《冬凌草甲素增强U937细胞吞噬凋亡小体过程中ERK途径的调节作用.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《冬凌草甲素增强U937细胞吞噬凋亡小体过程中ERK途径的调节作用.pdf（4页珍藏版）》请在三一文库上搜索。
1、冬凌草甲素增强 !“#$ 细胞吞噬凋亡小体 过程中 %;C= $“,+ 染色及 L0C=0M8 N1;C= $“,+， 吖啶橙染料， 佛波酯 （HTF） 购于美国 U5O34 公司； 蛋白质酪氨酸激酶（BM011614M*C5O841 M0O614=0R BM;03 （JF， GUF） ； HIJ 活力检测试剂盒 （H0B/4O) 4CC47 W=5A0 R0=0=5;848 /7B0 J61=6M0 J=57= 活力# 5$ % !/“8 9-的冬凌草甲 素作用于 ?#% 细胞 ， :， -5， 5A 2， 应用 *= 活力检 测试剂盒， 测定 *= 酶活力， 按照产品说明书操作。 即收集细
2、胞， 加入 - !“ 细胞裂解液， 冰浴 : !()， 取 !“ 加入到 - !“ 的反应液中， 再加入 6 !“ 荧光 底物， #; 反应 # !() 后， 6;， - !() 终止反应。 每个样品中加入 - !“ 7孵育过夜， 辣根 过氧化物酶标记的羊抗兔二抗室温下孵育 5 2，充 分洗膜后用 HI+ 显色。 /# 结果 /$ !# 012 抑制剂 3+4()4+ 对 .*45.+4+ 诱导的吞噬 增强效果的影响# *N= 激酶在吞噬过程中发挥重要 作用 #。O(G - 是 /P(F/)() 作用于 ?#% 细胞的吞噬 曲线， 从图中可见， 5$ % !/“ 8 9- /P(F/)() 作
3、用 ?#%细胞-52后， 与对照相比， 吞噬作用明显增 643 !# 7889) .8 012 4+:4;4).* 3+4()4+ .+ +:)49 .8 .*45.+4+（“! Q “， # R#） SE1P/M2EG0C“(T0 ?#% 10“3 U0P0 MP0()1VWE40F U(42 G0)(340() X/P - 2，E)F 420) ()1VWE40F U(42 （*）/P U(42/V4 （+）5$ % !/“8 9- /P(F/C )() X/P -5 2 抑制剂 34EVP/C M/P()0 对 /P(F/)() 的吞噬刺激效果的影响。由图可 见， 不同浓度的 34EVP
4、/M/P()0 预先作用细胞 - 2 后， 34EVP/M/P()0 在适宜的浓度下 （- )!/“8 9-） 逆转 了 /P(F/)() 的吞噬增强作用。此结果提示 /P(F/)() 增强对凋亡小体的吞噬需要 *= 激酶的活化。 643 /# 7889) .8 02 4+:4;4).* .+ .*45.+4+B4+5A95 =:)49 ()4CA- 检测试剂盒检测 *= 激酶的活力。*= 激酶可使特异性荧光底物发生磷酸化， 从底物磷酸 化程度可反映 *= 激酶活力。结果表明 *= 活力 时间依赖性地增加，而 34EVP/M/P()0 抑制了 *= 的 活力 （O(G #） ， 进一步说明 /
5、P(F/)() 增强对凋亡小体 的吞噬激活了 *= 途径。 /$ E# 7F2 抑制剂 0GHIJ“H 对冬凌草甲素诱导的 吞噬增强效果的影响#KD= 激酶存在于 *N= 和 *= 下游在调节吞噬方面发挥重要的作用 A。O(G A 显示 KD= 磷酸化抑制剂 *H76 对 /P(F/)() 诱导 的吞噬增强起到了抑制作用。 另外， 凋亡小体用吖啶橙染色， ?#% 细胞用 ./01234 #567 染色， 荧光显微镜下观察形态， 可见 -中国药理学通报 ( )(:+ 678 98%: ;838 =84 ;.=7 :=?3$44.5/ $3.4$5.5D E=83 .59?B=.$5 $3 4.8
6、385= =.#8 : .54.9=84， (2F 9=.G.=C ;: 8H#.584 !“# ?% (. ,-“.,/“/9“/.F)(. 783#,)5*“) +*“6F:3*“,/ （“! I “， # JK） L*KM 98%: ;838 =84 ;.=7 ()*+“,* $3 ! 7，54 =785 .59?N B=84 ;.=7 OP M !#$%.5/ .59?B=.$5，=78 98%: ;838 9$N9?%=?384 ;.=7 = KMQ $3 5$=783 *“ #.5D (7/$9C=$:.: ;: =785 48=83#.584 ?:.5/ %./7= #.93$:
