4℃高渗盐对大鼠心搏骤停脑Caspase-3及GFAP表达的影响.pdf

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1、3 1 6 婆耍匿煎2 Q 鲤生垒旦差丝鲞筮垒塑i 垫墅i 丛! 出堂螋婴趄，匹2 Q 螋，Y 丛：丝：丛Q ：垒 4 。G 高渗盐对大鼠心搏骤停脑C a s p a s e 一3 及G F A P 表达的影响 张慧利康秀文柳远飞 实验研究 【摘要】目的探讨4 高渗盐( H T S ) 对大鼠心搏骤停( S c A ) 脑海马组织半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶一3 ( C a g p a g e 一3 ) 及胶质纤维酸性蛋白( G F A P ) 表达的影响，评价4 高渗盐对脑的保护作用。方法将3 0 只大鼠 随机分为：假手术( A ) 组、生理盐水( B ) 组、4 0 C 生理盐水( C ) 组

2、、H T S ( D ) 组、4 0 C H T S ( E ) 组，每组6 只。除A 组 外其余各组均于复苏即刻给药。制作窒息致大鼠s C A 模型，测定给药后6 0 r a i n 各组大鼠血清尿索氮、血 糖、电解质。并分别计算出各组血浆渗透压值；记录给药后6 h 、1 2 h 、2 4 h 神经功能缺损评分( N D S ) ；复苏后 2 4 h 处死大鼠取脑组织检测脑海马C a s p a s e s - 3 及G F A P 的表达。结果各组给药后6 0 m i n 血清尿索氮、血 糖、电解质、血浆渗透压差异无显著性( P 0 0 5 ) 。4 0 C H T S 干预后能提高各时间

3、点N D S ( P o 0 5 ) 。4 0 C H “ I S 、4 0 C 生理盐水、H T S 均能抑制脑C a s p a g e s 一3 、G F A P 的表达( P 0 0 5 ) 。结论S C A 后给予4 0 C H T S 能抑制脑海 马组织C a s p a g e 一3 、G F A P 表达。对脑组织起保护作用，对机体血电解质、渗透压影响不大。 【关键词】4 高渗盐；心搏骤停；脑；半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶一3 ；胶质纤维酸性蛋白 冲图分类号】R 一3 3 2 T h ee f f e c t so f4 。Ch y p e r t o n i cs a l i n

4、 ei ne x p r e s s i o no fc a s p a s e - 3a n dG F A Pa f t e rs u d d e nc a r d i a ca r r e s to n r a t s 刁哪H u i l i ，K 嘲X i u w e n ，L i uY u a n f e L D e p a r t m e n to f e m e r g e n c y , t h e 加f 够2 妇dh o s p i t a lo f N n c h o 曙驴 n i v e r s i t y , N c 慨。3 3 0 0 0 6 ，C h i n a A

5、b s t r a c t 】O b j e c t i v eT od i s c u s st h ei n f l u e n c eo f4 q C H T So nt h ee x p r e s s i o no fc 硒p a g e - 3a n dG F A Pi nr a t b r a i nt i 略u a f t e rS C A a n dt oe v a l u a t et h ec e r e b r a lp r o t e c t i v ee f f e c to f4 H T S M e t h o d s3 0S p r a g u e - - d

6、a w l e y m a l er a t sw e r er a n d o m l yd i v i d e di n t o ：s h a m e o p e r a t e d ( A ) g r o u p ，N S ( B ) g r o u p ，4 。C N S ( C ) g r o u p ，H T s ( D ) g r o u p ， 4 。C H T S 正) g r o u p ，6r a t si ne a c hg r o u p D r u g sw e r ea d m i n i s t e r e dt oa l lg r o u p sa tt h

7、eo n s e to fC P Re x c e p tg r o u p A ；T h eS C Am o d e lo fr a t sw a gi n d u c e db ya s p h y x i a W ed e t e r m i n e db l o o du r e an i t r o g e n ，b l o o dg h c o ，s e r u l nd e c t r o l y t ea n dc a l c u l a t e dp l a s m ao s m o t i cp r e s s u r ei ne a c hg r o u p ；w em

