研究1中所选中药提取物在不同浓度下的抑菌效果及该中药的MIC。,,Contents,实验选材,中草药的选取 八种具有广谱、高效、低毒的抗菌中药： 五倍子、白花蛇舌草、金银花、肉桂、黄连、罗汉果、栀子、鱼腥草,细菌的选取 中国食品微生物限量规定不得含有的致病致腐菌： 沙门氏菌、志贺菌、金色葡萄球菌,,Contents,实验步骤,中药药液的提取（水提煎煮法） 各取50g进行粗粉碎后, 通过球磨机再进行球磨, 过筛得到各中草药的细粉碎样品。取粉碎后中药各50g，分别加水500ml，将中药浸泡在水中，加热至沸腾，改用文火加热20分钟，将滤液滤出，在将滤渣加水至200ml，二次煎
4、煮，后将两次煎煮所得滤液加在一起，水浴浓缩至100ml，高压灭菌后放凉至室温，备用。所得中药水煎煮液浓度为0.5g/ml。,,Contents,实验步骤,二、菌种的活化 将保存在低温下的菌种取出,置于摇床中, 在各菌种适宜条件下进行活化,后将活化菌置于冰箱中冷藏保存备用。,,Contents,实验步骤,三、药敏试验 用无菌棉拭子取菌液涂布在以打孔的90MM直径的MH药敏平板上，每平板打4个孔，待干后，分别加入中药水煎液50UL。在培养箱中37摄氏度培养24小时后，用游标卡尺量取抑菌环直径。利用琼脂扩散法,分别取浓度为 106cf u /mL 的菌液各 0.2mL , 分别加入 LB 琼脂培养基
5、中 ,凝固后用无菌打孔器在琼脂培养基上打孔。 将各中药提取物加入孔中每组分别做三个平行实验; 另外做两组对照实验,在一个平皿中加入蒸馏水作CK;在另一个平皿中加入浓度为3.4mg/ml苯甲酸钠作CK- 。然后再将平皿置于37恒温箱中培养, 24h后取出观察。用卡尺十字交叉法测量抑菌圈直径,计算抑制生长率。 抑制生长率= 处理净生长量/CK- 净生长量100%,,Contents,实验步骤,八种中草药水提物抗菌谱（抑菌环）,,Contents,实验步骤,四、不同浓度的中草药提取物抑菌效果,选取各细菌抑菌生长率最高的一种中药水提物,分别设置提取物浓度分别为：,重复上一步做药敏实验。,0.5g/ml
6、,0.25g/ml,0.125g/ml,0.0625g/ml,0.0313g/ml,,Contents,实验步骤,不同浓度中草药对目标细菌的抑菌生长率,0.5 0.25 0.125 0.0625 0.0313,中药,目标细菌,抑菌环直径 抑菌生长率,金黄色 葡萄球菌,浓度（g/ml）,志贺氏菌,沙门氏菌,抑菌环直径 抑菌生长率,抑菌环直径 抑菌生长率,C,B,A,,Contents,实验步骤,五、MIC的测定 选取效果平均抑菌生长率最好的一种中药水提物，测定对三种致病菌的最小抑菌浓度，并与常用化学防腐剂苯甲酸钠的最小抑菌浓度作对比。采用试管2倍稀释法测定最小抑菌浓度(M IC) 。 实验中每种
7、药均用肉汤培养基2倍系列稀释10个梯度,第11支试管作阳性对照,第12管作阴性对照,各管稀释后的最终体积为10mL。每管加接种菌液100L,置37培养1824h,观察是否有菌生长,每种药物做3组重复。,,Contents,实验步骤,沙门氏菌 志贺氏菌 金黄色葡萄球菌,中草药水提物,0.5 0.25 0.125 0.0625 0.0313,浓度(g/ml),目标细菌MIC,A中药,C中药,B中药,中草药对目标细菌的最小抑菌浓度（MIC）,,Contents,研究支持条件,8种中药、3种菌种 培养基（细菌培养基） 培养皿、棉签、烧瓶、容量瓶、冰箱、培养箱、微量加样器、MH药敏平板、摇床、试管,Thank You !,