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1、仪测血液细胞分析,资中县人民医院检验科 陈正文 2002年,仪测血细胞分析的发展,十六世纪人类认识到血液中细胞的存在 其后的200年，显微技术的不断发展，人们对血中细胞成份进行分类 1956年，Coulter根据细胞的低导电性，设计了第一台A型单通道分析仪 现今，结合组织化学和免疫组化、高频传导及激光散射等技术，生产出的五分类、多参数血细胞分析系统已得到普及。,仪测血液细胞分析的方法,1、电阻抗法： 当细胞快速流经小孔时，由于细胞是不良导体，小孔电阻加大，相当于小孔的横截面积减少，在电流恒定的情况下，出现瞬间的电压变化而产生一个电脉冲，电脉冲的数量就是流经小孔的细胞数；电脉冲的大小与细胞大小成
2、正比，因此能进行细胞分类。 2、光散射法： 全血标本首先需要按照一定比例稀释成细胞悬液，在鞘液的作用下，形成细胞流，细胞被排成单列快速通过光学检测区，当流动中的细胞和测定光束相交时，由于血细胞透光度与鞘液不同，引起光散射变化，引发一脉冲信号，信号的大小与细胞体积有关，以此来进行细胞计数及体积测定。 3、组织化学法： 在稀释液及溶血素的配合作用下，使红细胞膜在极短的时间内完全溶解，使各种WBC维持颗粒状态，保持一定的体积。从而保证了WBC计数的可靠性。将释放的血红蛋白经化学处理后转化为较为稳定的血红蛋白衍生物，在540nm左右有最大吸收峰，可用比色法进行定量测定。,自动化仪器的分析原理,电阻抗法
3、库尔特基本原理,自动化仪器的分析原理,血红蛋白测定基本原理,不同类型的血细胞分析仪，血红蛋白测定原理是相同的。血液经溶血剂作用后，红细胞溶解，释放血红蛋白，与溶血剂结合形成血红蛋白衍生物，在特定波长（一般在530-550nm）下比色，吸光度的变化与液体中Hb含量成比例。 不同系列血液分析仪配套溶血剂配方不同，形成的血红蛋白衍生物亦不同，吸光度各异但最大吸收峰均接近540nm。,全血分析测定测参数（Sysmex KX-21),WBC RBC PLT WBC分群 RDW PDW MCV MPV HGB MCH MCHC,红细胞参数,脉冲计数,脉冲高度、宽度,比色法,计算值,用于诊断贫血的参数RBC
4、、HCT、HGB,用于贫血分类的参数 MCV、MCH、MCHC、RDW,白细胞参数,WBC、WBC分群,血小板参数,PLT、MPV、PDW、,白细胞参数,WBC分群与传统形态学分类的关系及区别(三分类),白细胞参数,根据体积大小初步确认其相应的细胞群：第一群是小细胞区，主要是淋巴细胞。第二群称为中间细胞（MID），包括单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞，各阶段幼稚细胞。第三群是大细胞区，主要是中性粒细胞（GRAN）。仪器根据各亚群占总体的比例计算出各亚群的百分率，如果与该标本的白细胞总数相乘，即得到各类细胞的绝对值。 可以看出，电阻法只是根据细胞体积的大小，将白细胞分成几个群体。在一个群体中
5、，可能以某种细胞为主（如小细胞区主要是淋巴细胞），但由于细胞体积间的交叉，可能还有其它细胞的存在。显然习惯上所称的“三分类、”“二分类”血细胞分析仪这个名称是不够确切的。国外多采用“三部法”（3-part）或“二部法”(2-part)称之。国内专家普便建议使用“三分群,形态学中的分类与仪测分群的关系,红细胞参数分析,贫血是指单位容积的血液中HGB、RBC或HCT低于同年龄、同性别的最低值即为贫血。,贫血的定义,红细胞参数分析,用于判断贫血参数： RBC、HCT、HGB 用于贫血分类参数： MCV、MCH、MCHC、RDW,RDW红细胞体积分布宽度： 是反应红细胞体积大小不等的指标，RDW愈大其
