何首乌主要成分大黄素、大黄酸和二苯乙烯苷对肝细胞、肝癌细胞的影响.pdf

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1、现代中西医结合杂志M o d e r nJ o u r n a lo fI n t e g r a t e dT r a d i t i o n a lC h i n e s ea n dW e s t e r nM e d i c i n e2 0 1 0A p f ，1 9 ( 1 1 ) 1 3 1 5 何首乌主要成分大黄素、大黄酸和二苯乙烯苷 对肝细胞、肝癌细胞的影响 孙向红1 ，孙玉维2 ，李红1 ，孙伟1 ( 1 青岛大学医学院附属医院，山东青岛2 6 6 0 0 3 ；2 山东省青岛第二中学，山东青岛2 6 6 0 0 0 ) 摘要】目的通过观察何首鸟主要成分大黄素、大黄酸和二苯

2、乙烯苷对肝细胞、肝癌 细胞的影响来探讨引发何首鸟不良反应的物质基础，为规范中药合理应用提供理论依据。方 法 用M 1 v r 法观察何首乌主要有效成分大黄素、大黄酸和二苯乙烯苷在不同浓度下作用不 同时间对肝细胞和肝癌细胞的影响。结果蒽醌类化合物大黄素、大黄酸在终浓度6 2 5 5 0 p m o l L ，随着浓度的增加、作用时间的延长对L 0 2 细胞和B E L 细胞的损伤加大、抑制率 增加；二苯乙烯苷在终浓度5 4 0 0p m o l L 。随着浓度的增加、作用时间的延长对L 0 2 细胞 和B E L 细胞的影响不明显，无显著性差异。结论大黄素、大黄酸是何首鸟引发不良反应一 肝毒性的

3、主要成分，在高浓度、长时间作用下有细胞毒作用，二苯乙烯苷在5 4 0 0 弘m o l L 作 用不同时间对肝细胞和肝癌细胞的影响不明显，无细胞毒作用。 关键词 何首鸟；大黄素；大黄酸；二苯乙烯苷；肝细胞；肝癌细胞 中图分类号】 R 一3 3 2 文献标识码】A【文章编号】1 0 0 8 8 8 4 9 ( 2 0 1 0 ) 1 1 1 3 1 5 0 3 I n f l u e n c eo fm a i nc o m p o n e n to fH e s h o u w us u c ha se m o d i n ，r h e i na n dt o l u y l e n eg l

4、 y c o s i d eo n h e p a t i cc e l l sa n dh e p a t o m ac a r c i n o m ac e l l S u nX i a n g h o n 9 1 ，S u nY u w e i 2 ，L iH o n 9 1 ，S u nW e i l ( 1 T h eA f f i l i a t e dH o s p i t a lo fM e d i c a lC o l l e g e ，Q i n g d a oU n i v e r s i t y ，Q i n g d a o2 6 6 0 0 3 ，S h a n d

5、o n g ，C h i n a ；2 Q i n g d a oN o 2M i d d l eS c h o o lo fS h a n d o n gP r o v i n c e ，Q i n g d a o2 6 6 0 0 0 ，S h a n d o n g ，C h i n a ) A b s t r a c t ：0 b j e c t i v eI ti st oa p p r o a c ht h em a t e r i a lb a s eo fu n t o w a r dr e a c t i o no fH e s h o u w ut h r o u g ho

6、 b s e r v i n gt h ei n f l u e n c eo fm a i nc o m p o n e n to fH e s h o u w us u c ha se m o d i n ，r h e i na n dt o l u y l e n e g l y c o s i d eo nh e p a t i cc e i l sa n dh e p a t o m ac a r c i n o m a c e l l a n dt op r o v i d et h et h e o r e t i ce v i d e n c ef o rr a t i o n

7、 a lu s eo ft r a d i t i o n a lC h i n e s em e d i c i n e M e t h o d sT h ei n f l u e n c e so fe m o d i n ，r h e i na n dt o l u y l e n e g l y c o s i d ei nd i f f e r e n tc o n c e n t r a t i o na n dd i f f e r e n tt i m eo nh e p a t i cc e l l sa n dh e p a t o m ac a r c i n o m a

