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1、第5 卷第8 期 2 0 0 9 年8 月 亚太传统医药 A s i a - P a c i f i cT r a d i t i o n a lM e d i c i n e V o L5N o 8 A u g 2 0 0 9 免疫记忆的建立对小鼠脑c F o s 蛋白表达的影响 巩丽云 ( 深圳大学医学院，广东深圳5 1 8 0 6 0 ) 摘要：目的：探讨免疫反应对小鼠脑海马c _ F o s 蛋白表达水平的影响。方法：以鸡的红细胞作为抗原免疫小鼠， 同时注射磷酸盐缓冲溶液P B S 作为对照组。取小鼠脑石蜡切片采用免疫组化法检测其c - F o s 蛋白的表达。结果： 免疫组小鼠脑内r
2、 F o s 蛋白的表达水平明显高于对照组，比较免疫组与对照组免疫组化染色平均灰度有统计学意 义( P O 0 5 ) ，该方法使 用方便、反应快速、结果准确，抗干扰能力强，适用于全自动 生化分析，能满足临床检测要求。 参考文献： 1 杨昌国精密度评价和方法比较中N C C L S 评价方案的应用E J 临床检验杂志，1 9 9 9 ，1 7 ( 1 ) ：4 7 2 杨昌国线性评价和干扰实验中N C C L S 评价方案的应用 J 临 床检验杂志，1 9 9 9 ，1 7 ( 3 ) ：1 8 4 3 3 潘泊荣铁蛋白与肝脏疾病E J 临床肝胆病杂志，1 9 8 5 ，1 ( 4 ) ： 2
3、 1 0 4 周荣馨血清铁蛋白检测对肝脏疾病的意义 J 3 实用内科杂志， 1 9 8 9 ( 7 ) ：3 5 9 ( 责任编辑：胡静) 收稿日期：2 0 0 9 0 4 1 6 作者简介：巩丽云( 1 9 7 4 一) ，女，辽宁大连人，博士，深圳大学医学院讲师，主要从事分子肿瘤方面的研究。 一1 1 万方数据 第5 卷第8 期 2 0 0 9 年8 月 亚太传统医药 A s i a - P a c i f i cT r a d i t i o n a lM e d i c i n e V 0 1 5N o 8 A u g 2 0 0 9 1 材料与方法 实验选用昆明种小鼠体重1 8 +
4、2 9 ，雌雄兼用。 1 1 免疫应答 取6 0 只上述小鼠分为2 组，每组各3 0 只。第一组腿 部肌肉注射P B S0 3 m L 只，第二组腿部肌肉注射3 0 C R B C0 3 m L 只，进行初次免疫应答，5 天后各组再次注射 相同试剂。 2 1 2 免疫组化S A B C 法检测小鼠脑内c - F o s 蛋白的表达 用4 水合氯醛( 0 2 m L 只) 麻醉，暴露小鼠心脏，分 别用0 9 P B S ，l 多聚甲醛( P F ) ，4 多聚甲醛( P F ) 灌 注，4 冰箱过夜后取小鼠脑。取包含背海马结构的小鼠脑 冠状切片各2 张，S A B C 法免疫组化染色，阳性细胞核
5、呈棕 黄色，按免疫组化染色强度判定实验结果。 2 结果 2 1 小鼠海马内c - F o s 蛋白的免疫组化染色结果 免疫组化法检测小鼠脑海马切片中c - F o s 蛋白的表 达，细胞核呈棕黄色者为表达阳性( 见图1 ) 。 b 图1c - F o s 蛋自在小鼠脑海马内的表达水平 a 对照组照；b 免疫组强表达( 1 0 0 X ) 2 2 小鼠海马内c - F o s 蛋白的免疫组化染色图像分析结果 应用显微图象定量分析系统( I m a g e - P r op l u sa n a l y s i s s o f t w a r e ) 测量海马内c - F o s 阳性细胞平均目标
6、灰度值。 采用配对资料的t 检验，比较C R B C 免疫组与P B S 对照组 结果，有统计学意义( P O 0 0 1 ) ，结果见表1 。 表1 免疫组化染色图像分析结果 3 讨论 本课题以小鼠为实验对象旨在探讨免疫应答对大脑神 经系统的影响。我们分别用鸡的红细胞和P B S 免疫小鼠， 免疫组化检测两组小鼠脑内e - F o s 蛋白的表达，结果发现 免疫系统激活组，c - F o s 蛋白表达要强于对照组( 见图1 ) 。 早期基因( I E G s ) c - F o s 具有把短时程作用的细胞外信 号和细胞功能长时程改变偶联起来的效应 3 ，多种外界刺 激因素均可在中枢神经系统引
7、起c - F o s 基因的表达。在海 马齿状回，与学习记忆密切相关的长时程增强( L T P ) 被诱 导的同时，也伴有l E G s 的激活 4 | 。同时文献报道c - F o s 原 癌基因在机体特异性免疫应答过程中也有蛋白表达，而机 体在受到外界异物抗原刺激发生免疫应答时，T 淋巴细胞 通过T C R 识别抗原肽后产生活化信号，在活化初期半小时 内核转录因子( f o s j u n ，N F A T ) 和原癌基因e - m y c 表达，数 小时后可见到多种细胞因子( C K ) 及其受体合成，从而建立 起机体的免疫记忆基础I s ，c - F o s 可能作为特定刺激下神 经元
