DHEA和nifedipine对大鼠低氧性肺动脉高压的治疗作用比较.pdf

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1、第5 卷第3 期 2 0 0 3 年 6 月 成都军区医院学报 H o s p i t a l J o u r n a l o f C h e n g d u M i l i t a r y C o m m a n d V o l . 5. N o . 3 J u n e , 2 0 0 3 临床研究 R H E A 和n if e d i p i n 。 对大鼠 低氧性肺动 脉高压 的治疗作用比较 肖欣荣杨波王小湘 摘要 目 的 对慢性缺氧3 周大鼠 静脉注射钾通道开 放剂脱氮表雄番W ( R H E A ) 和钙通道阻断别n if e d ip in e ， 以对照 研究它们时大或慢性低氧

2、性肺动脉高压的治疗作用。方法6 0 只大鼠随机分为2 组， 每组3 0 只， 均给予缺氧3 周。 I 组再分为3 个小组( A l , A 2 , A 3 ) ， 分别按 1 0 0 m g / k g , 1 5 0 m g / k g 和2 0 0 m g / k g 给予R H E A , B 组再分为3 个小组( B I , B 2 , B 3 ) , 按1 0 0 m g / k g , 1 5 0 m g / k g 和2 0 0 m g / k g 给予n if e d ip i n e 。大鼠3 周低氧后， 行右心擂管于 给药 前后分别浏定2 组 大鼠的肺动脉平均压( m P

3、A P ) 、 体动脉平均压( m S A P ) o结果 2 组大鼠在缺氧3 周后肺劝脉压均明显增高, I 组静 脉给予R H E A可见 A l , A 2 , A 3 组大鼠m P A I ， 明显降低， 呈别童依赖性变化， 但平均体动脉压变化不明显; I I 组给予 n if e d ip i n e 后， 可见B l , B 2 , B 3 组大鼠 伴随m S A P 明显降 低， 大鼠m P A P 呈剂 量依赖性降 低。 结论 钾通 道活 性的改变 在H P H发病机制中起着十分重要的作用， 钾通道开放别 D H E A可有效治疗H P H ， 且 R H E A对体循环的影响相

4、对较 小。 关键词 低氧性肺动脉高 压 脱氮表雄铸 酮 n i f e d ip i n e 中国图书资料分类法分类号R - 3 3 2 T h e C o mp a r i s o n o f T h e r a p e u t i c E f f e c t s o n C h r o n i c H y p o xi c P u l m o n a r y H y p e rt e n s i o n b e t w e e n ph y d r o e p l a n d ros t e r o n e a n d n i f e d i p i n e 加助Las A B S T R

5、 A C T O b j e c t i v e t o i n v e s ti g a t e t h e th e r a p e u t i c e ff e c t o f d e h y d r o e p ia n d r o s t e ro n e ( D H E A ) , a n C a t 十 ， a c t iv a t e d K + c h a n n e l ( K e e ) o p e n e r , a n d n i f e d ip i n e a n c a l c iu m c h a n n e l b l o c k e r , o n c h

6、 r o n i c 场p o x ic p u l m o n a r y h y p e r t e n s io n i n r a t s . M e t h o d s 6 0 W i s t a r r a ts w e r e e q u a ll y d iv i d e d i n to t w o g ro u p s : G ro u p 1 a n d G r o u p p a t r a n d o m . T h e tw o g ro u p s 。r e s p e c ti v e l y s u b - d i v i d e d i n to . O n

7、 t h e o t h e r h a n d , n if i d i p i n e h a d t h e s a m e c h a n g e o f e ff e c t o n m P A P i n G ro u p B 1 , B 2 a n d B 3 , b u t t h e s i d e e ff e c t o f r e d u c i n g m S A P o c c ur r e d s i g n i fi c a n t t a k e p a r t i n t h e d e v e l o p m e n t o f c h ro n i c

8、h y p o x i e p u l m o n a r y h y p e rt e n s i o n Y i n . C o n c l u s i o n s P e r s i s t e n t d e c r e a s e o f K c a a c t iv i t y m a y r a t s . R HE A c a n d e r r p - t h e i n c r e a s e d mP A P i n d u c e d 勿c h r o n i c h y p o x i a w i t h o u t s i d e e ff e c t o n r

