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1、2013-2014学年度实验专题复习,培养基的配制称量溶化调pH分装包扎,微生物培养的基本程序,一、光学显微镜操作技术（制片、染色、观察）,1.实验目的：,观察细胞或细胞器的形态、显微结构 （如有丝分裂、线粒体、叶绿体） 观察细胞的活性或生理变化 （如细胞质流动、质壁分离及复原） 观察细胞内特定物质的分布 （如DNA、RNA的分布、脂肪的鉴定） 微生物的计数 （探究培养液中酵母菌种群数量的动态变化）,2.实验原理：,结构本身有颜色、易观察，不染色（+变化原理） （如观察叶绿体、细胞质流动、质壁分离及复原） 结构本身无颜色、不易观察，需染色 观察细胞的活性或生理变化活体染色 （如观察线粒体健那绿
2、B；观察液泡中性红） 观察静态结构或细胞内特定物质的分布染色 （如DNA、RNA的分布、脂肪的鉴定、有丝分裂）,（3）在可计量空间内计数微生物的数量统计。,2.实验原理：,3.材料用具：,材料：易获得、易处理、易观察 用具和试剂（据此可以推测实验原理）,4.方法步骤：取材制片观察,预处理,花生种子浸泡,切花生子叶薄片,撕取洋葱鳞片叶内表皮,刮取口腔上皮细胞,刮取口腔上皮细胞,黑藻光下、温暖条件下培养,剪取取黑藻叶片,剪取根尖,撕取洋葱鳞片叶外表皮,水培洋葱或大蒜等,组织中蛋白质检测,组织中还原糖检测,DNA粗提取和鉴定,亚硝酸盐的定量测定,苏丹或,甲基绿、派洛宁,龙胆紫或醋酸洋红,双缩脲试剂,
3、斐林或本尼迪特,二苯胺,对氨基苯磺酸、 N-1-萘基乙二胺溶液、 乙酸,玫瑰红色,蓝色,还原Cu（OH）2为砖红色Cu2O,碱性条件下，紫色,染色体被碱性染料着色,橘黄色或红色，亲脂,蓝绿色、红色，竞争结合,健那绿,专一性活细胞染料，蓝绿,5.临时装片制作,擦 滴 取 展 盖 染,2019/3/30,he9,临时装片的制作方法,以下制片方法分别用于什么实验？ 切片法 整体装片法 涂片法 压片法 撕片法,2019/3/30,he10,6.显微观察的一般方法：, 显微镜结构:机械结构、光学结构 凹面、平面反光镜、遮光器、通光孔 物镜、目镜镜头长短与放大倍数,he12, 显微镜取放 显微观察：（低倍
4、高倍） 低倍显微镜观察： 调光调焦（粗、细）调物象位置,2019/3/30,he14,2019/3/30,he15,问题：,低倍镜和高倍镜光亮度差异及调节 无色透明结构的观察 手动装片的方向和视野中物象移动方向的关系 低倍物镜转换为高倍物镜的操作,（4）成像问题,倒像-移片 放大倍率-目物 视野直径与放大倍率成反比 放大倍数越大，视野亮度越小,2019/3/30,he17,苏丹染色结果,2019/3/30,18,1,猪脂肪细胞苏丹,染色10分钟,实验步骤,2019/3/30,he23,10%盐酸 1015min,解离,1011或 1516时,剪根,龙胆紫染液30秒,染色,盖片后缓挤压、轻扣击,
5、压片,用显微镜观察根尖分生组织 细胞的有丝分裂,质壁分离及复原实验现象,2019/3/30,he24,2019/3/30,he25,2019/3/30,he26,（2005全国）植物叶片表皮上分布着大量的气孔，气孔结构如图所示。当组成气孔的细胞（保卫细胞）吸水后，会膨胀变形，气孔开启。反之细胞失水收缩，气孔关闭。请根据所给的材料和用具，设计一个实验，证明气孔具有开启和关闭的功能。要求写出实验材料与主要用具 、实验步骤、预测实验结果并做出解释。,2.实验原理?,1.实验目的?,3.材料用具:,4.方法步骤:,取材:,观察：,制片:,处理:,再观察:,菠菜、清水、浓盐水、盖玻片、载玻片、显微镜、吸
6、水纸、滴管、镊子等。,用镊子撕取菠菜叶下表皮,载玻片上滴一滴清水，将下表皮平展放入清水中，盖上盖玻片，制成临时装片。,将临时装片放在显微镜的载物台上，先在低倍镜下找到气孔，移到视野中央，再用高倍镜进行观察，记录观察到的气孔状态。,在盖玻片的一侧滴上浓盐水，在另一侧用吸水纸引 流，反复多次 。,连续观察气孔的变化，并作记录。,质壁分离及其复原实验的应用,5.预期实验结果(现象)及解释：,在清水中气孔开启:,因为当细胞液浓度大于细胞外溶液的浓度时，保卫细胞吸水膨胀变形，气孔开启。,在浓盐水中气孔关闭:,因为当细胞液浓度小于细胞外溶液的浓度时，保卫细胞失水收缩，气孔关闭。,气孔具有开启和关闭的功能,
7、6.实验结论:,具备验证简单生物学事实的能力，能对实验现象和结果进行解释、分析和处理。,（2010新课标卷）若要在普通显微镜下观察到质壁分离、RNA和脂肪，下列四组材料中应选择的一组是 A水稻胚乳和花生子叶 B天竺葵叶和水稻胚乳 C紫色洋葱和花生子叶 D天竺葵叶和紫色洋葱,观察植物细胞的质壁分离及复原,1、实验原理 当细胞液的浓度外界溶液的浓度时,外界溶液中的水分就透过原生质层进入细胞液中,整个原生质层就会慢慢地恢复成原来的状态,使植物细胞逐渐发生质壁分离复原。,2019/3/30,he30,一个成熟的植物细胞，由细胞壁、细胞膜、细胞质和细胞核几部分构成，细胞质里还有一个大的液泡，液泡的表面是
8、液泡膜。 细胞壁主要是由纤维素分子构成的，呈网状结构，有许多小的孔洞，水分子和溶解在水里的物质都能够自由通过。因此，细胞壁是全透性的。 细胞膜和液泡膜则与细胞壁不同，它们都是选择透过性膜，水分子可以自由通过，而蔗糖分子则不能。从整个细胞来看，可以把原生质层(包括细胞膜、液泡膜和这两层膜之间的细胞质)看作是一层选择透过性膜。这层膜把液泡里面的细胞液与外界环境隔开。细胞液含有很多溶解于水中的物质，因此它具有一定的浓度。 由于原生质层相当于选择透过性膜，原生质层两侧的溶液具有溶度差，因此当植物细胞与外界溶液接触时，细胞液也会通过原生质层与外界溶液发生渗透作用。,把成熟的植物细胞放入浓蔗糖溶液中，由于蔗糖溶液的浓度大于细胞液浓度，细胞液中的水分就会向外渗透。这时用显微镜可以观察到液泡的体积在收缩变小。由于细胞壁的收缩性较小，而原生质层的收缩性较大，液泡和原生质层不断地收缩，结果原生质层就与细胞壁分离开来，缩成球形小团，原生质层与细胞壁之间充满了蔗糖溶液。这种原生质层与细胞壁分离的现象，叫做质壁分离. 如果把已经发生质壁分离的细胞，放入清水或浓度比细胞液低的蔗糖溶液中，外面的水分就会向内渗入，液泡将逐渐变大，原生质层和液泡逐渐恢复原状。这种现象叫做质壁分离复原。,