6、红细胞大小差别愈大，在数值上用单个红细胞体积的变异系数表示。（SD或CV%）,红细胞参数分析,RDW的临床意义,鉴别缺铁性贫血和-珠蛋白生成障碍性贫血： 分析两类贫血患者的RDW变化，其中53例缺铁性贫血RDW全部增高（异常率为100%），而44例轻型-珠蛋白生成障碍性贫血中38例中RDW正常（正常率为88%）因此认为RDW可作为此两类贫血筛选及鉴别指标。 诊断缺铁性贫血： 95%以上的缺铁性贫血的RDW均异常。 用于缺铁性贫血的临床治疗效果观察： 铁剂治疗早期RDW增大，后趋于正常。 进行贫血的新形态学分类（MCV/RDW分类） 根据RDW所反应红细胞体积的异质性结合MCV分为六类贫血。,红
7、细胞参数分析,1.传统形态学分类,2.MCV与RDW结合分类,红细胞参数分析,利用MCV、RDW鉴别贫血的敏感性及特异性,血小板相关参数,PLT（血小板数） MPV（血小板平均体积） PDW（血小板体积分布宽度） P-LCR（大血小板比率）,血小板相关参数,鉴别血小板减少的原因 血小板破坏增多引起血小板减少MPV增高；骨髓病变血小板生成减少MPV降低。,提示骨髓功能恢复的预后价值 MPV增加是骨髓功能恢复的表现。,判断止血能力的强弱 血小板减少时，MPV增加者其止血能力相对较强。,MPV的临床意义,血小板相关参数,PDW 血小板体积分布宽度，它反应血小板大小的不均一性，其增大常见于巨幼红细胞贫
8、血、慢粒、巨核细胞白血病、MDS、原发性血小板减少性紫癜等血液系统疾病。,血小板相关参数,血小板三项参数分析,血液细胞体积直方图,直方图是由测量通过感应区的每个细胞脉冲累积得到的，是在计数的同时进行分析测量的。 横坐标为体积，纵坐标是血细胞的相对数量，血细胞分析仪在进行细胞分析时将每个细胞的脉冲根据其体积大小分配并存在相应的体积通道中，每个通收集的数据被统计出相对数并表示在“Y”轴上。体积数据以飞升（fl）为单位，表示在X轴上,白细胞体积直方图,经过溶血剂处理后的白细胞可以根据体积大小初步确认其相应的细胞群：第一群是小细胞群，主要是淋巴细胞。第二群是中间细胞群，包括单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱
9、性粒细胞，核象左移或白血病可有各阶段幼稚细胞及白血病细胞。第三群是大细胞群，主要是中性粒细胞。 仪器根据各亚群占总体的比例计算出各亚群的百分率，如果与该标本的白细胞总数相乘，即得到各类细胞的绝对值。,白细胞直方图变化的临床意义,大淋巴细胞增多症,急非淋白血病,急性淋巴细胞白血病,在进行白细胞计数时，细胞根据体积大小分配在不同计算机通道中，从而得到白细胞体积分布直方图。反之从图形的变化可以会反应出血液中细胞群体的变化。这种变化细胞图形并无特异性,中间细胞群可包括大淋巴细胞、原始细胞、幼稚细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞，其中任何一类细胞的增多，均可使直方图产生相似变化，只是提示检查者粗略判断细胞
10、比例变化或有无明显的异常细胞出现 ，进而在显微镜下检查中注意这些变化或在正常人体检查中，筛选是否需要进一步作血涂片检查。,白细胞直方图变化的临床意义,白细胞直方图的变化可反映某些人为的或一些干扰白细胞计数和分类计数的情况，比如外周血出现有核红细胞或巨大血小板，采血时由于技术原因造成血小板聚集或某些病理因素使红细胞膜对溶血剂有抵抗作用，使红细胞溶血不完全，以至测检标本中有大量红细胞膜碎片等情况，均可使白细胞直方图在50fl以下区域出现一个或大或小的小峰。因此当实验结果出现这种图形时，提示白细胞计数和分类计数均不准确，需在采取相应的手段进一步检测。,红细胞体积直方图的临床意义,与白细胞直方图不同，