8、e o w e dN D S a t6 h ，12 ha n d2 4 ha f t e ra d m i n - i s t a t i o n ；A t2 4 ha f t e rC P R w es a c r i f i c e dt h em t ；a n dg o tt h eb r a i nt i s s u e st oc o m p a r et h ee x p r e s s i o no fc a g p a g e 一3 a n dG F A Pi nh i p p o c a m p u s R e s u l t sT h e r ew e r en os t

9、a t i s t i c a ld i f f e r e n c e si nb l o o du r e an i t r o g e n ，b l o o d 出u c o ， s e r u me l e c t r o l y t ea n dp l a s m ao s m o t i cp r e s s u r e6 0m i n u t e sa f t e ra d m i n i s t r a t i o n ( P o o s ) 4 H “ I Sc a ni m p m v e N D Sa te a c ht i m ep o i n ta f t e ra

10、d m i n i s t r a t i o n ( P 0 0 5 ) 4 0 C H T S 4 。C N Sa n dH “ I Sa l lC a l li n h i b i tt h ee x p r e s s i o no fc a g p a g e 一3a n dG F A Pi n t I I eb r a i n s ( P 0 0m m H g 持续l O m i n 为R O S C 标 志持续抢救3 0 r a i n 以上R O S C 仍不能恢复则终止 抢救。若出现M A P 0 0 5 ) 。但是H 髑及4 H T S 干预 组N a + 、C I 一及渗

11、透压高于N S 及4 0 C N S 组：N S 组G L U 高于其他各组，H 髑组G L U 最低而4 0 C N S 与4 H T S 组G L U 分别低于N S 与H 7 r S 组。 2 2N D S 对各组用大鼠N D S 评分法进行评分A 襄1各组大鼠给药1 h 血清电解质和渗透压的比较I ；虹) 万方数据 3 1 8 互堕匡蕴至Q 鲤生垒旦蔓丝鲞箜垒塑正垒塾娶i 丛鲴i 照五螋堡型，鲍1 2 Q 螋，y 垒! ：熊，盟Q ! 垒 组大鼠神志清楚、呼吸、步态平稳、运动感觉良好，评 分为8 0 分。C 、D 组各时间点N D S 均较B 组上升但 差异无统计学意义( 乃0 。0

12、5 ) 。而E 组较B 、C 、D 组各 时间点N D S 均上升，差异有统计学意义( P 0 0 5 ) 。 表2 各组大鼠N D S 比较I 二曲J 洼与B 比j 艮0 0 5 2 3 脑C a s p a s e 一3 的表达脑C a s p a s e 一3 表达在假 手术组虽可见阳性表达但其胞体较小、阳性表达数 量较少。在N S 组C a s p a s e 一3 阳性细胞胞体肥大细 胞数目明显增多。而4 0 C N S 、H T S 、4 H T S 组。均可见 到阳性细胞表达增多。但较N S 组胞体较小、阳性表 达数量较少。且4 H 1 S 作用最明显。 表3 各组大鼠脑组织C

13、a s p a s o - 3 阳性细胞数 的比较【l ；虹) 个H P 】 注与A 组比，“ P 0 0 1 ，供( 0 0 5 ；与B 组比，叩如0 5 ，。P 如0 1 ；与 C 组比，A P O 0 5 , * P 0 0 I ；与D 比P O 0 5 2 4 脑G F A P 的表达G F A P 的阳性表达。A 组虽可 见阳性表达，但其胞体较小、纤维纤细、阳性表达数 量较少。B 组G F A P 阳性星形胶质细胞胞体肥大，突 起增多、增粗以及细胞数目明显增多。而C 、D 、E 组， 均可见到阳性细胞表达增多，但较N S 组胞体较小、 阳性表达数量较少且4 0 C H T S 作用最

14、明显。 表4 各组大鼠脑组织G F A P 阳性细胞数的比较“磊s1 个，H P 】 注与A 组比，P 0 0 l ；与B 组比， P O 0 5 ，叩( o 0 1 ；- qC 组比4 P O 0 5 ，A p 0 0 1 ；与D 比韫O 0 5 3 讨论 C a s p a s e 与真核细胞凋亡密切相关，其中c a $ p a u s e 一3 是介导细胞凋亡的核心蛋白酶。是C a s p a s e 家族中最重要的凋亡执行者。在脑缺血损伤后， c a s p a s e 一3 蛋白表达量及蛋白酶活性明显增加 3 1 ， C a s p a s e 一3 表达上调可促使细胞凋亡的形态学特

