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1、NY 82.151988 中华人民共和国农牧渔业部部标准中华人民共和国农牧渔业部部标准 果汁测定方法果汁测定方法 胡萝卜素的测定胡萝卜素的测定 NY 82.151988 本标准等同采用国际果汁联盟本标准等同采用国际果汁联盟 IFJU 分析法。No.44（1972）总类胡萝卜 素和 分析法。No.44（1972）总类胡萝卜 素和胡萝卜素的测定。 胡萝卜素的测定。 1 原理原理 利用甲醇石油醚将果汁中的总类胡萝卜素抽提出来，经氧化铝柱层析， 使 利用甲醇石油醚将果汁中的总类胡萝卜素抽提出来，经氧化铝柱层析， 使胡萝卜素与其它色素分离，将洗脱液于胡萝卜素与其它色素分离，将洗脱液于 450nm 波长处
2、进行比色测定。波长处进行比色测定。 2 试剂试剂 21 甲醇（京甲醇（京 Q/HG 1015061976） ：分析纯。） ：分析纯。 22 石油醚： （石油醚： （HG 310031976） ：分析纯，沸程） ：分析纯，沸程 6090。 23 硫酸钠（硫酸钠（GB 6391977） ：分析纯。） ：分析纯。 24 石英砂：过筛，用浓盐酸浸泡，除去铁质，再以稀氨水浸泡，最后用蒸 馏水冲洗至中性，烘干备用。 石英砂：过筛，用浓盐酸浸泡，除去铁质，再以稀氨水浸泡，最后用蒸 馏水冲洗至中性，烘干备用。 25 氧化铝（氧化铝（HGB 34131962） ：分析纯，用） ：分析纯，用 8%水使部分失活。水
3、使部分失活。 26 标准标准胡萝卜素溶液：溶解胡萝卜素溶液：溶解 20mg胡萝卜素于少量氯仿中，用石油 醚 （ 胡萝卜素于少量氯仿中，用石油 醚 （2.2） 稀释至） 稀释至50mL， 用时吸取， 用时吸取2mL再以石油醚稀释至再以石油醚稀释至100mL,浓度为浓度为8g/mL。 注：用氧化镁代替氧化铝，效果也很好。 g/mL。 注：用氧化镁代替氧化铝，效果也很好。 3 仪器仪器 31 分析天平：感量分析天平：感量 0.0001g。 32 分光光度计。分光光度计。 33 层析柱：层析柱：2 ，L25 的层析柱。 2 ，L25 的层析柱。 34 分液漏斗：分液漏斗：250mL。 35 过滤器。过
4、滤器。 36 真空浓缩器。真空浓缩器。 37 容量瓶：容量瓶：50mL、20mL。 38 移液管：移液管：5mL、10mL、25mL。 4 测定程序测定程序 41 提取提取 准确称取准确称取 10g 果汁于烧杯中，加入果汁于烧杯中，加入 3040mL 甲醇和石油醚溶液（甲醇和石油醚溶液（11） ， 搅拌，过滤。转移滤液至分液漏斗中，加入甲醇和石油醚溶液（ ） ， 搅拌，过滤。转移滤液至分液漏斗中，加入甲醇和石油醚溶液（11）重复提 取，直至石油醚相呈无色。 ）重复提 取，直至石油醚相呈无色。 42 洗涤洗涤 加蒸馏水加蒸馏水 100mL 于分液漏斗中，旋摇使提取液中的甲醇溶于水中，静置澄 清，
5、放掉下面含有甲醇的水层。经反复洗涤，直至提取液中的甲醇与石油醚完 全分离。 于分液漏斗中，旋摇使提取液中的甲醇溶于水中，静置澄 清，放掉下面含有甲醇的水层。经反复洗涤，直至提取液中的甲醇与石油醚完 全分离。 加入无水硫酸钠干燥石油醚层，然后过滤到加入无水硫酸钠干燥石油醚层，然后过滤到 200mL 容量瓶中，用石油醚洗 涤硫酸钠，洗涤液并入容量瓶中，再用石油醚稀释至刻度。 容量瓶中，用石油醚洗 涤硫酸钠，洗涤液并入容量瓶中，再用石油醚稀释至刻度。 43 浓缩浓缩 中华人民共和国农牧渔业部 19880127 发布 19880801 实施 中华人民共和国农牧渔业部 19880127 发布 19880
6、801 实施 NY 82.151988 取取 175mL提取液真空浓缩至提取液真空浓缩至 5mL左右。 为清除痕量残留的甲醇， 再取左右。 为清除痕量残留的甲醇， 再取 10mL 石油醚，真空浓缩至石油醚，真空浓缩至 23mL。重复两次。重复两次。 44 柱层析及洗脱柱层析及洗脱 层析柱中，氧化铝的填充高度为层析柱中，氧化铝的填充高度为 8 。先用。先用 8%的水使部分失活。再加入纯 石油醚，当石油醚流出至液面刚好填过氧化铝层为止。将浓缩提取液加入层析 柱中，使各种色素在柱上逐渐分离，而石油醚淋洗液则由下端流出。 的水使部分失活。再加入纯 石油醚，当石油醚流出至液面刚好填过氧化铝层为止。将浓缩
7、提取液加入层析 柱中，使各种色素在柱上逐渐分离，而石油醚淋洗液则由下端流出。 当加入约当加入约 25mL 石油醚后，石油醚后，胡萝卜素馏分便到达柱子的下限。此时， 可再加入 胡萝卜素馏分便到达柱子的下限。此时， 可再加入 25mL 石油醚淋洗， 将馏出液收集在石油醚淋洗， 将馏出液收集在 25mL 量筒中， 转移至量筒中， 转移至 50mL 容量 瓶中，并用石油醚洗涤量筒数次，合并洗涤液于容量瓶中，最后用石油醚定容。 容量 瓶中，并用石油醚洗涤量筒数次，合并洗涤液于容量瓶中，最后用石油醚定容。 45 比色测定比色测定 标准曲线的绘制：用浓度为标准曲线的绘制：用浓度为 8g/mL 的标准胡萝卜素
8、溶液配制成一系列浓 度为 的标准胡萝卜素溶液配制成一系列浓 度为 0.2、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0、2.4g/mL 的石油醚溶液，用纯石油醚作空 白，用 的石油醚溶液，用纯石油醚作空 白，用 1cm 比色皿，于比色皿，于 450nm 波长处测读吸光值。以吸光值为纵坐标，浓度为 横坐标，绘制标准曲线。 波长处测读吸光值。以吸光值为纵坐标，浓度为 横坐标，绘制标准曲线。 用同样方法测读提取液的吸光值。从标准曲线中查出其含量。用同样方法测读提取液的吸光值。从标准曲线中查出其含量。 5 结果的表示和计算结果的表示和计算 胡萝卜素的含量表示为胡萝卜素的含量表示为 mg/100mL 试液，取两位小数。对浓汁应表示 为 试液，取两位小数。对浓汁应表示 为 mg/100g 试液，取两位小数。试液，取两位小数。 附加说明：附加说明： 本标准由北京农业工程大学负责起草。本标准由北京农业工程大学负责起草。 本标准主要起草人：张坤英。本标准主要起草人：张坤英。 中华人民共和国农牧渔业部 19880127 发布 19880801 实施 中华人民共和国农牧渔业部 19880127 发布 19880801 实施