8、c e l l w e r eo b s e r v e dw i t hM T Tm e t h o d s R e s u l t sT h em o r et h ec o n c e n t r a t i o no fa n t h r a q u i n o n e s - e m o d i n ，r h e i ni n e r e a s dd u r i n g 6 2 5 5 0 l m o l L ，a n dt h el o n g e rt i m ea c t i o n ，t h el i g r ed a m a g eo nL 一0 2a n dB E Lc

9、 e l l s B u tt h ei n f l u e n c eo ft o l u y l e n eg l y o o s i d eo nL 一0 2a n dB E Lc e l l s 、 矾n o ts i g n i f i c a n tw i t ht h ec o n c e n t r a t i o ni n c r e a s e d C o n c l u s i o nE m o d i na n dr h e i na r et h ep r i m a r y o o m p o n e n t so fH e s h o u w uo c c u r

10、 r e dl i v e r - t o x i d t y ，t h e r ea r ec y t o t o x i nu n d e rh i g hc o n c e n t r a t i o na n dl o n gp e d o da c t i o no nL 一0 2a n d B E Lc e l l sa n dt h a tt o l u y t e n eg l y c o s i d eh a v e1 “ i Os i g n i f i c a n ti n f l u e n c ed u r i n g5 - - 4 0 0t a n o l La n

11、 dh a v e c y t o t o x i nc h a r i c t r i s t i c s K e yw o r d s ：H e s h o u w u ；e m o d i n ；r h e i n ；t o l u y l e n eg l y c o s i d e ；h e p a t i cc e l l s ；h e p a t o m ac a r c i n o m ac e l l 何首乌是常用补益中药，来源于蓼科植物何首乌的干燥 块根，具有解毒消痈、润肠通便的作用，制何首乌有补肝肾、益 精血、乌须发、强筋骨等功效。现代研究表明。何首乌主要含 有蒽醌类化合

12、物、二苯乙烯苷、磷脂等成分，具有降m 脂、延缓 动脉粥样硬化、抗衰老、提高免疫力、益智等作用。近年来随 着何首乌及其制剂的广泛应用，国内外关于何首乌引起肝损 伤的不良反应报道时有出现，因此如何正确使用何首乌，使 其在安全剂量范围内发挥疗效，避免不良反应的发生，是医药 【作者简介】孙向红( 1 9 6 0 一) ，女。博士，硕士研究生导师，研究 方向为抗衰老中药药理学。 【通信作者】孙伟( 1 9 5 4 一) ，女，硕士研究生导师，研究方向为药 理学。电话：0 5 3 2 8 2 9 1 1 5 9 9 ；E m a i l ：s u n w e i m e d m a i l c o m 工

13、作者亟待解决的问题。为此笔者观察了何首乌主要有效成 分大黄索、大黄酸和二苯乙烯苷在不同浓度下作用不同时间 对肝细胞和肝癌细胞的影响，以探讨何首乌不良反应的发生 实质和有效剂量范围，避免或减少不良反应的发生。 l 实验资料 1 1 材料 1 1 1 药品与试剂M T T ( 上海化学试剂采购供应五联化 工厂) ；1 6 4 0 粉末( 美国G I B C O ) ，谷胺酰胺( 上海生工) ，注射 用青霉索钠( 华东制药股份有限公司) ；注射用硫酸链霉素( 山 东鲁抗制药) ；二甲基亚枫D M S O ( 上海化学试剂采购供应五 联化工厂) ；胰酶( 上海生工) ；乙二胺四乙酸二钠( 天津市博迪

14、化工有限公司，分析纯) ；大黄素( 中国药品生物制品检定所) ； 大黄酸( 中国药品生物制品检定所) ；二苯乙烯苷( 中国药品生 万方数据 1 3 1 6 现代中西医结合杂志M o d e r nJ o u r n a lo fI n t e g r a t e dT r a d i t i o n a lC h i n e s ea n dW e s t e r nM e d i c i n e2 0 1 0A p r ，1 9 ( 1 1 ) 物制品检定所) ；其他无机及有机试剂均为分析纯。 1 1 2 仪器2 K 一8 0 1 微型台式真空泵( 上海浦江分析仪器 厂) ，酶标仪( 奥地利

