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1、 ABCD人民医院检验科 程序文件文件编号： 版本/修订号：A/0主题内容关于发布程序文件的声明生效日期：20060808 第 4 页 共144 页免疫室作业指导书 文件编号：ABCD-3-MY-0152第A版编制： 审核： 批准： 生效日期：2006年8月8日ABCD人民医院检验科 ABCD人民医院检验科 免疫室作业指导书文件编号： 版本/修订号：A/0主题内容 目 录生效日期：20060808 第 4 页 共178 页目 录序号主 题 内 容 代 号页 号1血清乙型肝炎病毒表面抗原检测ABCD-3-MY-0162血清乙型肝炎病毒表面抗体检测ABCD-3-MY-0293血清乙型肝炎病毒e抗原
2、检测ABCD-3-MY-03124血清乙型肝炎病毒e抗体检测ABCD-3-MY-04155血清乙型肝炎病毒核心抗体检测ABCD-3-MY-05186甲型肝炎病毒-IgM检测ABCD-3-MY-06217血清丙型肝炎病毒抗体检测ABCD-3-MY-07248血清麻疹IgM抗体试验ABCD-3-MY-08289人类免疫缺陷病毒抗体检测ABCD-3-MY-093110梅毒甲苯胺红不加热血清试验ABCD-3-MY-103411梅毒螺旋体特异性抗体检测ABCD-3-MY-113612免疫球蛋白A（IgA）测定ABCD-3-MY-123913免疫球蛋白M（IgM）测定ABCD-3-MY-134214免疫球
3、蛋白G（IgG）测定ABCD-3-MY-144515补体C3测定（免疫比浊法）ABCD-3-MY-154816补体C4测定（免疫比浊法）ABCD-3-MY-165117类风湿因子（RF）测定ABCD-3-MY-175418抗链球菌溶血素O（ASO）测定ABCD-3-MY-185619C反应蛋白（CRP）测定ABCD-3-MY-195820C反应蛋白（CRP）定量测定ABCD-3-MY-206021支原体肺炎血清学试验ABCD-3-MY-216322D二聚体检测（胶乳凝集法）ABCD-3-MY-226523甲胎蛋白（AFP）定量测定ABCD-3-MY-236824癌胚抗原（CEA）定量测定ABC
4、D-3-MY-247225糖链抗原125（CA125）定量测定ABCD-3-MY-257626CA153定量测定ABCD-3-MY-268027糖链抗原199（CA199）定量测定ABCD-3-MY-278428F-PSA定量测定ABCD-3-MY-288829T-PSA定量测定ABCD-3-MY-299230B12定量测定ABCD-3-MY-309631铁蛋白定量测定ABCD-3-MY-3110032叶酸（Folate）定量测定ABCD-3-MY-3210433人绒毛膜促性腺激素定量测定ABCD-3-MY-3310834血(尿)b2-MG微球蛋白定量测定ABCD-3-MY-3411235肌红
5、蛋白定量测定ABCD-3-MY-3511636肌钙蛋白-I定量测定ABCD-3-MY-3612037CK-MB定量测定ABCD-3-MY-3712438HBsAg半定量测定ABCD-3-MY-3812839HBsAb定量测定ABCD-3-MY-3913140HBeAg半定量测定ABCD-3-MY-4013541HBeAb半定量测定ABCD-3-MY-4113842HBcAb半定量测定ABCD-3-MY-4214143HBcAb-IgM半定量测定ABCD-3-MY-4314444CMV-IGM半定量测定ABCD-3-MY-4414745RUBELLA-IGM半定量测定ABCD-3-MY-4515
6、046微量加样器的质控ABCD-3-MY-4615447酶标分析仪操作维护规程ABCD-3-MY-4715748全自动酶标洗板机操作维护规程ABCD-3-MY-4815949特种蛋白测定仪操作维护规程ABCD-3-MY-4916050AxSYM免疫分析仪操作维护规程ABCD-3-MY-5016551免疫学室内质量控制操作程序ABCD-3-MY-5116952免疫学检验室间质量评价（EQA）ABCD-3-MY-52174 ABCD人民医院检验科 免疫室作业指导书文件编号： 版本/修订号：A/0主题内容 修 订 页生效日期：20060808 第 5 页 共178 页 修 订 页序号文件编号页码需更