15、征 形成1 4 】。动物实验显示。凋亡可能是S C A 致全脑缺血 后海马区神经元死亡的主要方式I S 3 短暂的全脑缺血 可导致脑组织易损区神经元迟发性死亡。并可见 C a s p a S e 一3 表达增强阐。S C A 时脑组织因缺血缺氧，导 致该局部神经元线粒体内呼吸链的电子传递和氧化 磷酸化功能受阻生成过量的活性氧；同时因三磷酸 腺苷生成减少和膜去极化引起谷氨酸大量释放胞 外再反馈结合谷氨酸受体诱导外钙内流和内钙释 放。导致神经元内钙离子大幅度升高 7 1 。过量生成的 活性氧和高浓度的钙离子损伤线粒体膜通透性和跨 膜压。引起线粒体基质肿胀和外膜破裂。C a s p a s e 一3

16、 表达增强。 G F A P 仅存在于星形胶质细胞中的单体中间丝 蛋白。星形胶质细胞的特征性蛋白几乎所有类型的 脑损伤后反应性星形细胞中G F A P 的表达都增强。 G F A P 可通过多种途径产生有害作用嘲。缺血时星形 胶质细胞增生停止摄入谷氨酸而且大量释放细胞 内谷氨酸。介导神经毒性作用：同时产生多种细胞因 子和炎性介质。破坏血脑屏障。创伤后星形胶质细胞 可以产生一氧化氮( N 0 ) 及释放N O N O 参与脑缺血 过程中N 一甲基一2 一D 一天门冬氨酸( N M D A ) 调节的神 经毒性和氧自由基损伤。 H 1 S 可抑制谷氨酸毒性作用减轻细胞内C a 2 + 超载。H T

17、 S 增加细胞外N a + 浓度恢复N a T 谷氨酸同 向转运减少细胞外谷氨酸浓度进而阻断谷氨酸的 毒性作用，抑制神经元坏疽或非正常凋亡而细胞外 N a + 浓度增高可以恢复N a + 一C a 2 + 交换减轻细胞内 C a 2 + 超载。减少脑细胞死亡：H 髑可以抑制免疫一炎 症反应。保护脑组织1 9 1 。低温亦能阻止炎症反应和促 炎因子释放【l 珥：低温尚能抑制内源性脑损伤因子对 脑细胞的损害作用，减少兴奋性氨基酸、乙酰胆碱、 多巴胺、去甲肾上腺素、5 一羟色胺、氧自由基、C a 2 + 、 内源性阿片肽等内源性毒物质异常释放【- n 并在早 期阶段阻止细胞凋亡1 1 2 1 。在再

18、灌注过程中或再灌注 后，诱导低温可促进代谢率的恢复，能较好地保护高 能磷酸盐，减少有毒物质的蓄积f 1 3 j 。 本试验显示，复苏即刻给予N S 2 4 h 脑C a s p a s e 一3 及G F A P 阳性细胞数明显升高复苏即刻给 万方数据 江酉匿药2 Q 鲤生垒旦蔓坐鲞蔓生塑题鲤整i 丛西i 璺尘Q 丛卫邋，匹2 Q 塑，y 世：丝，盟垒 3 1 9 予4 N S 可以使2 4 h 脑C 嬲p 船e 一3 及G F A P 阳性细 胞数减少但仍多于复苏即刻给予H T S 。而复苏即刻 给予4 H T S 可以使2 4 h 脑C 鹬p 鸽e 一3 及G F A P 阳 性细胞数明显

19、减少，说明低温、高渗盐均能抑制复苏 后脑C a s p a s e 一3 及G F A P 的表达，对脑组织起保护 作用高渗盐作用好于低温，低温和高渗盐联合应用 有协同作用。 电解质紊乱通常可导致心血管急症甚至可引 起或造成心源性猝死，并且复苏效果不理想7 5 氯化钠可产生2 4 0 0 m O s m L 渗透压相当于正常血 浆渗透压的8 倍，国外文献报道输注7 2 氯化钠 ( 5 m l k g ) 后5 m i n 血钠浓度和渗透压即升高1 5 m i n 达到高峰。随后稍有下降并维持在一定范围2 h 内 变化不大【埔。本实验在给药后6 0 r a i n 抽血测定血电 解质、血糖、尿素

