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1、医学微生物学实验,微生物学教研室 2011年12月,实验内容,一、细菌染色标本检查法 抗酸染色法（操作） 二、标本片观察： （钩体 、白色念珠菌，曲霉、枯草芽胞杆菌、）,目的要求,掌握抗酸染色技术 掌握钩体，白色念珠菌、曲霉、枯草杆菌基本形态,分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，主要是分枝菌酸，它包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来促使其着色。但分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色，故名抗酸染色。 齐-尼氏抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与石炭酸复红牢固结合成复合物，用盐酸酒精处理也不脱色。当再加碱性美兰复染后，分枝杆菌仍然为红色，而其他
2、细菌及背景中的物质为兰色。,一、抗酸染色原理,抗酸染色,材料： 标本：卡介苗 染液：石炭酸复红，3%盐酸酒精，美蓝 器具：同革兰氏染色,实验方法： 1、细菌涂片标本的制备 涂片 干燥 固定,3、油镜观察,1）初染：用玻片夹夹持涂片标本，滴加石炭酸复红2-3滴，在火焰高处徐徐加热，切勿沸腾，出现蒸汽即暂时离开，若染液蒸发减少，应再加染液，以免干涸，加热3-5分钟，待标本冷却后用水冲洗。 2）脱色： 3%盐酸酒精脱色301；用水冲洗。 3）复染：用碱性美兰溶液复染1，用水冲洗后用吸水纸吸干。,2、染色,抗酸染色步骤,1、涂片包括涂片、干燥、固定三步。 涂片 干燥 固定,抗酸染色步骤,2、染色包括初染、脱色、复染三步。,石炭酸复红维持 3-5 3%盐酸酒精30 1 美蓝复染1 冲洗 干燥 油镜观察,冲洗,冲洗,初染,脱色,复染,三、抗酸染色结果,抗酸菌呈红色， 常堆积成团， 排列无序， 偶呈分枝状生长。 背景及非抗酸性细菌呈兰色。,注意事项：,1、无菌操作 2、菌种管摇匀后取菌 3、涂片均匀 4、初染加热维持35分钟，勿沸腾烧干 5、冷却后冲洗 6、油镜下从视野中找红色抗酸菌,二、标本片观察,白色念珠菌 钩体 枯草杆菌 曲霉,白色念珠菌,钩端螺旋体,类炭疽（枯草杆菌）,炭疽杆菌,曲霉,实验报告,绘制抗酸染色结果镜下图 绘制四张标本片镜下图,