7、改的内容更改内容批准人批准日期123456789101112131415161718192021 ABCD人民医院检验科 免疫室作业指导书文件编号：ABCD-3-MY-01版本/修订号：A/0主题内容 血清乙型肝炎病毒表面抗原检测生效日期：20060808 第 8 页 共178 页血清乙型肝炎病毒表面抗原检测（ELISA）1. 原理在微孔条上预包被被纯化乙肝表面抗体，配以酶标记抗体（HBsAb-HRP）及TMB等其它试剂，采用夹心法原理检测人血清（或血浆）中乙肝表面抗（HBsAg）。2. 标本采集2.1 采集前病人准备：受检者应空腹2.2 标本种类：血清或血浆2.3 标本要求：采集病人静脉血3
8、ml（可用EDTA抗凝），室温放置不超过4小时，分离血清备用。3. 标本储存：2-8保存不应超过1周，-20不应超过3个月，-70长期保存，应避免反复冻融。4. 标本运输：密封，室温运输。5. 标本拒收标准：污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。6. 试剂6.1 试剂名称：乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒6.2 试剂生产厂家：英科新创（厦门）科技有限公司。6.3 包装规格：96Test/Kit6.4 试剂盒组成：HBsAg微孔板，HBsAg酶标记抗体，HBsAg阳性对照血清，HBsAg阴性对照血清，浓缩洗涤液，底物A，底物B，终止液，封口膜，自封袋。6.5 试剂储存条件及有效期：2
9、-8避光保存，有效期9个月。7. 仪器设备7.1 仪器名称：自动酶标仪7.2 仪器厂家：Rayto7.3 仪器型号：RT-21008. 操作步骤8.1 平衡：将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25），微孔板开封后，余者及时以自封袋封存。8.2 配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1：19稀释后使用。8.3 编号：将微孔条固定于支架，按序编号。8.4 加样：分别用加样器在对照孔中加入阴、阳性对照血清各50ml于相应孔中。8.5 加酶：分别在每孔中加入酶标记抗体50ml，轻拍混匀。8.6 温育：置37温育60分钟，室温平衡5分钟。8.7 洗涤：用
10、洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。8.8 显色：每孔加入底物A、B各50ml，轻拍混匀，置37暗处15分钟。8.9 终止：每孔加终止液50ml，混匀。8.10测定：用酶标仪单波长450nm或双波长450/630nm测定各孔OD值（用单波长测定时需设空白对照一孔，30分钟内完成测定，并记录结果）。9. 结果判断与分析9.1 临界值（C.O.）的计算：临界值=阴性对照孔OD值N2.1，阴性对照OD均值大于0.1时应重新试验，小于0.05时以0.05计算。9.2 结果判定：样品OD值S/C.O=1者为HBsAg阳性样品OD值S/C.O=1者为HBsAb阳性 样品OD
11、值S/C.O=1者为HBeAg阳性 样品OD值S/C.O1者为HBeAg阴性10. 质量控制：每次试验用含量为2NCU/ml的HBeAg质控血清同步检测，S/CO值应在控制范围内；如失控，则要检查试剂效期、储藏温度、试验温度是否正常、操作步骤是否正确，直至重新试验使其在控。11. 参考范围：阴性或阳性12. 临床意义：HBeAg阳性可作为体内HBV处在复制状态及血清具有传染性的一个标志；持续阳性则揭示转为慢性。13. 操作性能：灵敏度高，特异性好。14. 方法局限性：样品显色深浅与样品中抗原的含量没有一定正相关。15. 注意事项15.1 每板建议设阴阳性对照血清各两孔，设空白对照时，不加样品及
12、酶标记抗体，其余各步相同。15.2 洗涤时各孔均须加满，防止孔口内有游离酶未能洗净。15.3 加试剂前应将试剂瓶翻转数次，使液体混匀。如果滴加，滴加前应弃去12滴。滴加时瓶身应保持垂直，以使滴量准确。注意勿将试剂滴在孔壁上。15.4 所有样品都应按传染源处理。15.5 封口膜使用说明15.5.1 微孔板拆封后，在取出当天所需的微孔条后，其余微孔条可以封口膜封存以避免受潮。在封存时，注意勿把封口膜粘贴到微孔条底部，以免影响其透光性。15.5.2 微孔板温育时，以封口膜覆盖孔口，可避免其他因素对实验带来的非预期的影响。15.6 不同品名、不同批号的试剂不可混用，以免产生错误结果。16. 当检测系统