9、e d u c i n g m S A P c o m p a r e d w i t h n i f e d ip i n e . K E Y WO R D S H y p o x i c p u l m o n a r y h y p e rt e n s i o n D e h y d r o e p i a n d ro s t e ro n e n i f e d i p i n e 低氧性肺动脉高压( H P H ) 是肺心病发病机制的 中心环节， H P H的发病机理至今尚未完全清楚。一 些作者的研究表明， 内皮细胞所产生的内皮素等炎 性介质可能对低氧性肺血管收缩( H P V

10、) 和低氧性肺 血管重建( H P V R ) 的产生起着重要作用; 但是， H P V 和H P V R的产生并非完全依赖于血管内皮细胞， 这 是因为低氧对去除内皮细胞的肺血管仍能产生收缩 作用， 因此， 低氧性肺血管收缩及肺血管平滑肌细胞 的增殖在很大程度上与平滑肌细胞本身的结构和功 能变化有关 t 。 近来研究表明， 急性缺氧和慢性缺 氧均可引起大鼠肺动脉平滑肌细胞钾离子通道活性 的降低， 使肺动脉平滑肌细胞膜去极化， 激活电压依 赖性钙通道， 使细胞外钙内流增加， 细胞内钙水平升 高， 从而导致肺血管兴奋性增强， 血管收缩和肺动脉 压增高i 2 1 。因此应用钾通道开放剂拮抗低氧对肺动

11、 脉平滑肌细胞钾通道的抑制作用为研究治疗 H P H 开辟了新途径。目前研究 A T P钾通道开放剂对急 性低氧性肺血管收缩的报道较多， 而观察钙激活性 钾通道( K e a ) 开放剂治疗慢性H P H的研究较少。本 实验对慢性缺氧3 周大鼠 静脉灌注K e 。 通道开放剂 脱氢表雄街酮 d e h y d r o e p i a n d r o s t e r o n e , D H E A ) 和钙通 道 阻 断 剂。 if e d ip in e ， 比 较 婉 察 它 们 对 慢 性 缺 氧 大 鼠 肺循环和体循环的影响， 以期筛选出治疗慢性 H P H 作者单位: 成都军区总医院呼

12、吸内科( 成都6 1 0 0 8 3 。 四川省青年基金和成都军区总医院资助课题 1 第5 卷第 3 期 2 0 0 3年 6月 成都军区医院学报 H o s 杯 t a l J o u rn a l o f C h e n g d u M i l i t a ry C o m m a n d V o l . 5. N o . 3 J u n e , 2 0 0 3 疗效好， 对体动脉压作用小的药物。 1 材料和方法 1 . 1 试剂及其配制脱氢表雄街酮( D H E A ) ， 钙通 道阻断剂n i f e d i p i n e ( 购于S I G M A公司) 均溶于二甲 基亚矾( D

13、M S O ， 重庆化学试剂一厂) 配制成储存液， 在实验当天 D H E A和 n if e d i p i n e配制成浓度为 2 0 0 m g / m l 的生理盐水溶液; 戊巴比妥钠( 上海化学 试剂采购供应站进口分装) 以蒸馏水配制成浓度为 1 %的溶液; 肝素( 苏州生物化学制药厂) 用生理盐水 配制成 2 5 u / m I 溶液。 1 . 2 仪器R M -6 0 0 0 型四道生理记录仪( 日 本光 电) 。 1 . 3 实验动物及缺氧雄性 W i s t a r 大鼠6 0只( 购 于华西医科大学实验动物中心) ， 体重: 2 5 0 一 3 1 0 g . 参照薛全福等

14、报道的方法， 实验大鼠置于常压低氧 舱内， 舱内灌充氮气， 使其氧分压下降， 氧气监测仪 测定并控制舱内氧浓度为1 0 土 0 . 5 %, 舱内C 仇和水 蒸汽用钠石灰和氯化钙吸收， 每天缺氧8 小时， 连续 缺氧三周。 1 . 4 测定方法大鼠采用1 %戊巴比妥硒腹腔注 射麻醉( 3 3 m g / k g ) 后， 固定于动物台上， 在大鼠右侧 颈部作一约2 c m的切口， 分离出颈外静脉， 结扎其远 心端， 并在其近心端上作一横切口， 用一与三通管相 连的充盈肝素生理盐水的硅胶管( 外径: 0 . 8 2 m m , 内径: 0 . 4 6 m m ， 化学工业部有机硅研究中心赠送)