8、功能活动的标志物 6 | 。免疫系统的活动对机体高级 神经中枢具有一定影响，与多种蛋白质有关，涉及多个基因 的表达，因此免疫记忆的建立对神经系统的影响还有待进 一步深入研究。 参考文献： 1 万瑜，杨钢，万曙霞，等肾素一血管紧张素一应激反应系统口 生理学报，1 9 9 6 ，4 8 ( 6 ) ：5 2 1 5 2 4 2 巩丽云，王准。刘辉免疫应答过程对小鼠习得性行为的影响及 其相关分子机制的研究 J 免疫学杂志，2 0 0 5 ( 1 1 ) ：4 9 3 4 9 5 3 张玉秋，梅俊学习和记忆对大鼠背海马结构内c - F o s 表达的影 响 J 中国神经科学杂志，2 0 0 0 ，1
9、6 ( 2 ) ：1 3 8 1 4 2 4 T H O M P S O NR F ，u MJ J M e m o r ys y s t e r mi nt h eb r a i na n dl o c a l i z a t i o no fam e m o r y J P r o cN a t lA c a dS c iU S A ，1 9 9 6 ( 9 3 ) ： 1 3 4 3 8 5 3 陈慰峰医学免疫学 J 第4 版北京：人民卫生出版社，2 0 0 6 ； 9 0 一9 2 6 3 K A T OJ ，W A K I S A K AS ，T A B A T AM JK A T O
10、J ，e ta 1 I n d u c - t i o no fF o sp r o t e i ni nt h er a tt r i g e m i n a ln u c l e u sc o m p l e xd u r i n g a ne x p e r i m e n t a lt o o t hm o v e m e n t J A r c h - o r a lB o i l ，1 9 9 4 ，3 9 ( 8 ) ：7 2 3 - 7 2 5 ( 责任编辑：胡静) E f f e c t so fI m m u n eR e s p o n s eo nE x p r e s
11、 s i o no fc - F o sP r o t e i ni nM o u s eB r a i n G o n gl i y u n ( S c h o o lo fM e d i c i n e ，S h e n z h e nU n i v e r s i t y ，S h e n z h e n518 0 6 0 ，C h i n a ) A b s t r a c t ：O b j e c t i v e ：T oe x p l o r et h ee f f e c t so fi m m u n er e s p o n s eo nc - F o se x p r e
12、s s i o ni nm i c eb r a i n M e t h o d s ：M i c ew e r ed i v i d e di n t o e x p e r i m e n t a lg r o u pa n dc o n t r o lg r o u p ，i m m u n o l o g i cm e m o r yo fe x p e r i m e n t a lg r o u pm i c ew e r ea c h i e v e db yu s i n gc h i c k e nr e db l o o d c e l l s ( C R I b ) a
13、se x t r a n e o u sa n t i g e nt Os t i m u l a t ei m m u n er e s p o n s e ，a n da tt h e8 a l n et i m et h ec o n t r o lg r o u pw e r ei n j e c t e dw i t hP B S T h eb r a i n so ft h et r a i n e dm i c ew e r es a m p l e dt Om a k ep a r a f f i ns e c t i o nf o rg e t t i n gt h ee x
14、 p r e s s i o nr e s u l to fc - F o si nb r a i nb yC R B C m e t h o do fi m m u n o h i s t o c h e m i s t r y R e s u l t s ：T h ee x p e r i m e n t a lg r o u ph a sh i g h e re x p r e s s i o no fc - F o st h a nt h ec o n t r o lg r o u pd i d ( P 0 0 0 1 ) C o n c l u s i o n ：T h ei m m u n er e s p o n s em a ys t r e n g t h e nt h ee x p r e s s i o no fe - F o si nm o u s eh i p p o c a m p u s K e yw o r d s ：I m m u n o l o g i cr e s p o n s e ；c - F o sg e n e ；I m m u n o h i s t o c h e m i s t r y 一1 2 万方数据