13、（仪器）不能工作时，所采取的补救措施：应保证所有操作步骤正确无误；可以比对阴阳对照，肉眼判读；无法准确判读者，应留样待系统正常后复查。17. 参考文献：中华人民共和国卫生部医政司编。全国临床检验操作规程（第二版）412-413页。18. 其它：必须按规定使用经中国药品生物制品检定所检定并贴有“检定合格”防伪标签的试剂。 ABCD人民医院检验科 免疫室作业指导书文件编号：ABCD-3-MY-04版本/修订号：A/0主题内容 血清乙型肝炎病毒e抗体检测生效日期：20060808 第 17 页 共178 页血清乙型肝炎病毒e抗体检测（ELISA）1. 原理在微孔条上预包被被纯化乙肝e抗体（HBeAb
14、），配以酶标记抗原（HBeAb-HRP）、中和抗原（HBeAg）及TMB等其它试剂，采用竞争法原理检测人血清（或血浆）中乙肝e抗体（HBeAb）。2. 标本采集2.1 采集前病人准备：受检者应空腹。2.2 标本种类：血清或血浆。2.3 标本要求：采集病人静脉血3ml（可用EDTA抗凝），室温放置不超过4小时，分离血清备用。3. 标本储存：2-8保存不应超过24小时，-20不应超过3个月，-70长期保存，应避免反复冻融。4. 标本运输：密封，室温运输。5. 标本拒收标准：污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。6. 试剂6.1 试剂名称：乙型肝炎病毒e抗体诊断试剂盒6.2 试剂生产厂
15、家：英科新创（厦门）科技有限公司。6.3 包装规格：96Test/Kit6.4 试剂盒组成：HBeAb微孔板，HBeAb酶标记抗原，中和抗原，HBeAb阳性对照血清，HBeAb阴性对照血清，浓缩洗涤液，底物A，底物B，终止液，封口膜，自封袋。6.5 试剂储存条件及有效期：2-8避光保存，有效期9个月。7. 仪器设备7.1 仪器名称：自动酶标仪7.2 仪器厂家：Rayto7.3 仪器型号：RT-2100C8. 操作步骤8.1 平衡：将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25），微孔板开封后，余者及时以自封袋封存。8.2 配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去
16、离子水按1：19稀释后使用。8.3 编号：将微孔条固定于支架，按序编号。8.4 加样：分别用加样器在对照孔中加入阴、阳性对照血清各50ml于相应孔中。8.5 加酶：分别在每孔中加入酶标记抗体50ml，轻拍混匀。8.6 中和：分别在每孔中加入中和抗原（HBeAg）50ml，轻拍混匀。8.7 温育：置37温育60分钟，室温平衡5分钟。8.8 洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。8.9 显色：每孔加入底物A、B各50ml，轻拍混匀，置37暗处15分钟。8.10 终止：每孔加终止液50ml，混匀。8.11 测定：用酶标仪单波长450nm或双波长450/630nm
17、测定各孔OD值（用单波长测定时需设空白对照一孔，30分钟内完成测定，并记录结果）。9. 结果判断与分析9.1 临界值（C.O.）的计算：待测样品为原倍血清时，临界值阴性对照孔OD值N0.2，待测样品为非原倍血清时，临界值阴性对照孔OD值N0.5，（非原倍血清是指稀释血清、质控血清等）。9.2 结果判定：样品OD值S/C.O1者为HBeAb阴性10. 质量控制：每次试验用含量为2NCU/ml的HBeAb质控血清同步检测，S/CO值应在控制范围内；如失控,则要检查试剂效期、储藏温度、试验温度是否正常、操作步骤是否正确，直至重新试验使其在控。11. 参考范围：阴性12. 临床意义：HBeAb阳性可作
18、为体内HBV处在复制状态及血清具有传染性的一个标志。阳性表示机体已产生免疫力，病毒活力降低，传染性减弱，预后好。13. 操作性能：灵敏度高，特异性好。14. 方法局限性：样品显色深浅与样品中抗体的含量没有一定相关。15. 注意事项15.1 每板建议设阴阳性对照血清各两孔，设空白对照时，不加样品及酶标记抗体，其余各步相同。15.2 洗涤时各孔均须加满，防止孔口内有游离酶未能洗净。15.3 加试剂前应将试剂瓶翻转数次，使液体混匀。如果滴加，滴加前应弃去1-2滴。滴加时瓶身应保持垂直，以使滴量准确。注意勿将试剂滴在孔壁上。15.4 所有样品都应按传染源处理。15.5 封口膜使用说明15.5.1 微孔