15、， 从颈外静脉经右心房、 右心室插管至肺动脉。肺、 股 动脉导管接压力换能器， 经四道生理记录仪测定大 鼠肺动脉平均压( m P A P ) 、 体动脉平均压( m S A P ) o 1 . 5 实验设计6 0只大鼠随机分为2组， 每组 3 0 只， 每组再随机分为3 个小组， A l , A 2 , A 3 组和B 1 , B 2 , B 3 组， 每小组 1 0 只， 均接受缺氧三周。缺氧完 毕， I 组和II 组3 个小组分别按1 0 0 m g / k g , 1 5 0 m g / k g 和2 0 0 m g / k g 注射D H E A 和n if e d i p i n e

16、 ; 分别测定用药 前基础值， 注射药物后1 , 5 , 1 0 , 2 0 , 3 0 时m P A P , m S A P , 1 . 6 统计分析采用前后对照配对 ， 检验， 数据用 均值加标准差表示( x土: ) 。 2 结果 2 . 1 D H E A对缺氧大鼠肺循环及体循环的影响 ( 1 ) D E H A 对肺动脉压的作用: I 组静脉注射1 0 0 m g / k g 的D H E A后， 其m P A P 呈缓慢下降， 在2 0 左右 m P A P 才下降到最低点， 3 0 时仍处于较低水平， 其值 与注射药物前基础值相比， 在1 , 5 时P 0 . 0 5 ， 但 在

17、1 0 , 2 0 , 3 0 时 P 0 . 0 5 ， 其差异无统计学意义， 在 2 0 时 m P A P 缓慢达到最低点， 且以后所观察的时间内r n P A P一 直维持在较低水平， 无继续下降趋势， 其 m P A P 与用 药前相比， 在5 , 1 0 时 P 0 . 0 5 , 5 时 P 3 . 3 9 t 0 . 2 8 3 . 3 7 t 0 . 2 1 3 . 3 8 士0 . 2 6 3 . 0 2 t 0 . 2 4 * 2 . 9 2 t 0 . 2 2 * 3. 2 1 土0. 2 0 * 2 . 8 3土0. 2 1 * 2. 4 2士0. 2 5# 3 .

18、1 0t0. 2 2* 2. 5 6士0. 1 7# 2. 5 8士0. 1 9# 3. 1 2士0. 1 9* 2 . 5 7土0. 2 3# 2. 5 1 t 0. 2 5# AIAZA3 ) P0 .* P 0 . 0 5 ， 无统计学意义; 在注射1 5 0 m g / k g 的D H E A后， 1 一 3 0 时各点的m S A P 值与静脉注射1 0 0 m g / k g 时 一样无明显变化， P值均 0 . 0 5 ， 其差异亦无统计学 意义; 注射2 0 0 m 岁k g 的D H E A 后， m S A P 呈缓慢下降 趋势， 在 1 0 达到最低点， 维持到 2 0

19、 左右， 在 3 0 基 本上回升到用药后 1 时的水平， 其 m S A P与用药前 相比， 在 1 , 5 时 P 0 . 0 5 , 1 0 , 2 0 时 P 0 . 0 5 ， 差异无统计学意 义， 见表2 , 2 . 2 n e fi d ip i n e 对缺氧大鼠肺循环及体循环的影响 ( 1 ) n e fi d i p in e 对肺动脉压的影响: I I 组缺氧动物在 静脉注射1 0 0 m g 的n e f id i p in e 后， 1 一 3 0 各点m P A P 下降不明显， 其值与注射药物前基础值相比， 差异无 统计学意义( P 0 . 0 5 ) ; 在注射

20、1 5 0 m g / k g 的n e fi d i p - i n e 后， 1 时 m P A P下降不明显， P 0 . 0 5 ， 在 1 0 2 0 左右达到最低点， 3 0 时有所回升， 该段时间内其 m P A P 与用药前相比 P 1 4 . 5t 1 . 2 7 1 3 . 8 t 1 . 1 6 D 1 2 . 4t1 . 1 9* 1 4 . 4士1 . 2 2 p 1 4 . 0士1 . 2 7 p 1 2 . 7土1 . 1 6* 1 4 . 3士1 . 2 1 卜 1 4 . 2 t 1 . 2 1 D 1 4 . 0 1 1 . 2 1 卜 000 ，几.11.

