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1、实验三 血涂片染色及白细胞分类计数,目的 1.初步掌握血涂片制作及染色技术。 2.学会辨认外周血中各种白细胞的形态特点 及其分类计数的方法。 3.记住其参考值和临床意义。,一、血涂片的制备与染色,2.操作步骤 （1）末梢采血 常规消毒皮肤，穿刺后拭去第一滴血。用 载玻片的一端刮取血液一小滴。 （2）将推片的平齐端置载玻片上血滴的稍前方，将推片略 向后移使之与血液接触血液沿着推片与载玻片的夹 角散开(推片的拿法）。 （3）以约30的夹角向前均匀的推动即可制成血涂片，其 厚薄要适中，衬以白纸时应呈淡的红黄色，且有头、 体、尾之分。,一、血涂片的制备与染色（临检指导P10）,1.原理 由于各种细胞成
2、分的化学性质不同，对染料的反应也不同，导致染色后在同一张血片上可见到不同的色彩。瑞士染色法是血膜、骨髓和印片的常规染色。瑞士染料中含有碱性美蓝和酸性伊红两种成分，它们与细胞内的各种物质具有不同的亲和力，而使细胞显现出不同的色调： （1）血红蛋白、嗜酸性颗粒为碱性蛋白，与酸性染料伊红结合，染粉红 色，称嗜酸性物质。 （2）细胞核蛋白和淋巴细胞胞质为酸性，与碱性染料美蓝结合，染紫 色，称嗜碱性物质。 （3）中性物质呈等电状态与美蓝、伊红均可结合，染淡紫红色，称中性 物质。,（4）血涂片干后，滴加瑞氏染液数滴于血涂片上（以盖住血 膜为度），静置约1min，目的在于用染液的甲醇成分 固定血细胞。 （5
3、）加相当于染液1.5-2倍量的缓冲液，用吸耳球充分混匀。 （6）冲洗 染色约5-10min，即可用水冲去染液干燥后镜检。,一、血涂片的制备与染色,3.注意事项 （1）作血涂片时勿用伤口第一滴血，以免混有来自受损血管的内皮细胞。 （2）血涂片薄厚适度，过厚时细胞簇集影响形态观察，过薄则白细胞太 少不易分类。影响血涂片薄厚的因素为：血滴过大、夹角过大、 推片速度过快则厚；血滴太小、夹角过小、推片过慢则薄。 （3）加瑞氏染液或缓冲液后，切勿干燥（以免血涂片中有渣干扰镜检）。 （4）染色时间的长短根据血膜厚薄、室温及染液配制的时间长短而定。 （5）要以流水冲去染液，而不可先弃去染液再冲水，以免留有残渣
4、。,二、白细胞分类计数（临检指导P34）,1操作步骤（观察区域的选择） （1）低倍镜观察 观察白细胞的分布及染色情况。 （2）油镜观察 选好厚薄适宜、染色良好且红细胞分布均匀 处，滴加香柏油一滴，用油浸镜观察。一般胞体较大 的白细胞如嗜酸性粒细胞、单核细胞、中性粒细胞于 涂片的上下边缘处多见，而胞体较小的白细胞如淋巴 细胞则以涂片中心地带为多。,二、白细胞分类计数,2.计算 通常计数100个白细胞（必要时可增到200或更多）， 按下图所示方向移动血涂片，同时将所遇到的各类白细胞 分别记录、直到计数100个白细胞为止，计算每类白细胞 的数目，即其百分数值。,分类计数时以画“正”字作如下记录： 中
5、性杆状核 正 中性分叶核 正 正 正 正 正 正 正 正 正 正正 正 正 嗜酸性粒细胞 一 嗜碱性粒细胞 淋巴细胞 正 正 正 正 正 单核细胞 正 一,二、白细胞分类计数,3.参考值（成人） 中性杆状核粒细胞 1%-5% 中性分叶核粒细胞 50%-70% 嗜酸性粒细胞 0.5%-5% 嗜碱性粒细胞 0-1% 淋巴细胞 20%-40% 单核细胞 3%-8%,二、白细胞分类计数,4.注意事项 （1）分类时一定要用油镜观察，应同时观察白细胞有无质变。 （2）分类报告时，有核红细胞应另外计数，并观察成熟红细 胞、血小板的形态，注意有无寄生虫及其他异常细胞。,（3）染色结果偏酸时，红细胞偏红，嗜酸性颗粒呈鲜艳的桔 红色，但各种白细胞的核仅染成极淡蓝色或根本不着色 常见于甲醇质量不纯、载物片有残余酸或缓冲液PH过低 所致。染色结果偏碱时，红细胞呈灰蓝色，中性粒细胞 颗粒为黑蓝色较粗大、似中毒颗粒，核染为深紫蓝色， 着色均匀结构不清，嗜酸性颗粒失去鲜艳色彩而呈褐色 甚至黑蓝色，常因染液偏碱或玻璃片有残余碱所致。,二、白细胞分类计数,5.方法学评价 是传统的分类法，能及时准 确的发现异常细胞。,