15、T e c a n 公司) ，细胞培养箱( 德国H e r a e u s 公司) ；D K 一6 0 0 S 型三用恒温水浴箱( 上海精宏实验设备有 限公司) ；超净工作台( 上海力申科学仪器有限公司) 。 1 1 3 细胞肝细胞( L 0 2 细胞) ；肝癌细胞( B E L 细胞) 。 1 2 实验方法 1 2 1 药品配制 大黄素：精密称取大黄素0 0 0 32g ，加入 D M S O1 2 m L 溶解，备用；大黄酸：精密称取大黄酸0 0 0 34 g ，加入D M S O1 2 m L 溶解。备用；二苯乙烯苷：精密称取二苯 乙烯苷0 0 0 46g ，加入D M S O1 5 0

16、t t L 溶解，备用。将配好的 药品，在避光、无菌条件下，用无血清1 6 4 0 培养液稀释成所需 浓度，分别装入消毒的E P 管中，混匀。大黄素、大黄酸配制 浓度分别为5 0 0t t m o l L 、2 5 0p m o l L 、1 2 5t t m o l L 和6 2 5 t t m o l L ；二苯乙烯苷配制浓度为分别40 0 0t t m o l L 、20 0 0 t t m o l L 、10 0 0g m o l L 、5 0 0 m o l L 、2 5 0t t m o l L 和5 0 # m o l L 。 1 2 2 细胞培养在无菌条件下，倒掉L 一0 2

17、细胞和B E L 细胞培养瓶中的培养液，用P B S5 6m L 清洗2 次，加入胰 酶，在碌微镜下观察至细胞变圆，开始脱离。加入3m L1 6 4 0 培养液，用弯头滴管吹打瓶壁，吸走大部分培养液，再加入3 m L1 6 4 0 培养液继续培养。每隔2 3d 传代1 次，每天1 次。 1 2 3 加药及测板L 一0 2 细胞、B E L 细胞用含1 6 4 0 培养 液培养，采用对数生长期细胞，以6 1 0 3 个侃细胞接种于9 6 孔板中，待细胞生长汇合率为7 0 8 0 时，向每个孔中加 2 0 肚L 的药品( 各药品浓度再次稀释1 0 倍) ，使二苯乙烯苷的 终浓度分别为4 0 0 z

18、 m o l L 、2 0 0t t m o l L 、1 0 0p m o l L 、5 0 弘m o l L 、2 5t t m o l L 和5t t m o l L ，大黄素、大黄酸的终浓度分别为5 0 g m o l L 、2 5P m o l L 、1 2 5g m o l L 、6 2 5 z m o l L ，每个浓度设定 平行做4 个孔。将加好药的9 6 孔板放入培养箱中继续培养。 待培养2 4h 、4 8h 和7 2h 时进行测板。测板时每孔加M T T ( 5 g L ) 2 0g L ，置于3 7 、5 C 0 2 细胞培养箱中孵育4h ，吸弃 上清液，每孔加入二甲基亚

19、砜1 5 0 肛L ，振荡后于测定波长5 7 0 n m ，参比波长6 3 0n m 处测定吸光度。空白对照组的平均吸 光值为1 0 0 ，其余各组均与之相比即得细胞存活率( ) 。 1 3 统计学处理所有数据用均数标准差( j 5 ) 表示， 统计分析采用S P S s1 1 0 软件做t 检验。P 0 0 5 为有显著 性差异，P 0 0 1 为有极显著性差异。 2 结果 2 1 大黄素、大黄酸和二苯乙烯苷在不同时间不同浓度下对 L 一0 2 细胞存活率的影响经M T T 法检测，大黄素和大黄 酸在低浓度( 6 2 5 - m o l L ，1 2 5 - m o l L ) 、作用时间短