21、1 100150200 ，二，八j AAA ) P0 . 0 5 , P 0 . 0 5 , ，P0 . 0 5外， 其余各点 P均 0 . 0 5 , * P0 . 0 5 , #P0 . 0 1 ， #P0 . 0 0 1 3 讨论 3 . 1 D H E A 对H P H的降压 作 用 P e n g 3 1 等在研究 早期培养的人体主肺动脉平滑肌细胞中， 发现慢性 低氧使细胞膜的静息电位发生 3 3 一 5 3 m v 的右向偏 移并在所有胞内钙离子浓度范围内降低K c 。 通道活 性。我们先前的研究也发现， 急慢性低氧均可通过 抑制K c 。 通道活性而参与H P H的 发生 ( a

22、 1 。 我们认 为K c 。 通道参与H P H发病机制的最大可能是: 低 氧导致K c 。 通道对肺动脉S M C 膜电位变化和胞内 钙离子浓度改变的敏感性降低; 慢性低氧还通过 抑制c G M P 依赖性蛋白激酶， 降低N O 对K c 。 通道的 激活作用; 慢性低氧抑制K c 。 通道活性可使肺动 脉平滑肌细胞通过向下调节( d o w n r e g u l a t i o n ) 机制而 使K c 。 通道基因的表达减少。 选择性作用于K c 。 通道的开放剂是近年来发现 的另一类钾通道开放剂， 也是新近研究的热点。脱 氢( 表) 雄街酮( D H E A ) 属机体自然产生的肾

23、上腺皮 质激素之一， 其雄性激素作用微弱， 对心血管、 肺、 肾 等器官具有多种生物活性的作用。有研究表明， 青 壮年体内D H E A激素水平较高， 随着年龄增长， 其血 浆水平逐渐降低， 6 0岁以上老年人血浆水平最低。 最近许多研究证实， D H E A具有通过激活血管平滑 肌细胞( S M C ) K c 。 通道， 从而降低血管张力的作用。 本实验研究表明， D H E A对大鼠H P H具有良好 的降 压作用， 特别是静脉给予1 5 0 一 2 0 0 m g / k g 剂量 的D H E A对H P H大鼠的m P A P 降压效果明显， 与用 药前的m P A P 相比， 相

24、差非常显著。本实验还发现， 1 5 。 一 2 0 0 m g / k g 剂量的D H E A对大鼠体动脉压影响 较小， 在观察的时程中， 2 0 0 m g / k g 剂量D H E A所致 体动脉压降低除个别点值与用药前相比具有明显差 异外， 体动脉压在用药前后基本上变化不大。即使 体动脉压有所降低， 在用 药后2 0 一 3 0 内逐渐回升 且趋于稳定， 说明D H E A在1 5 0 一 2 0 0 m g / k g 剂量范 围内非常安全， 不仅对 H P H的降压效果好， 而且对 体循环的副作用小。 J e s s e 在体内和体外研究D H E A 3 第 5 卷第3 期 2

25、 0 0 3 年 6月 成都军区医院学报 H o s p i t a l J o u rn a l o f C h e n g d u M i l i t a ry C o m m a n d V o l . 5. N o . 3 J u n e , 2 0 0 3 拮抗血小板聚集作用时发现， 正常人口服 D H E A 3 0 0 m g ， 每天3 次， 连续1 4 天， 受试者血药浓度维持 在0 . 1 一 0 . 2 m m o 1 时， D H E A可通过降低血栓素 几 ( p l a t e l e t t h r o m b o x a n e 1 3 2 , T X B Z

26、) 以抑制血小板的聚集 作用， 但没有发现任何体循环副作用1 5 1 。因 此， 我 们 认为R H E A通过直接激活K e 。 通道活性， 同时兼有 降低肺心病患者的血液粘滞度， 减少肺血管阻力， 可 以达到双向降低 H P H的目的。D H E A作为治疗 H P H的新药， 其应用前景广阔。 3 . 2 钙通道拮抗剂对 H P H的降压作用钙通道拮 抗剂可阻断钙通道对钙离子的渗透作用， 减少细胞 外钙进人细胞内， 降低细胞内游离钙离子浓度， 使细 胞内钙与肌球蛋白结合降低， 细胞兴奋收缩偶联下 降， 细胞兴奋性降低， 从而抑制血管收缩或痉挛， 最 后导致血管舒张， 从而发挥降低血压的作