19、板拆封后，在取出当天所需的微孔条后，其余微孔条可以封口膜封存以避免受潮。在封存时，注意勿把封口膜粘贴到微孔条底部，以免影响其透光性。15.5.2 微孔板温育时，以封口膜覆盖孔口，可避免其他因素对实验带来的非预期的影响。15.6 不同品名、不同批号的试剂不可混用，以免产生错误结果。16. 当检测系统（仪器）不能工作时，所采取的补救措施：应保证所有操作步骤正确无误；可以比对阴阳对照，肉眼判读；无法准确判读者，应留样待系统正常后复查。17. 参考文献：中华人民共和国卫生部医政司编。全国临床检验操作规程（第二版）412-413页。18. 其它：必须按规定使用经中国药品生物制品检定所检定并贴有“检定合格
20、”防伪标签的试剂。 ABCD人民医院检验科 免疫室作业指导书文件编号：ABCD-3-MY-05版本/修订号：A/0主题内容 血清乙型肝炎病毒核心抗体检测生效日期：20060808 第 20 页 共178 页血清乙型肝炎病毒核心抗体检测（ELISA）1. 原理在微孔条上预包被被纯化乙肝核心抗原（HBcAg），配以酶标记抗体（HbcAb-HRP）及TMB等其它试剂，采用竞争抑制法原理检测人血清（或血浆）中乙肝核心抗体（HBcAb）。2. 标本采集2.1 采集前病人准备：受检者应空腹。2.2 标本种类：血清或血浆。2.3 标本要求：采集病人静脉血3ml（可用EDTA抗凝），室温放置不超过4小时，分离
21、血清备用。3. 标本储存：2-8保存不应超过1周，-20不应超过3个月，-70长期保存，应避免反复冻融。4. 标本运输：密封，室温运输。5. 标本拒收标准：污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。6. 试剂6.1 试剂名称：乙型肝炎病毒核心抗体诊断试剂盒6.2 试剂生产厂家：英科新创（厦门）科技有限公司。6.3 包装规格：96Test/Kit6.4 试剂盒组成：HBcAb微孔板，HBcAb酶标记抗原，HBcAb阳性对照血清，HBcAb阴性对照血清，浓缩洗涤液，底物A，底物B，终止液，封口膜，自封袋。6.5 试剂储存条件及有效期：2-8避光保存，有效期9个月。7. 仪器设备7.1 仪
22、器名称：自动酶标仪7.2 仪器厂家：Rayto7.3 仪器型号：RT-2100C8. 操作步骤8.1 平衡：将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25），微孔板开封后，余者及时以自封袋封存。8.2 配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1：19稀释后使用。8.3 编号：将微孔条固定于支架，按序编号。8.4 加样：每测定孔加入50ml样品。对照孔中加入阴、阳性对照血清各50ml。作为临床诊断依据，必须将原倍血清样品按1：30稀释后再检验，稀释液应采用生理盐水或10mMPBS；作为流行病学调查依据，使用原倍血清检验。8.5 加酶：每孔加入酶标记抗体50
23、ml，轻拍混匀。8.6 温育：置37温育60分钟，室温平衡5分钟。8.7 洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。8.8 显色：每孔加入底物A、B各50ml，轻拍混匀，置37暗处15分钟。8.9 终止：每孔加终止液50ml，混匀。8.10 测定：用酶标仪单波长450nm或双波长450/630nm测定各孔OD值（用单波长测定时需设空白对照一孔，30分钟内完成测定，并记录结果）。9. 结果判断与分析9.1 临界值（C.O.）的计算：临界值阴性对照孔OD值N0.29.2 结果判定：样品OD值S/C.O1者为HBcAb阴性 10. 质量控制：每次试验用含量为2NCU
24、/ml的HBcAb质控血清同步检测，S/CO值应在控制范围内；如失控，则要检查试剂效期、储藏温度、试验温度是否正常、操作步骤是否正确，直至重新试验使其在控。11. 参考范围：阴性12. 临床意义：高效价阳性表示现实感染，低效价阳性表示既往感染。13. 操作性能：灵敏度高，特异性好。14. 方法局限性：样品显色深浅与样品中抗体的含量没有一定相关。15. 注意事项15.1 每板建议设阴阳性对照血清各两孔，设空白对照时，不加样品及酶标记抗体，其余各步相同。15.2 洗涤时各孔均须加满，防止孔口内有游离酶未能洗净。15.3 加试剂前应将试剂瓶翻转数次，使液体混匀。如果滴加，滴加前应弃去1-2滴。滴加时
25、瓶身应保持垂直，以使滴量准确。注意勿将试剂滴在孔壁上。15.4 所有样品都应按传染源处理。15.5 封口膜使用说明15.5.1 微孔板拆封后，在取出当天所需的微孔条后，其余微孔条可以封口膜封存以避免受潮。在封存时，注意勿把封口膜粘贴到微孔条底部，以免影响其透光性。15.5.2 微孔板温育时，以封口膜覆盖孔口，可避免其他因素对实验带来的非预期的影响。15.6 不同品名、不同批号的试剂不可混用，以免产生错误结果。16. 当检测系统（仪器）不能工作时，所采取的补救措施：应保证所有操作步骤正确无误；可以比对阴阳对照，肉眼判读；无法准确判读者，应留样待系统正常后复查。17. 参考文献：中华人民共和国卫生
