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1、实 验 二 细菌形态和结构观察（） （细菌的简单染色和革兰氏染色）,一、实验目的 1、观察细菌菌落征。 2、掌握细菌简单染色、革兰氏染色技术。 3、在油镜下观察细菌个体形态。,二、实验原理,1、细菌菌落特征 2、细菌基本形态 3、细菌革兰氏染色机理,共有特征：湿润，较光滑，较透明，较粘稠，易挑取，质地均匀，颜色多样，菌落正反面及边缘与中央颜色一致。 特有特征： 有鞭毛：菌落大而平坦，边缘多缺刻、不规则 有糖被：菌落大，透明，呈蛋清状 有芽孢：菌落外观粗糙，“干燥”，不透明且表面多褶,基本形态：球状，杆状，螺旋状。 其它形态： 星形，方形，带柄状，畸形，衰退形,G：细胞壁厚，内肽聚糖含量高，且交
2、联度大，网孔小，不含脂类。 G ：细胞壁薄，内肽聚糖含量低，交联度小，网孔大，脂类含量高。,革兰氏染色过程：初染媒染脱色复染。,三、实验材料,1、菌种：大肠杆菌（Escherichia coli）、枯草芽孢杆菌（B.subtilis）、金黄色葡萄球菌（S.aureus）（培养1824 h的菌落平板各一个）。 2、染液 （1）简单染色：吕氏美蓝染液或齐氏石炭酸复红染液。 （2）革兰氏染液：草酸铵结晶紫染液、革兰氏碘液、95%乙醇、番红染液。 3、其他物品：普通光学显微镜、载玻片、接种环、镊子、酒精灯、无菌水、吸水纸、香柏油、香柏油、二甲苯、擦镜纸。,四、实验步骤,1、菌落形态观察： 2、细菌简单
3、染色： 3、细菌革兰氏染色。,注意：菌落颜色、湿度、形状、大小、透明度、颜色、边缘是否规则等特征。,染色过程： 涂片干燥固定染色（1min）水洗干燥镜检 注意事项： 涂片：取菌量不能太大 干燥：自然干燥 水洗：水流不能直接冲在涂菌处,细菌革兰氏染色过程,涂片干燥固定初染（草酸铵结晶紫染色1min）水洗媒染（碘液冲洗后覆盖1min）水洗脱色（95乙醇脱色至流下乙醇无色为止）立即用水冲洗复染（番红染色23min）水洗干燥镜检,染色结果,金黄色葡萄球菌革兰氏染色结果,染色结果,大肠杆菌革兰氏染色结果,染色结果,金黄色葡萄球菌和大肠杆菌混合菌样的革兰氏染色结果,染色结果,枯草芽孢杆菌革兰氏染色结果,实 验 要 求,每个同学必须做枯草芽孢杆菌简单染色涂片。 每组同学必须做金黄色葡萄球菌或大肠杆菌革兰氏染色涂片。 每组同学必须做枯草芽孢杆菌革兰氏染色涂片。,五、实验报告,1、记录三种菌的革兰氏染色结果，绘出菌体细胞形态。 2、要得到正确的革兰氏染色结果，必须注意哪些操作？ 3、当你对未知菌进行革兰氏染色时，怎样保证操作正确，结果可靠？,