20、( 4 8h 之 内) 时，对细胞生长有促进作用( 负数表示促进细胞增长率) ， 随着浓度的增加对L 一0 2 细胞的损伤增大即抑制率增加，随 着作用时间的延长( 超过4 8b ) ，抑制率增加。如大黄素、大黄 酸在浓度5 0 - m o l L 下作用4 8h 对细胞损伤率就有极显著性 差异，抑制率明显增强，结果见表1 及表2 。二苯乙烯苷在终 浓度54 0 0 t m o l L ，随着浓度的增加、作用时间的延长对L 0 2 细胞的影响不明显，仅在4 0 0 - m o l L 浓度下作用4 8h 时 对于L 0 2 细胞的抑制率有显著性差异，但随着时间的延 长，显著性差异消失。结果见表3

21、 。 表lM T T 法测得不同时间、不同浓度下大黄素对于L 0 2 细胞抑制率的影响( 咒= 4 ，牙5 ) 注：与对照组比较，P 0 0 5 ；与对照组比较，P 0 0 l ；与对照组比较，P 0 0 0 1 。 表2M T T 法测得不同时间、不同浓度下大黄酸对于L 一0 2 细胞抑制率的影响( 粗= 4 ，蜃s ) 注：与对照组比较，P 0 0 5 ；与对照组比较，P 0 0 l o 2 2 大黄素、大黄酸和二苯乙烯苷在不同时间不同浓度下对增大即抑制率增加随着时间的延长抑制率增加。当大黄素 B E L 细胞存活率的影响经M T T 法测得大黄素和大黄酸在浓度达到5 0 t l m o

22、l L 以上作用2 4h 、在2 5 弘m o l L 浓度下作用 浓度6 2 5 5 0g m o l L ，随着浓度的增加对B E L 细胞的损伤48h 以上时，抑制率有显著性差异。结果见表4 及表5 。二 万方数据 现代中西医结合杂志M o d e mJ o u r n a lo fI n t e g r a t e dT r a d i t i o n a lC h i n e s ea n dw 器t e r nM e d i c i n e2 0 1 0A p r ，1 9 ( 1 1 ) 1 3 1 7 一 表3 M T T 法测得不同时间、不同浓度下二苯乙烯苷对L - 0 2

23、细胞抑制率的影响( 超= 4 ，j 5 ) 对照组O 9 1 O 0 4 0O 9 9 O 0 30 1 3 0 O 0 4 0 二苯乙烯苷不同浓度组( 脚l L ) 4 0 0 0 9 8 0 0 3 0一7 6 90 8 9 O 0 5 1 0 1 01 2 8 0 0 3 1 5 4 2 0 0 O 8 6 O 0 05 4 9 O 9 5 0 0 54 0 41 3 2 0 0 4 一I 5 3 1 0 0 0 8 5 0 0 46 5 9 0 9 7 O 0 22 0 2 1 3 7 0 0 45 3 8 5 0 O 9 3 0 0 4 2 2 0 9 8 O 0 31 0 1 1

24、3 8 O 0 46 1 5 2 5 0 8 6 O 0 4 5 4 9 1 0 0 0 0 5一I 0 1 1 3 2 0 0 31 5 3 5 0 8 9 0 0 42 2i 0 2 0 0 53 0 3 1 4 2 0 0 5 9 2 3 一一 注：与对照组比较P 0 0 5 。 苯乙烯苷在终浓度5 4 0 0p t m o l q , ，随着浓度的增加对B E L B E L 细胞的抑制率就有极显著性差异，但随着时间的延长其 细胞作用逐渐明显，在4 0 0 , u m o l L 浓度下，作用2 4h 时对 抑制率增加不明显。见表6 。 表4 M 1 v r 法测得在不同时间不同浓度下

25、大黄素对B E L 细胞抑制率的影响( 聍= 4 ，i s ) 对照组0 4 9 0 0 40 0 7 8 0 0 50 1 1 1 0 0 10 5 0 0 3 9 0 0 3 01 9 6 40 5 6 0 0 3 0 2 8 7 00 5 9 0 0 4 0 4 6 9 2 大黄素不同浓度组“m g L ) 2 5 0 4 8 0 0 42 4 4 0 - 7 0 + 0 - 0 5 。1 0 ，3 6 O 8 6 + 0 0 2 。 2 2 4 2 1 2 5 0 4 9 0 0 10 2 0 0 7 6 0 0 2 2 4 6 1 0 9 0 0 41 8 4 j 里L 型：! !

