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1、二.林木病原细菌,林木病原细菌的一般性状 细菌形态和结构 形态大多杆状,个别丝状 细菌大多单生大小一般为1-3x0.5-0.8微米，要在苯酚品红染色后在x的油镜下才能观察到,大多有鞭毛 极鞭着生在菌体的一端或两端 周鞭着生在菌体的四周 鞭毛着生的位置是分类的依据 一般要对鞭毛染色后再镜检,菌体结构,黏质层(较厚而固定的称作荚膜)-细胞壁(多糖，拟脂类和甲壳质组成) -质膜（质膜下的小粒状鞭毛穿过细胞壁和黏质层延伸到体外） -胞质（异染粒中性体气泡液泡核糖体）-核区（DNA，无核膜）无芽孢,用革兰氏染色法可反映细胞壁的差异,革兰氏阴性菌壁厚，肽聚糖为主 革兰氏阳性菌壁薄，有脂多糖和脂蛋白 革兰氏
2、染色是用结晶紫草酸铵对细菌染色，经酒精脱色后再用番红复染以便观察未能脱色的为阳性（紫色），脱色的为阴性（红色）,革兰氏染色阳性大肠杆菌 革兰氏染色阴性枯草杆菌,植物病原细菌对链霉素敏感，可用于防治细菌病害,培养性状，繁殖，遗传和变异,培养性状：固定培养基上菌落 液体培养基上混浊，絮状物，菌膜，菌环等 繁殖繁殖方式为裂殖，繁殖速度为次分钟，S形生长曲线,遗传,遗传裂殖时细胞内物质均等分配到子细胞 质粒染色体DNA之外的可自我复制的环状双链DNA，常带有与抗药性，致病性，性结合有关的基因,变异,类有性作用 接合：一个细胞的遗传物质可以部分进入另一个细胞，接受遗传物质的细菌在分裂繁殖时体内的两种遗传
3、物质重新组合 突变频率低但次数多 转化：由于菌体破裂，一个细胞的遗传物质释放出来，进入另一个有亲和力的同种或近似种的菌体内，并作为后者遗传物质的一部分,转导：噬菌体侵染和在消解一种细菌时， 其DNA可以携带寄主细胞的部分遗传物质，在侵染另一个细菌时，就可以将遗传物质带到第二个细菌体内作为它的遗传物质的一部分,噬菌体：细菌的病毒，专性寄生，一般蝌蚪状，在细菌液体培养时使培养液变清，在细菌培养平板上形成透明斑（噬菌斑）,寄生性：绝大多数非专性寄生,极少数专性寄生 鉴定方法: 症状观察: 染色镜检鉴定法(革兰氏染色法和鞭毛染色法) 培养性状鉴定法(菌落性状观察,生理生化性状观察) 致病性测定: 血清
4、学鉴定法: 核酸技术:,植物病原细菌的主要类群,薄壁菌门 重要属: 野杆菌属Agrobacterium,也叫脓杆菌杆菌属,革兰氏阴性菌，鞭毛周生，引起植物组织肿瘤或畸形 假单胞杆菌属Pseudomonas革兰氏阴性菌，鞭毛数根，菌落白色，能产生荧光性色素，引起叶斑，溃疡，果斑,黄单胞杆菌属Xanthomonas革兰氏阴性菌，鞭毛根，菌落黄色，能产生非水溶性黄色色素，柑橘溃疡病,核桃黑斑病 欧氏杆菌属Erwina革兰氏阴性菌，鞭毛周生，引起植物组织腐烂或萎焉,厚壁菌门 棒杆菌属Gorynebacterium（Clavibacter）革兰氏阳性菌，多数无鞭毛,软壁菌门,植原体属（Phytomona
5、s） 引起的病状很象病毒病的症状，主要是黄化丛枝症状以前放在病毒病中，后来发现有些病可用四环素治疗，在电镜下可看到哑铃状类似于菌原体的生物体，改成类菌原体，近年来将其归到植原体属中，引起桑的萎缩病，造成节尖缩短，丛枝，缩叶，黄化；泡桐丛枝病：丛枝，花果变枝叶，黄化，有传染性,螺原体属（Spiroplasma） 菌体的基本形态为螺旋形 繁殖时可产生分支，分支也螺旋形 引起柑橘僵化病（S.citri）节间变短，缩小，丛生枝或丛芽树皮增厚，植株矮化，并且全年可开花，但结果小而少，多畸形，易脱落 可以人工培养，在培养基上形成“荷包蛋”状菌落,油橄榄肿瘤病Pseudomonas假单胞杆菌属,杨属柳属山楂
