丙泊酚对内毒素诱导大鼠肺组织 TNF-α和IL-1β释放的影响.pdf

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1、数理医药学杂志 2 0 0 6 年第 1 9 卷第4 期 文章编号: 1 0 0 4 - 4 3 3 7 ( 2 0 0 6 ) 0 4 - 0 3 7 5 - 0 3中图分类号: R - 3 3文献标识码: A 基础医学研究 丙泊酚对内毒素诱导大鼠肺组织 T N F - a 和I L - I R 释放的影响 姚媛媛肖 宏江 ( 浙江大学医学院附属第二医院麻醉科杭州3 1 0 0 0 9 ) 摘要: 目的: 观察丙泊酚对内毒素( L P S ) 诱导大鼠肺组织肿瘤坏死因子一 a ( T N F - a ) 、 白细胞介素- 1 日 ( I L - 1 阳释放的影响。 方法: 将雄性Wi s t

2、 a r 大鼠6 0 只随机分为正常对照组( C组， 输注生理盐水) , L P S 对照组( L组， 股静脉注射L P S 5 m g / k g 后输注生理盐水) 和 丙泊酚处理组( L p 组， 股静脉注射L P S5 m g / k g 后立即输注丙泊酚l o m g “ k g - 1 . h - 1 ) . 按预设时相分别于l h , 2 h , 3 h , 4 h 时间点放血处 死各组动物， 酶联免疫吸附法( E L I S A ) 检测肺组织细胞因子T N F - a , I L - 邓水平的变化. 结果: L组大肺组织中T N F - a , I L - 邓水平与C 组相比较

3、显著增高( P 0 . 0 5 或P 0 . 0 1 ) ， 经丙泊酚处理后， 此作用得到部分逆转. 结论: 丙泊酚能抑制内毒素诱导的大鼠 肺组织细胞 因子T N F - a , I L - 1 俘 水平上升。 关键词: 丙泊酚; 内毒素; 肺瘤坏死因子， 白细胞介素- 1 内毒素( L P S ) 侵人机体， 引起肿瘤坏死因子一 a ( T N F - a ) , 白细胞介素- 1 p ( I L - 1 阳、 白细胞介素- 8 ( I L - 8 ) 、 细胞间粘附因子 (I C A M- 1 ) 等炎症介质过度表达， 是导致急性肺损伤的一个重 要因素C 1 . z 3 . 近年来， 已

4、证实丙泊酚具有良好的抗氧化和抑制 细胞因子的功能， 然而， 关于丙泊酚对内毒素所致肺部炎症的 保护作用及其分子作用机理至今尚未完全阐明。 本实验采用 酶联免疫吸附注( E L I S A ) 观察丙泊酚对内毒素诱导的大鼠肺 组织T N F - a , I L - 1 p 释放的影响， 旨在探讨它们之间的关系。 1 材料和方法 1 . 1 实验材料 健康雄性Wi s t a r 大鼠6 0 只， 由武汉大学医学院实验动物 中心提供， 体重( 2 0 0 士5 0 ) g 。 丙泊酚( 英国阿斯利康公司) = L P S ( E . c o l i L P S s e r o t y p e 0

5、1 1 1 : B 4 ) ( 美国S ig m a 公司) ; 大鼠 T N F - a E L I S A试剂盒( 美国R衣D公司) ， 大鼠I L - 1 p E L I S A 试剂盒( 美国B e n d e r 公司) ， WZ S - 5 0 F Z微量输液泵( 德国B / B r a u n 公司) . 1 . 2 动物模型和实验分组 实验大鼠以1 0 0 戊巴比妥钠3 0 m g / k g 腹腔注射行基础麻 醉。 随机分为3 组: 正常对照组( C组) : 实验中单纯给予生理 盐水， 首次剂量为l m l / k g ， 随后以l m l “ k g - “ h - 持续静