20、氮，计算渗透压。比较各组数据发 现：H 髑组及4 H 髑组N a + 、C l 一及渗透压虽然高于 假手术组、N S 组及4 N S 组，但差异无统计学意义 表明C P R 时输注H T S 并不会引起明显高钠血症或 使渗透压显著升高而对机体不利。 N D S 是反映人或动物神经病学功能的检查项 目之一在实验中人们用其模拟临床神经病学评估。 N D S 与动物存活率及组织病理学损伤程度直接相 关许多文献证实脑卒中患者的N D S 与疗效有密切 联系。神经功能缺损评分越高的患者。经康复治疗 后日常生活能力都会恢复得越好【阍。我们在实验中 发现C P R 后即刻给予4 H T S 能提高N D S

21、 但分别 给予4 0 C N S 和H T s 作用不明显显示低温和高渗盐 联合运用才能改善复苏后的神经功能缺损。 参考文献 1 1 A m e r i c a nH e a r tA s s o c i a t i o n U t s t e i n S t y l eG u i d e l i n e sf o rU n i f o r m R e p o r t i n go fL a b o r a t o r yC P RR e s e a r c h C i r c u l a t i o n ，1 9 9 6 ，9 4 ( 9 ) ：2 3 2 4 2 1 G e o c a d

22、 l nR G ，G h o d a d mR ，K i m u r aT , e ta 1 An o v e lq u a n t i t a t i v eE E G i I l j 7l l l e a S U l o f9 1 0 h a lc e r e b r a li s e h e m i a C l i nN e u r o p h y s i o K 2 0 0 0 , I I1 ( 1 0 ) ：1 7 7 9 3 1S h a r m aA B ，B a r l o wM A ，Y a n gS H , ma 1 P y r u v a t ee n h a n c e

23、 sn e u r o l o g i e a lr e c o v e r y 越I o w i l l gc a r d i o p u l m o n a r ya r r e s ta n dr e s u s e i t a t i o n R e - s u s c i t a t i o n , 2 0 0 8 ，7 6 ( 1 ) ：l 喁 【4 】E l M e n y a rA A P a t h o p h y s i o l o g ya n dh e m o d y n a m i co fp o s u e s u s c i t a - t i o ns y n

24、d r o m S a u d iM e d J , 2 0 0 6 ，2 7 ( 4 ) ：4 4 1 【5 1 T s u c h i y aD ，H o n gS , M a t s u m o r iY ，e ta 1 O v e r e x p r e s s i o no fr a th e a t s h o c kp r o t e i n7 0r e d u c e sn e u r o n a li j u r ya I t e rt r a n s i e n tf o c a l i s - c h e m i a , t r a n s i e n tg l o b

25、a li s c h e m i a , o rk a i n i ca c i d - i n d u c e ds e i z - u r e s N e u r o s u r g e r y , 2 0 0 3 ，5 3 ( 5 ) ：11 7 9 【6 】Q iJ P ，W uA P ，W a n gD S , e ta i C o r r e l a t i o nb e t w 啪n e u r o n a li n j u r y a n dC a s l r a S e - 3a f t e rf o c a li s c h e m i ai nh u m a nh i p

26、 p o p o m p u s C h i nM e d J f g 蚶) ，2 0 0 4 ，1t 7 ( x 0 ) ：1 5 0 “ r 7 】C h a t u r v e d iS , D z i e e z k o w s k iJ S P r o t e i nSd e f i c i e n c y , a c t i v a t e dp r o t e i n Cr e s i s t a n c ea n dp l a t e l e ts y n d r o n mi n8 y o u n gW 0 1 w i t hb i l a t e r a l s t r o

27、 k e s C e r e b r o v a s cD i s ，1 9 9 9 ，9 ( 2 ) ：1 2 7 【8 JY a s u d aY , T a t e i s h iN , S h i m o d aT , e ta 1 R e l a t i o n s h i pb 咖e e nS 1 0 0 b e t a a n dG F A Pe x p r e s s i o ni na s t r o c y t e sd u r i n gi n f a r c t i o na n dg l i a l 咖 f o r m a t i o na f t e rm i l