6、属果树冠瘿病Agrobacterium （野杆菌属）根瘤,根部小木瘤,病原细菌,柑橘溃疡病Xanthomonas campestri pv.citri (Hasse)黄单胞杆菌属X.citri同物异名,症状,病原,细菌病害的症状 侵染循环和防治,症状,斑点 溃疡 萎焉,侵染循环,植物病原细菌从伤口侵入,有的从自然孔口侵入 寄生性弱的细菌一般都是从伤口侵入 寄生性强的细菌从伤口和自然孔口都能侵入 假单胞杆菌属和黄单胞杆菌属的细菌引致叶斑病, 一般是从自然孔口侵入,棒形杆菌属、欧氏杆菌属和土壤杆菌属的细菌引致萎蔫、腐烂和瘤肿, 多半是从伤口侵入 有多次再侵染的机会 在自然条件,传播靠雨水溅洒作用,
7、故传播距离不会很远 带菌的种苗是细菌病害传染的重要来源 昆虫介体也可传播细菌 工具传播,侵染来源,细菌在受害苗木内越冬,成为初侵染来源 种子和无性繁殖器官：带菌种苗是最重要的初侵入来源，带菌种苗调运可远距离传播 病残体：植物病原细菌可以在病株残余组织中长期存活，也是重要的初侵染来源,土壤：主要存活于土壤中的作物残余组织 杂草和其他作物：相同寄主范围的作物 昆虫介体：玉米细菌性萎蔫病菌可以在玉米叶甲体内越冬，成为初侵染来源,防治方法,作好种苗消毒和清除植物病死残体 用抗生素效果较好 防止造成伤口和及时保护伤口,在防治上特别重要,寄生性种子植物,寄生性种子植物的种类 主要有桑寄生科(Loranth
8、aceae) 菟丝子科(Cuscutaceae) 列当科(Orobanchaceae) 野菰 蛇菰科（Balanophoraceae） 其中菟丝子和列当是对外检疫对象,寄生性种子植物的寄生特点,寄生部位: 茎寄生(地上部分的茎):桑寄生和菟丝子 根寄生(地下部分的根):列当和野菰,对寄主的依赖程度,半寄生:含叶绿素,其吸盘的导管与寄主导管相连,如桑寄生 全寄生:不含叶绿素,其吸盘的导管和筛管分别与寄主的导管和筛管相连,如菟丝子,列当和野菰,菟丝子害,种子萌发到缠绕寄主的过程 菟丝子的茎和果实 枝条被害状 寄主和菟丝子茎切面,示菟丝子吸器伸入寄主皮层,槲寄生,油杉寄生害 列当危害番茄,蛇菰科Ba
9、lanophoraceae 双子叶植物，19属，约120种，分布于热带和亚热带地区，中国只有 蛇菰属Balanophora 锁阳属Cynomorium 双柱蛇菰属 Rhopalocemis 3属17种，产中南部至西南 一年生或多年生、肉质草本，寄生于根上 无叶绿素和气孔，花单性，很少两性，密集成一个单性或两性的花序,野菰,野菰，又名蔗寄生 一年生寄生草本植物，整个列当科都是营寄生的植物，南方最常见的是这种 茎基部分枝，地上不分枝。叶退化成鳞片状，全株肉色 枝顶开花，萼佛焰苞状，冠二唇形，紫红色，黄白色 地下根常附于禾本科寄生植物 全株药用，具清热解毒，消肿功效,油杉矮槲寄生发育循环图,越冬场所
10、,菟丝子种子比寄主植物的种子成熟早、萌发晚 种子在土内或与寄主种子一起越冬 列当靠寄主根部分泌物刺激而萌发 桑寄生直接在寄主上越冬,传播,小的种子靠风传播(菟丝子,列当) 大的种子靠鸟类传播(桑寄生),防治方法:,检疫 轮作 手工拔除(砍除) 喷洒除草剂,植物病原线虫,线虫的形态和结构 低等动物，属线虫动物门，数量多，分布广，受线虫危害的症状与一般的病害症状相似，称为线虫病 350-1000x15-35微米，虫体细长，蠕虫形，虫体半透明,生活史 寄生性,卵幼虫（龄）成虫受精卵 专性寄生，去食时排出唾液，起到致病作用，刺激细胞分裂，肿瘤，枯萎 症状：根结，丛根，根腐，地上部分似缺素症 松材线虫是