6、脉滴 注; L P S 对照组( L组) : 股静脉注射L P S ( 5 m g / k g ) 后， 持续 静脉输注生理盐水( l m l “ k g - - h ) ; 丙泊酚处理组( L p 组) : 股静脉注射L P S ( 5 m g / k g ) 后， 立即输注丙泊酚( 1 0 m g / k g 的诱导剂量， 随后以1 0 m g - k g - “ h - 的速度持续静脉输注) 。 按 预设时相在I h , 2 h , 3 h , 4 h各时间点放血处死大鼠， 立即开胸 取肺， 一7 0 保存。 1 . 3 细胞因子的测定 取右肺称重后置于匀浆缓冲液中， 以每克组织加人l

7、O m l 缓冲液的比例加人缓冲液。 缓冲液中含蛋白酶抑制剂混合物， 包括l m m o l / L P M S F ; l p g / m l l e u p e p t i n ; l p g / m l a p r o t in i n 溶 于含0 . 5 0 o T r it o n X 1 0 0 的P B S中( p H 7 . 2 ) 。 标本匀浆后， 以 1 5 0 0 0 g 离心1 0 分钟， 取上清， 使用大鼠E L I S A试剂盒分别检 测细胞因子T N F - a 和I L - 1 p 的含量。 1 . 4 统计学分析 实验数据均以均数士标准差表示， 应用S P S

8、 S软件进行单 因素方差分析和t 检验的统计学处理， P 0 . 0 5 为差异有显著 性 。 2 结果 2 . 1 丙泊酚对大鼠肺组织T N F - a 水平的影响 与C组相比， L组大鼠肺组织T N F - a 水平显著上升， 2 h即 达到峰值， 此后迅速下降， 但仍高于C组; L p 组大鼠肺组织 T N F - a 水平也高于C组， 但其上升幅度远低于L组， 峰值延后， c o n c e n t r a t i o n s o f D e x a m e t h a s o n e f o r 2 4 h o u r s ， t h e n t h e e x p r e s s

9、i o n o f P 5 3 ， B a x a n d B c l - 2 i n a s t r o c y t e s w a s m e a s u r e d b y i m m u n o c y t o c h e m i c a l a n a l y s i s . R e s u l t s : T h e i m m u n o r e a c t i v i t y f o r P 5 3 w a s m a r k e d l y i n c r e a s e d wi t h t h e e l e v a t i o n o f c o n c e n t r

10、 a t i o n o f D e x a me t h a s o n e ; t h e r a t i o o f B a xt o B c l - 2 i n 1 0 - g r o u p w a s s i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d c o m p a r e d w i t h o t h e r g r o u p s . C o n c l u s i o n: i n d u c e d b y Th e e x p r e s s i o n e n h a n c e de x p r e s s i o n o

11、f P 5 3 a n d B a x m a y c o n t r i b u t e t o K e y w o r d s t h ea p o p t o s i so fi n vi t r o v a s t a mo u n t o f De x a me t h a s o n e . d e x a me t h a s o n e ; a s t r o c y t e s a s t r o c y t e ;a p o p t o s i s; P 5 3 ; B a x ; B c l - 2 收稿日期: 2 0 0 6 - 0 1 - 1 5 .3 7 5. J

12、o u rna l o f Ma t h e ma t i c a l Me d i c i n eVo l . 1 9 NO. 4 2 0 0 6 出 现在3 h , 3 h , 4 h 点时L和L p 两组间均无显著性差异。 见图1 , 2 . 2 丙泊酚对大鼠肺组织 I L - 1 R 水平的影响 与C组相比， L组大鼠各时间点肺组织I L - 1 R 水平均显著 增高， 经丙泊酚处理后则明显降低， 见图2 , 一日、如e公叮闷 一已、助d。苗21 图1 肺组织匀浆中T N F - a 水平的变化图2 肺组织匀浆中I L - 甲水平的变化 3 讨论 急性肺损伤( A L I ) 发病机制

13、复杂， 患病率和死亡率居高不 下， 一直是临床重症监护中的治疗难点。 就其发病机理而言， 目 前普遍认为， 前炎症介质( T N F - a , I L - 1 p , I L - 8 等) 、 粘附分子 ( I C A M- 1 , P 一 选择素等) 及细胞因子的过量生成起关键作 用E 1 , 2 1 。 革兰氏阴性细菌败血症是临床急性肺损伤的常见原因 之一， 其内毒素脂多糖( L P S ) 中的类脂 A具有极强的生物学 活性， 诱使细胞因子的释放和激活。 L P S作为一种致伤因素， 可直接损伤血管内皮细胞， 使血管通诱性增加， 大量富含蛋白 质的液体由肺血管溢出， 形成肺间质水肿和肺

