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1、实验四,一、 录像:肠道杆菌的检测 二、 肠道杆菌的生化反应 三、 抗酸染色及TB菌落 四、钩端螺旋体,二、 肠道杆菌的生化反应,(一)SS琼脂培养基 (肠道致病菌的强选择鉴别培养基) 1 、原理:乳糖发酵 2、成分(胆硫乳琼脂) 乳糖 中性红 (6.88.0 ) 胆酸盐,酸,变红,碱,变黄,非致病菌,致病菌,3、结果,大肠杆菌,伤寒杆菌,菌落红色,非致病菌,菌落黄色,致病菌,(二)糖发酵实验,1、单糖发酵(液体培养基),糖 酚红 6.88.0 倒置U型管 细菌,酸:,变黄,碱:,变红,2、双糖发酵,乳糖、酚红的固体培养基,葡萄糖、酚红的半固体培养基,2、双糖发酵,大肠杆菌 副伤寒杆菌 + -
2、 + +,斜面,底层,斜面,底层,(三) 蛋白质分解产物,1、H2S 试验,含硫氨基酸、醋酸铅的半固体培养基,PbS黑色沉淀,乙型副伤寒杆菌,+,-,2、吲哚试验,含色氨酸的液体培养基,大肠杆菌,乙型副伤寒杆菌,+,-,吲哚试剂,三、抗酸染色,结核杆菌细胞壁脂质含量较高,特别是其中大量分枝菌酸与石炭酸复红牢固结合,可抵抗盐酸酒精脱色,故菌体呈红色,1、原理:,初染:石炭酸复红810分钟,水洗 脱色:3%盐酸酒精30秒,水洗 复染:吕氏美兰1分钟,水洗,(5)吸水纸吸干,油镜观察,2、步骤: (1)涂片 (2)干燥 (3)固定 (4)染色,3、结果: 抗酸菌 红色 非抗酸菌及细胞 蓝色,结核分枝杆菌 抗酸染色 10 100,观察要点,1、抗酸染色阳性,呈红色 2、细长略带弯曲杆菌,末端可呈分枝状 3、排列方式 4、标本中可见有痰细胞,四、钩端螺旋体,钩端螺旋体 镀银染色 1000,观察要点,标本染色为镀银染色,颜色比较特殊 菌体一端或两端弯曲成钩状 菌体可呈C形、S形或问号形状,画图,结核杆菌 钩端螺旋体,