27、用。钙离 子通道通常分为3型， 其中以 L型钙通道在调节血 管 张 力中 起着 重 要的 作 用 6 1 o n e f id ip in e 为 第一 代L 型钙通道的拮抗剂， 其作用时间短， 组织选择性较 差。本实验应用n e f i d i p i n e 治疗大鼠H P H主要作为 阳性对照， 以评价 D H E A对大鼠H P H的降压效果。 本研究发现， n e f i d i p i n e 在1 0 0 m g / k g 丙对大鼠 H P H的降压效果不明显， 与用药前比较， 其 m P A P变 化不大， 但体动脉压却出现较为明显的降低， 给予 1 5 0 一 2 0 0

28、m g / k g 的剂量， 其m P A P 才出现明显下降， 但亦发生体动脉压明显降低的副作用。因此， 短效 的钙离子通道拮抗剂对H P H的降压作用效果较差， 且副作用明显， 而长效的、 第二代钙离子通道拮抗剂 对H P H的降压作用有待进一步研究。 参考文献 B a r m a n S A . P o t a s s i u m c h a n n e l s m o d u l a t e h y p o x i c p u l m o n a ry v a s o c o n s t r i c - t i o n . A m J P h y s i o l 1 9 9 8 J u

29、 l ; 2 7 5 ( 1 P t 1 ) : L b 4 - 7 0 . R o b e rt s o n T P , H a g u e D , A a ro n s o n P I , W a r d J P . V o l t a g e - i n d e p e n d e n t c a l - c i u m e n t ry i n h y p o x i c p u l m o n a r y v a s o c o n s t r i c t i o n o f i n t r a p u l m o n a ry a rt e r - i e s o f t h e

30、r a t . J P h y s i o l 2 0 0 0 J u n 1 5 ; 5 2 5 P t 3 : 6 6 9 - 6 8 0 . P e n g W, J o h n R , H o id a l S , e t a l . E ff e c t o f c h ro n i c h y p o x i a o n K c h a n - n e l s : r e g u l a t i o n i n h u m a n p u l m o n a ry v a s c u l a r s m o o t h m u s c l e c e ll s . A m J P

31、h y s i o 1 , 1 9 9 7 , 2 7 2 ( 4 1 ) : C 1 2 7 1 一 1 2 7 8 肖欣荣， 陈文彬， 程德云 . 慢性缺氧抑制肺动脉平滑肌细胞钾通 道活性 . 中华结核和呼吸杂志, 1 9 9 8 , 2 1 ( 1 1 ) : 6 8 1 - 6 8 5 . J e s e R L , L o e s s e r K , E ic h D M , e t a l . D e h y d r o e p i a n d ro s t e ro n e in h ib it s 加- m a n p l a t e l e t a g g r e g a t

32、 i o n i n v i t r o a n d i n v i v o . A n n N Y A c a d S c i . 1 9 9 5 , 7 4 4: 2 8 1 - 2 9 0 . N e l s o n M T , P a t l a k J B , W o r l e y J F , e t a l . C a l c i u m c h a n n e l s , p o t a s s i u m c h a n n e l s , a n d v o l t a g e d e p e n d e n c e o f a r t e r i a l s m o o

33、t h m u s c l e t o n e . A m J P h y s i o l . 1 9 9 0 , 2 5 9 : C 3 一 C 1 8 . ( 收稿日 期二 2 0 0 3 -0 3 - 1 3 ) 会讯 成都军区科研管理干部培训班暨第三届 军区医学科研管理学术会议在贵阳召开 成都军区科研管理干部班暨第三届军区医学科研管理学术会议于2 0 0 3 年3 月2 8日 一4 月 1日 在贵州 省贵阳市召开。军区各集团军、 各省军区及各医院的相关人员约8 0 人到会。会议由成都军区联勤部卫生部 医疗管理处王军处长主持， 军区联勤部卫生部张林部长出席了开幕式并做了重要讲话。会议邀请全军科管 战线的著名专家就科研管理中应注意的一些主要问题做了精彩的专题报告。此次会议共收到了科研管理论 文 5 0 余篇， 其中成都军区总医院、 成都军区昆明总医院， 西藏军区总医院、 贵阳4 4医院和军区军事医学研究 所等单位在会上做了大会交流。军区医学科研管理专业委员会主任委员成都军区总医院李明利院长主持了 交流会并做总结发言。此次会议对成都军区“ 十五” 以来的科研工作进行了总结， 对今后的科研管理工作提 出了明确的要求， 必将对全区的科研管理工作产生深远影响。 ( 成都军区总医院科训科杨波) 4