14、泡水肿， 影响气 体交换和血氧合功能， 造成组织缺氧， 从而造成对机体的损 害。 因此， 本实验在股静脉注射L P S 5 m g / k g ) 后应用E L I S A 实验方法， 分别观察了L P S 诱导的大鼠肺组织T N F - 。 和I L - 1 俘 释放的变化。 结果显示， L P S 致伤后， 肺组织T N F - a , I L - 1 俘 水平显著增高， 提示生物活性介质的过度表达在内毒素所致 肺部炎症的发病过程中起到重要作用。 丙泊酚作为一种新型麻醉镇静药已广泛应用于临床， 其 对机体的免疫调节作用逐渐被人们所接受， 并已证实有良好 的抗氧化和抑制细胞因子的功能。 Mi

15、k a w a 等I s 已经发现了异 丙酚能够抑制中性粒细胞的吞噬作用以及活性氧的释放; C r o z i e r 等 4 发现异丙酚和阿芬太尼静脉麻醉时可抑制腹式子 宫切除术患者血浆中I L - 6 的释放; G a l l e y 等C s 证明异丙酚可 抑制体外经L P S 诱导中性粒细胞中I L - 8 的产生， T a n ig u c h i 等 a 也发现了异丙酚可降低内毒素血症时血清T N F - a , I L - 6 , I L - 1 0 水平及中性粒细胞的活化。 本实验首次观察了丙泊酚对 内毒素诱导的大鼠肺组织T N F - a , I L - 1 俘 释放的影响，

16、 发现丙 泊酚能对动物肺组织中炎症因子T N F - a , I L - 1 日 的释放产生抑 制效应的， 这可能是丙泊酚发挥免疫调节功能， 对急性肺损伤 起到保护效应的作用机制之一， 这将为急性肺损伤的临床治 疗提供一定的理论依据， 但其详细作用机理尚有待于进一步 研究。 参考文献 A r m s t r o n g L , Mi l l a r A B . R e l a t i v e p r o d u c t i o n o f t u m o u r n e c r o s i s f a c t o r a l p h a a n d i n t e r l e u k i n

17、1 0 i n a d u l t r e s p i r a t o r y d i s t r e s s s y n d r o m . T h o r n x , 1 9 9 7 , 5 2 x 4 4 2 - 4 4 6 . T h o m a s R M. L u n g c y t o k i n e s a n d A R D S . C h e s t , 1 9 9 9 , 1 1 6 : 2 - 8 . Mi k a w a K, A k a m a t s u H, N i s h i n a K, e t a l . P r o p o f o l i n h i b

18、 i t s h u m a n n e u t r o p h i l f u n c t i o n s . A n e s t h A n a l g , 1 9 9 8 , 8 7 : 6 9 5 - 7 0 0 . C r o z i e r T A, Mu l l e r J E, Q u i t t k a t D, e t a l . E f f e c t o f a n a e s t h e s i a o n t h e c y t o k i n e r e s p o n s e s t o a b d o m i n a l s u r g e r y . B r

19、 J A n a e s t h , 1 9 9 4 , 7 2 : 2 8 0 - 2 8 5 . G a l l e y E F , D u b b e l s A M, W e b s t e r N R . T h e e f f e c t o f m i d a z o a m a n d p r o p o f o l o n i n t e r l e u k in - 8 f r o m h u m a n p o l y m o r p h o n u c l e a r l e u k o c y t e s . A n e s t h A n a l g , 1 9 9

20、 8 , 8 6 : 1 2 8 9 - 1 2 9 3 . T a n i g u c h i T, Y a m a m o t o K, O h m o t o N, e t a l . E f f e c t s o f p r o p o f o l o n h e m o d y n a m i c a n d i n f l a m m a t o ry r e s p o n s e s t o e n d o t o x e m i a i n r a t s . C r i t C a r e Me d , 2 0 0 0 , 2 8 : 1 1 0 1 - 1 1 0 6 . .3 7 6.