26、一! ：! ! ! ：! ! 主! ：丝二! ：i ! ! ：! 圭Q ：坚竺二! ：墅 注：与对照组比较，P O 0 5 ；与对照纽比较，P O 0 1 ；与对照组比较P 0 0 0 1 。 表5 M 1 v r 法测得在不同时问不同浓度下大黄酸对B E L 细胞抑制率的影响( ，f = 4 ，牙s ) 对照组 大黄酸不同浓度组( m g L ) 0 4 9 0 0 40 0 7 8 0 ，0 501 1 1 0 0 1 0 5 00 4 4 O 0 21 1 3 00 7 1 0 0 2 9 9 50 8 8 O 0 4 0 2 10 4 2 50 4 8 O 0 21 6 8 0 7 9

27、 O 0 3 一0 9 4 O 9 1 O 0 1 01 7 8 1 1 2 5 O 4 7 0 0 23 3 60 8 4 O 0 4 6 6 0 0 9 54 - 0 0 3 。1 4 8 1 垄卫苎兰：! !二旦：踅 ! ：墅圭! ：Q i 竺：! ：塑Q ：2 z 圭Q ：Q ! 竺 ! i ：! ! 注：与对照组比较，P O 0 5 ；- 4 , q 肭t 比较，P 0 0 1 ；与对照组比较，P O 0 0 1 。 表6 M T T 法测得在不同时间不同浓度下二苯乙烯苷对B E L 细胞抑制率的影响( 玎：4 ，j 5 ) 对照组0 5 9 0 0 30 1 0 5 0 0 1 0

28、1 3 2 O 0 40 4 0 0 0 4 8 0 0 4 0 1 4 2 8 0 9 2 0 0 5 1 2 2 31 1 1 0 0 5 1 8 3 8 2 0 0 0 5 6 0 0 55 0 8 o 。9 6 0 0 48 7 5 】2 6 0 0 37 3 5 二苯乙烯苷不同浓度组( p t m o l L ) 1 0 0 0 5 9 0 0 4O O 9 9 + _ 0 0 55 7 l 1 3 1 0 0 4O 7 6 5 0 0 5 6 0 0 55 0 8 1 ，0 1 0 0 33 8 1 I 2 9 0 0 52 2 7 2 50 5 6 0 0 45 0 8 1 0

29、2 0 0 42 8 6 1 3 0 0 0 40 7 6 5 0 5 5 0 0 36 7 81 0 4 0 0 50 。9 5 1 3 4 0 0 5 1 5 2 一 注：与对照组比较，P 0 0 1 。 3 讨论 何首乌作为补肝肾、益精血的传统滋补中药，其有效成分 及药理作用已得到广泛的研究。但是对其有效成分的毒理作 用却研究甚少。随着其不良反应报道的逐渐增多，进一步探 求何首乌的药理及毒理作用，尤其是服用剂量大小以及时间 长短与对肝损害的相关性具有重要意义【2 J 。 M 1 v r 法是一种快速分析细胞增殖和细胞毒作用的比色 分析方法【3 | 。其检测原理为活细胞线粒体中( 下转第1

30、 3 1 9 页) 万方数据 现代中西医结合杂志M o d e r nJ o u r n a lo fI n t e g r a t e dT r a d i t i o n a lC h i n e s ea n dW e s t e r nM e d i c i n e2 0 1 0A p r ，1 9 ( 1 1 )1 3 1 9 升，明显高于A 组( P 0 0 5 ) ；在术后1 2h 达到峰值，以后一 直维持较高水平，显著高于A 组( P 0 0 5 ) 。B 组大鼠在 C L P 术后3h ，N O E T 一1 比值开始降低，且随时间推移逐渐 降低，在2 4h 达最低值，显著低