11、某些贫血标本其红细胞体积直方图各有其特点，此种图形变化再结合其它参数进行分析，对鉴别诊断颇有价值。分析时，要注意观察图形的位置，峰底的宽度、峰顶的形态及有无双峰出现。,（1）缺铁性贫血的直方图： 其特点为曲线波峰左移，峰底变宽，显示小细胞不均一性 。,几种贫血时图形变化,（2）轻型-血红蛋白合成障碍的直方图 ： 表现为小峰左移，峰底变窄，典型的小细胞均一性贫血。,（1）缺铁性贫血的直方图： 其特点为曲线波峰左移，峰底变宽，显示小细胞不均一性 。,红细胞体积直方图的临床意义,几种贫血时图形变化,（3）铁粒幼细胞性贫血的直方图显示红细胞呈典型的“双形”性改变（即同时存在着两类型的红细胞，一种是低色
12、素红细胞，另一种是正常形态的红细胞）多见于铁粒幼细胞性贫血。在缺铁性贫血经治疗有效时，也可出现类似的图形，但峰底要更宽些。,红细胞体积直方图的临床意义,（4）叶酸缺乏引起的巨幼红细胞性贫血，治疗前与治疗后的直方图：治疗前直方图波峰右移，峰底增宽，显示明显的大细胞不均一性，是叶酸或维生素B12缺乏引起巨幼红细胞性贫血的重要直方图特征。给予叶酸或维生素B12后，幼稚细胞分化成熟正常，正常红细胞逐步释放入血液，而病理细胞并未全消亡，检测时即可再出现双峰，说明治疗有效。,几种贫血时图形变化,血小板体积直方图的临床意义,当检测标本中小细胞增多或出现细胞碎片或血小板凝聚时，都会影响实验结果，血小板体积直方
13、图也均能反映出这些变化。 因此在发出血小板报告之前，首先要观察其图形是否正常，如为异常的图形，应考虑有血小板凝聚，必要时作血涂片检查是否有小红细胞或大血小板增多现象。,血小板体积直方图的临床意义,常见血小析异常直方图,仪测血液细胞的影响因素,测试时试剂的温度对结果的影响 测试的时间对结果的影响 抗凝剂对结果的影响 溶血剂的用量及溶血时间，对血小板、白细胞计数影响 仪器的半堵孔现象及试剂的污染 病理因素对血液分析仪使用的影响,机测血液细胞的影响因素,由于多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、淋巴系统增殖性疾病、转移癌、自身免疫性疾病、感染及某些原因不明疾病血中含有冷球蛋白，或骨髓瘤、癌症、白血病、妊娠、血
14、栓疾病、糖尿病病人血中存在有冷纤维蛋白等，均可导致血液中某些物质凝集，致使血细胞计数增高；血液中白细胞显著增高而影响红细胞计数；有核红细胞出现而影响白细胞计数；红细胞内含大量SHb，能抵抗溶血剂作用，造成红细胞溶解不完全；某些新生儿或某些肝病病人红细胞膜质类异常，具抗溶血剂作用，导致红细胞溶血剂不完全；多发性骨髓瘤的M蛋白增多时，其M蛋白可与溶血剂发生反应而使结果偏高；各种病病引起的血栓前状态使血小板易于聚集，机测时影响结果,病理因素对血液分析仪使用的影响,测定后的分析,根据直方图变化判断计数结果是否准确，是否需要显微镜检查。 分析实验结果各参数之间的关系。 分析实验结果与临床资料的相关性。,
15、机测血细胞分析的进展,分析的多参数化 测定原理的多功能合成 操作流水线化,五分类细胞分析仪,1容量、电导、光散射（VCS）联合检测 2阻抗与射频联合技术 3光散射与细胞化学联合技术 4多角度偏振光散射技术,联合型血液分析系统血液工作站,在一个操作平台下，将血细胞分析仪、涂片机、染色机、网织红细胞仪串联在一起。血液先经血细胞分析仪检测，根据红细胞情况决定是否做网织红计数；根据HCT来改变推片机的角度和速度，以保证血涂片的合格。根据实验数据和直方图的变化，计算机选择是否需要一步显微镜检查。,流式细胞分析技术,集电子技术、计算机技术、激光技术、流体理论于一体 对单细胞或其他生物粒子进行定量分析和分选的检测 能同时从一个细胞中测得多个参数 可用于白血病的分型、肿瘤细胞染色体的异倍性测定，以及免疫学研究，并已开始用于细菌鉴定，病毒感染细胞的识别合爱滋病感染者T4、T8细胞的记数。,详细内容,谢谢大家！,