11、松褐天牛传播,线虫症状,雄虫,雌虫,检验及鉴定,检验方法 对应施检疫物首先直接观察是否存在本质干枯、木质部蓝变和媒介昆虫或它的栖居痕迹等症状，然后进行室内检验,(1)抽样和取样,抽取有上述症状的部分检疫物，数量为每批次总件数的0.5%-5.0%，但最低不得少于5件。若无明显症状时可随机抽样 在所抽取的样木 (或样品)上取部分样品，或钻取少量木屑(不得少于20g)，每样3个重复 标号后带回实验室检验。必要时可将整件样木 (或样品)带回备检 取样时注意选取靠近蛀道、蛹室的部位，所取样品不得带有树皮,(2)分离线虫,将各标号样品分别进行线虫分离 分离线虫可采用贝尔曼漏斗法或浅盘法 对媒介昆虫进行线虫
12、分离时，可将其用剪刀或尖头镊子、解剖针等剪碎或撕碎后同样采用上述方法进行 分离时若室温较低(不得低于7 oC)可根据室温将分离用水调至20-40 oC (不得超过40 oC) 浸泡分离材料3-4h线虫游离出一定数量后即可镜检(一般需经24小时后镜检),贝尔曼 (Baermann)漏斗法,将漏斗末端接一段长约10cm乳胶管 在乳胶管上装一止水夹 剪大小适当纱布两层铺在漏斗上 将样段去皮劈成长约3-4cm细条,约取10 g (或木屑)置于漏斗上的纱布中，纱布四角向中间盖上分离材料，然后注入清水浸没 注入清水后要注意使水充满漏斗和下面的乳胶管，不要产生空隙 用培养皿在漏斗末端接取线虫分离液10ml镜
13、检,贝尔曼漏斗法线虫分离装置图,浅盘法,浅盘分离装置由两只不锈钢浅盘组成 口径略小的一只底部为粗网筛，放在另一只浅盘上面 将两层纱布打湿铺于筛盘上，把样品劈碎 (或钻取的木屑)置于筛盘的纱布上 慢馒注人清水，使水浸没样品,分离结束后,移去筛盘，把大盘内的分离液集中于小烧杯内 小烧杯内的线虫分离液可通过自然沉降或离心机(1500转/min，离心2-3min)浓缩至适宜的量，以便镜检,(3)镜检,将各标号盛有线虫分离液的培养皿置于解剖镜下观察，先确认有无线虫 对有线虫的样品进行活体镜检，观察它的一般形态结构 选择几条成熟、特征易观察的线虫，用针或吸管移至载玻片上的水滴中 使之沉底,将此载玻片在酒精
14、灯火焰上方往返几次 约5-6秒至虫体突然伸直时停止 加盖玻片后在显微镜下观察 根据形态特征予以初步鉴别，以确定是否需作进一步的鉴定,1.病原鉴定,线虫培养: 鉴定需要相当数量的雌、雄成虫，但在检验时分离到的线虫多是处于休眠阶段的分散型3龄虫（L）;有时虽可见雌雄成虫，但数量较少 从媒介昆虫分离到的线虫则只能是被称为休眠幼虫(DL)的分散型4龄虫，因此，需将上述情况的线虫进行培养，以获得大量雌雄成虫供鉴定,真菌上的单异活体培养,通常用于培养松材线虫的真菌为 灰葡萄孢(Botrytis cinerea) 多毛孢(Pestalotia sp.) 镰刀菌(Fusarium sp.)培养松材线虫,将真菌
15、菌种接至马铃薯琼脂培养基(PDA)平板或试管斜面上 在25 oC条件下经过4-5d 待菌丝铺满平板或斜面后 将经过表面消毒的线虫用吸管接到菌丝上 28 oC条件下培养10-15d即可繁殖出大量线虫 用少量清水将线虫充分洗至小烧杯内备用,样木保温、保湿培养,将样木劈开、锯成小段，置于烧杯中 加少量清水，使木段下端浸在水中，木段上端用湿纱布覆盖 在26 oC培养箱中培养3-4d 倒取杯底水液，亦可获得较多的雌、雄成虫,接种线虫的表面消毒,经分离后获得的线虫悬浮液用1500转/min离心2-3min浓缩至离心管底部 吸去上清液，用无菌滴管将底部线虫液约2ml移至另一无菌离心管内 加 入2ml双倍浓度的消毒液，轻轻振荡混匀 一定时间后再离心浓缩，重复消毒1次 再用无菌水换洗2次,消毒剂,松材线虫表面消毒常用的消毒剂有3%双氧水，处理10min 1%升汞，处理5min 0.002%放线菌酮 0.1%硫酸链霉素混合液，处理5min 硫酸链酶素(1000g/g)、金霉素(30g/g)和匹玛霉素(pimafucin,0.63g/g)混合液处理5min,2.临时玻片制作,杀死和固定: 将盛有线虫悬浮液的小烧杯置于65oC水浴中2min杀死线虫 经离心浓缩后即用三烃基乙胺福尔马林固定液 (TAF)固定,