26、部医政司编。全国临床检验操作规程（第二版）413页。18. 其它：必须按规定使用经中国药品生物制品检定所检定并贴有“检定合格”防伪标签的试剂。 ABCD人民医院检验科 免疫室作业指导书文件编号：ABCD-3-MY-06版本/修订号：A/0主题内容 甲型肝炎病毒-IgM检测生效日期：20060808 第 23 页 共178 页甲型肝炎病毒-IgM检测(ELISA法)1. 原理本法是用抗人链捕获待测血清中特异性IgM，然后用HAV与特异性IgM抗体反应，再加酶标记抗M抗体，最后加底物显色。2. 标本采集2.1 采集前病人准备：受检者应空腹。2.2 标本种类：血清或血浆。2.3 标本要求：采集病人静
27、脉血2ml（可用EDTA抗凝），室温放置不超过4小时，分离血清备用。3. 标本储存：2-8C保存不应超过1周，-20C不应超过3个月，-70C长期保存，应避免反复冻融。4. 标本运输：密封，室温运输。5. 标本拒收标准：污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。6. 试剂6.1 试剂名称：抗HAVIgM检测ELISA试剂盒6.2 试剂生产厂家：郑州博赛生物技术研究所6.3 包装规格：48Test/Kit6.4 试剂盒组成：包被反应板，样品稀释液，酶标记抗体，阳性对照血清，阴性对照血清，浓缩洗涤液，底物A，底物B，终止液，封口膜，密封袋。6.5 试剂储存条件及有效期：2-8C避光保存，
28、有效期6个月。7. 仪器设备7.1 仪器名称：自动酶标仪7.2 仪器厂家：Rayto7.3 仪器型号：RT-2100C8 操作步骤8.1 平衡：将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25C），微孔板开封后，余者及时以自封袋封存。8.2 配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1：19稀释后使用。8.3 编号：将微孔条固定于支架，按序编号。8.4 加样品稀释液：用加样器在微孔反应条板孔中加入样品稀释液，每孔100ml，空下四孔准备加对照。8.5 加标本和留空白：将每份待检标本各5ml分别加入已有样品稀释液的各孔中，留下一孔不加标本作空白对照，标好位置。
29、8.6 加对照：在预先空下的四孔中用加样器分别加入阴性对照一孔，阳性对照三孔，每孔100ml，标好位置。对照应在所有标本加完以后再加，以保证阈值准确性。8.7 温育（一）：充分混匀，加上封板膜，置37温育20分钟。8.8 洗涤（一）：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。8.9 加酶：分别在每孔中加入酶标记抗体100ml，轻拍混匀。8.10 温育（二）：充分混匀，加上封板膜，置37温育30分钟。8.11 洗涤（二）：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。8.12 显色：每孔加入底物A、B各50ml，轻拍混匀，置37暗处10分钟。8
30、.13 终止：每孔加终止液50ml，混匀。8.14 测定：用酶标仪单波长450nm或双波长450/630nm测定各孔OD值（用单波长测定时需设空白对照一孔，30分钟内完成测定，并记录结果）。9. 结果判断与分析9.1 临界值（C.O.）的计算：临界值阴性对照孔OD值N2.1，阴性对照OD均值大于0.1时应重新试验，小于0.05时以0.05计算。9.2 结果判定：样品OD值S/C.O=1者为阳性 样品OD值S/C.O1者为阴性10. 质量控制：每次均应有阴阳对照，其OD值应在要求范围内。11. 参考值范围：阴性12. 临床意义：血清中抗HAV-IgM在亚临床期即已出现，其滴度在感染后3个月维持在1000以上，已被公认为早期诊断甲型肝炎的依据。13. 操作性能：特异性强，灵敏度高，重复性好。14. 方法局限性15. 注意事项15.1 每板建议设阴阳性对照血清各两孔，设空白对照时，不加样品及酶标记抗体，其余各步相同。15.2 洗涤时各孔均须加满，防止孔口内有游离酶未能洗净。15.3 加试剂前应将试剂瓶翻转数次，使液体混匀。如果滴加，滴加前应弃去1-2滴。滴加时瓶身应保持垂直，以使滴量准确。注意勿将试剂滴在孔壁上。15.4 所有样品都应按传