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1、实验一 显微镜油镜的使用和细菌形态的观察,目的要求 显微镜油镜使用的原理 实验材料 实验程序 思考题,目 的 要 求,学习并掌握显微镜油镜的使用技术及维护的基本知识 使用油镜观察细菌的几种基本形态 用悬滴法在高倍镜或油镜下观察细菌的运动,显微镜油镜使用的原理,普通光学显微镜 欧林巴斯(OLYMPUS)生物显微镜 欧林巴斯(OLYMPUS)相差显微镜,普通光学显微镜,显微镜的构造 1.光学部分:接目镜 、 接物镜 、 照明装置(聚光镜、 虹彩光圈、 反光镜等). 它使检视物放大,造成物象. 2.机械部分:镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、载物台转移器、粗调节器、细调节器等部件.它起着支持 调
2、节 固定等作用.,普通光学显微镜,显微镜的放大倍数和分辨率 1.放大倍数=接物镜放大倍数接目镜放大倍数 2. 显微镜的分辨率 是表示显微镜辨析物体(两端)两点之间距离的能力,可用公式表示为: D=/2nsin(/2 ) 式中D:物镜分辨出物体两点间的最短距离。 :可见光的波长(平均0.55m) n: 物镜和被检标本间介质的折射率。 :镜口角(即入射角)。,普通光学显微镜,油镜使用的原理 油镜,即油浸接物镜。当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时,由于空气与玻片的密度不同,使光线受到曲折,发生散射,降低了视野的照明度。若中间的介质是一层油(其折射率与玻片的相近),则几乎不发生折射,增加了视野的
3、进光量,从而使物象更加清晰。,实 验 材 料,显微镜(显微镜灯)、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸等。 细菌三种形态的染色标本。 培养1218h的枯草杆菌(B.subtilis) 盖玻片、凹玻片、接种环、酒精灯。,实验程序(显微镜的使用),主要是油镜的使用 1.用前检查:零件是否齐全,镜头是否清洁。 2.调节光亮度 3.低倍镜观察:粗调、细调 4.依次再进行中倍、高倍观察 5.油镜观察:高倍镜下找到清晰的物象后,提升聚光镜,在标本中央滴一滴香柏油,使油镜镜头浸入香柏油中,细调至看清物象为止。 6.换片:另换新片,必须从第三条开始操作。 7.用后复原:观察完毕,上悬镜筒,先用擦镜纸擦去镜头上的油,
4、然后再用擦镜纸沾取少量二甲苯擦去残留的油,最后用擦镜纸擦去残留的二甲苯,后将镜体全部复原。,实验程序(显微镜的使用),显微镜保养和使用中的注意事项: 1.不准擅自拆卸显微镜的任何部件,以免损坏。 2.镜面只能用擦镜纸擦,不能用手指或粗布,以保证光洁度 3.观察标本时,必须依次用低、中、高倍镜,最后用油镜。当目视接目镜时,特别在使用油镜时,切不可使用粗调节器,以免压碎玻片或损伤镜面。 4.观察时,两眼睁开,养成两眼能够轮换观察的习惯,以免眼睛疲劳,并且能够在左眼观察时,右眼注视绘图。 5.拿显微镜时,一定要右手拿镜臂,左手托镜座,不可单手拿,更不可倾斜拿。 6.显微镜应存放在阴凉干燥处,以免镜片
5、滋生霉菌而腐蚀镜片。,实验程序III,细菌三种基本形态的观察: 菌落形态观察和个体形态观察,这里主要指个体形态的观察。 1. 结合油镜的使用,观察三张细菌染色片(球状菌、杆状菌、和螺旋状菌),边观察边绘图。 2. 看示范镜:观察双球菌、四联球菌,并绘图。,实验程序,细菌运动性的观察(示范): 一般采用水浸片法、悬滴法、半固体培养法,常用水浸法和悬滴法来观察细菌的运动性。 1. 水浸片法 2. 悬滴法,欧林巴斯(OLYMPUS)生物显微镜,OLYMPUS生物显微镜是由日本进口的一种双筒光学显微镜,它使用方便,分辨率高,并且有立体感。是目前研究微生物的良好工具。 显微镜的结构,录像演示,欧林巴斯(
6、OLYMPUS)生物显微镜 (显微镜的使用方法 ),1. 接通电源。 2. 打开主开关。 3. 移动电压调整旋,使亮度适中。 4. 把标本固定在再物台上。 5. 放松粗调锁挡。 6. 用低倍物镜,旋转粗调和微控制钮来进行对焦。 7. 调节双目镜筒间距和视度差。 8. 再适当调节照明度。 9. 使焦点正确地对准标本。,10. 锁紧粗调锁挡。 11. 调节孔径光栏。 12. 依次用低、中、高倍镜观察。 13. 油镜观察:与普通光学显微镜方法一致。 14. 观察完毕,复原:先将电压调节旋钮复原,关闭主开关,切断电源,放开粗调锁挡。油镜的处理与普通光学显微镜方法一致。 15. 放入保存箱中。,欧林巴斯
7、(OLYMPUS)相差显微镜,相差显微镜的工作原理 相差显微镜具有一个特殊的由环状光圈与聚光镜组合的转盘聚光镜,通过这个特殊的装置,就可把光波的相位差异变为振幅差异,从而使人们肉眼即能观察到活细胞的细微结构,并有立体感。常用来观察活细胞结构,鞭毛的运动等。,相差显微镜的装置 1. 环状光圈 2. 相差物镜(具有环状相板) 3. 定中心望远镜(亦称辅助目镜) 4. 辅助固定扳手 5. 绿色滤光片,欧林巴斯(OLYMPUS)相差显微镜,相差显微镜的使用方法 1. 相差装置的安装 :转盘聚光镜 绿色滤光片 2. 相差物镜的安装 3. 安放标本 4. 对光 5. 调焦:用粗调控制钮和微调控制钮调节焦,看清物象时为止 6. 旋转相差转盘 7. 中心调节 8. 相差观察,思 考 题,油镜与普通物镜在使用方法上有何不同?应特别注意些什么? 使用油镜时,为什么必须用镜头油? 镜检标本时,为什么先用低倍镜观察,而不是直接用高倍镜或油镜观察?,实 验 一,结 束,