7、9$=84 /3$? )(:+ L*KM 98%: ;838 =84 .5 =78 B:8598（E）54 44.5/ $3.4$5.5D E=83 !O 7， 98%: ;838 9$N9?%=?384 ;.=7 93.4.58 $35/8N%B8%84 .584 ;.=7 U$897:= KKO,+，54 $B:83G84 BC %?$38:98598 #.93$:9$= VO“ #/5.9=.$5D W5:83=.$5 :7$;: 93$/8N%.X8 L*KM 98% = VS“ #/5.9=.$5 !“# L% M/4,:4(6(/* , 838 =84 ;.=7 !“ !#$%.=
8、7 OP M !#$%838 :8=84 BC !OZ )N(E0，54 =78 54 =$=% 012 54: ;838 48=89=84 ;.=7 8:=835 B%$= 5%C:.: $% 讨论 有效清除体内不需要或死亡的细胞对机体的健 康和疾病的恢复十分重要。吞噬细胞对凋亡细胞及 时识别和吞噬， 避免炎症介质的释放。如对凋亡细 胞识别清除失控， 体内凋亡细胞数目增加， 将引起组 织损伤和疾病的发生， 如慢性炎症， 癌症和自身免疫 疾病等 ,。许多文献报道 $3.4$5.5 有较强的抗肿 瘤， 抗菌， 清除活性氧自由基和抗突变的作用 A， M。 我们已经报道 $3.4$5.5 在高剂量下
9、 （S!P O !#$% -+- 通过活化 “$# 和 “#! 激酶增强吞噬作用。 “#! 可激活下游 ?“# 家族成员 AB# 激酶， 据文献报道 AB# 激酶调节各种细胞过程， 包括吞噬 过程的调节 C， %6。于是本文考察 AB# 激酶对 )*+,) -+- 的吞噬作用的影响， 结果发现 AB# 激酶的抑制 减少了 )*+,)-+- 的吞噬作用， 而且 AB# 磷酸化水平 随时间增加， 说明 AB# 激酶在 )*+,)-+- 诱导的吞噬 增强效果中发挥重要作用。总之， )*+,)-+- 可能通过 激活 “$# 和 “#! 激酶， 从而活化下游的 AB# 激酶， 导致对凋亡小体的吞噬作用增
10、强。 参考文献： % D 2+*;,+;:8, ;=)=:):+L 456/ L8119 P J %:+V;:8, =*):8+- T+-;98 +- I%“ P J - .+,/$， (*+T “，;X;+- !“ #$J 4#$+/!$# “35)-, 1+=)=)1M9;LLI;*+,8 9:+0 -)9+:)1 6T+-;98 ;-, =I)9=I)1+=;98 ;9 -)V81 +-:8*08,+;:89 P J ./6!2“V+11 P， _;,)T OJ !)*=98 L18;*;-L8 ,8N+-89 :I8 08;-+-7 )N L811 ,8;:I P J 7#“,*!，
11、(; #， E;9+- ,8=8-,8-: X ;-, ?“#,8=8-,8-: L811 ,8;:I +- :I8 0O81+: “，a*)-98M B !“ #$J !%C,8=8-,8-: ;L:+V;:+)- )N =*):8+- T+-;98 ! ;-, 0+:)78-;L:+V;:8, =*):8+- T+-;989 （=C( ;-, =CC）+- I 1M9;LLI;*+,8 P J - .+,/$， %55C， #-7 “，G+1V8*9:8+- G!J $M*)9+-8 =I)9=I)*M1;:+)- +9 *8b08,+;:8, =I;7)LM:)9+9 +- 0) =I;
12、789 P J - 9:5 ;!04?,0-3?A13B2B 35 031312? C3.D04 D0?;30-,=/2E, F*)% ?,/B 2Y4 E;-b+LI+6， KZKAB G;:)9I+6， Y#APY? $;T;9I+% （%= )!)0?1： 92DD $) 9: 8-I;-L8, =I;7)LM:)9+9 )N ;=)=:):+L X),+89 XM 0;L*) =I;781+T8 456/ L8119J 8,13 -+-7，U)8LI9: 66(QW 9:;+-+-7， ;-, 89:8*- X1): ;-;1M 9+9 8*8 ; :)9+9 ;9 9 9=)-98 :) )*+,)-+-J G34?/.B234 DK*+,)-+- 8-I;-L8, 0;L*)=I;781+T8 456/ L8119 :) +-789: ;=)=:):+L X),+89 XM :+)-，*89)-； ! （%）