28、dt r a n s i e n ti s e h e m i a B r a i nR e s , 2 0 0 4 ，1 0 2 1 ( 1 ) ：2 0 【9 】H o r t o nJ W , M a a s sD L W h i t eD J H y p e r t o n i cs a l i n ed e x t r a na f t e rb u m i n j m yd e c r e a s e si n f l a m m a t o r yc y t o k i n er e s p o n s e st os u b s e q u e n tp n e u - m o

29、 n i a - r e l a t e ds e p s i s A mJP h y s i o lH e a r tC i t ep h y s i o l ，2 0 0 6 ，2 9 0 ( 4 ) ： H 1 6 4 2 【l O K i m u r aA , S a k u r a d aS , O h k a m iH , e ta 1 M o d e r a t eh y p o t h e r m i ad e l a y s p r o i n f l a m m a t o r ye y t o k i n ep r o d u c t i o no fH u m a np

30、 e r i p h e r a lb l o o d m o n o n u c l e a rc e l l s C r i tC a r eM 都0 0 2 ，3 0 ( 7 ) ：1 4 9 9 【l l lKU U i a n gT ，L i uE Z ，e ta 1 E t t e e to fi n t r a i s c h e m i cm i l dh y p o t h a r i aO ni n t e d e u k i n - 1b e t aa n dm o n o c y t ec b e n m a t t r a e t a n tp r o t e i n

31、 l c o n t e n t si ni s e b e m i cP o r eo fr a lc o r t e xa f t e rt r a n s i e n tf o c a lP o r e b r a l i s e h e m i a Z h o n g h u aY iX u eZ aZ h i ，2 0 0 3 ，8 3 ：5 4 1 【1 2 】X uL , Y e n a i lM A ，S t e i n b e r gG I L e ta 1 M i l dh y p o t h m , hr e d u c e s a p o p t m i so fn K

32、 吡n a u r 嘲i nv i t r oe a r l yi n t h ec a s c a d e dC e r e b B l o o dF l o wM e t a b , 2 0 0 2 , 2 2 ( 1 ) ：2 1 【1 3 】S o u k u pJ ：Z a n n e rA , D o p p e n b e r gE M ，e ta 1 R e l a t i o n s h i pb e t w 咖 b r a i n t e m p e r a t u r e 。b r a i nc h e m i s t r ya n do x y g e nd e l i

33、 v e r ya f t e r8 e y e , r e h u m a nh e a di n j u r y ：t h ee f f e c to fm i l dh y p o t h e r m i a N e u r o la e s , 2 0 0 2 ， 2 4 ( 2 ) ：1 6 1 【1 4 】A j i t oT ，S u z u k iI L l w a b u c h iS E f f o c to fI n t r a v e n o u sI n f u s i o n0 fa 7 2 H y p e r t o n i cS a l i n eS o l u

34、 t i o no nS e r u mE l e c t r o l y t e sa n dO s m o t i c l J o f ei nH e a l t h yg e a g l e s JV e tM e dS e i ，1 9 9 9 , 6 1 ( 6 ) 6 3 7 【1 5 】W a s s e r t h e i l S m i l e rs ，S h u m a k e rS , O c k e n eL e ta 1 D e p r e s s i o na n d c a r d i o v a s c u l a r , , q u e a ei np o s

35、 t m e n o p a u s a l w o m e n ：T b eW m n m a , s H e a l t hI n i t i a t i v e ( V m ) A r c hI n t e r nM e d ，2 0 0 4 ，1 6 4 ( 3 ) ：2 8 9 ( 收稿日期2 0 0 9 埘一1 6 ) 不同时期全肺灌洗对实验性肺纤维化兔的血气 和病理干预效果 曾剑儿雷建平李光明 【摘要】目的观察不同时期全肺灌洗对实验性肺纤维化兔的血气和病理干预效果，以明确全肺灌洗治 疗的效果及灌洗时机的选择。方法将兔随机分成3 组，其中对照组气管内灌注2 m l 生理盐水模型组和实 验组一次性灌注平阳霉素进行模型复制，而后各组在不同时期全肺灌洗，在第6 周末对比各组血气和病理 万方数据