31、于A 组( P 0 0 5 ) 。见表1 。 表12 组大鼠血清N O 、E T 一1 和N O E T 一1 指标 测定结果( 牙5 ) 注：与A 组比较P 0 0 5 。 3 讨论 脓毒症时，炎症因子与血管内皮细胞损伤相互作用，引起 微血栓形成，血管收缩因子E T 一1 ，T X A 等和舒张因子N O 、 P G I 等大量释放，平衡失调，使血管张力和血流动力学调节机 制受损，导致血管通透性增加、微循环障碍，进一步导致器官 功能障碍。 N O 由左旋精氨酸在一氧化氮合酶作用下产生，是主要 的血管舒张物质【5 】，基础量的N O 具有防止血管痉挛和血栓 形成作用，而在创伤、脓毒症等条件下，

32、诱导性一氧化氮合酶 在炎症刺激下大量表达，使体内N O 水平呈指数级增加，高浓 度的N O 通过脂质过氧化反应，对机体产生破坏作用 6 - 7 。，本 实验结果显示，在C L P 术后3h ，B 组血清N O 开始上升，到术 后1 2h 达到峰值，随后稍有下降。但仍处于较高水平，明显高 于A 组( P 0 0 5 ) 。提示脓毒症时产生大量的N O ，增加血管 通透性，在脓毒症发生发展中可能起到重要的作用。 E T 一1 是主要的内皮源性血管收缩剂，具有强烈持久的 收缩血管平滑肌的作用，可引起全身血管，尤其是内脏血管的 收缩【8 。本实验中，在C L P 术后3h ，B 组血清E T 一1 水

33、平开 始上升，到术后1 2h 达峰值，在2 4h 稍有下降，但仍处于较高 水平，明显高于A 组( P 0 0 5 ) 。提示E T 一1 不仅是内皮细 胞损伤的指标，同时也是脓毒症时微循环障碍的重要因素。 本实验也从N O E T 一1 的角度观察到N O 和E T 一1 加 重脓毒症大鼠微循环障碍，血管通透性降低的作用，实验结果 显示，N O 上升速度低于E T 一1 ，随着血清中N O 和E T 一1 平 衡失调，比值逐渐下降，显著低于A 组( P 0 0 5 ) 。提示脓毒 症时。高表达E T l 和N O 平衡失调，并随脓毒症的发展有 逐渐加剧的表现。表明N O 和E T 一1 在脓毒

34、症早期发病中 具有重要作用，是导致脓毒症时微循环障碍，血管通透性降低 的重要原因，为临床上脓毒症的治疗提供了重要的理论依据。 【参考文献 】 1 H i n s h a wL B S e p s i s s e p t i cs h o c k ：P a r t i c i p a t i o no ft h em i c r o c i r c u h t i o n ： A na b b r e v i a t e dr e 啊e w J C r i tC a r eM e d ，1 9 9 6 2 4 ( 6 ) ：1 0 7 2 1 0 7 8 2 I - l a u s e rB ，

35、B r a c h tH ，M a t e j o v i c M ，e ta 1 N i t r i co x i d es y n t h a s ei n h i b i t i o ni ns e p s i s ? L s o n sl e a r n e df r o ml a r g e a n i m a ls t u d i e s J 】 A n e s t hA n a l g ，2 0 0 5 ，1 0 1 ( 1 0 ) ：4 8 8 4 9 8 3 M i c h a e lW ，E d d i eW ，A n d e r sR ，e ta 1 T h ee n d

36、 o t h e l i ns y s t e mi n s e p t i ca n de n d o t o x i ns h o c k J E u r o p e a nJ o u r n a lo fP h a r m a c o l o g y ， 2 0 0 0 4 0 7 ( I ) ：1 1 5 4 汤耀卿，李磊脓毒症动物模型制作方略及应用 J 中华实验 外科杂志，2 0 0 6 ，2 3 ( 1 2 ) ：1 4 3 3 1 4 3 4 5 】X i a o - q iX i e 。Y o t a r os ，J u n i c h iS ，e ta 1 T h ee f

37、f e c t s o fa r g i n i n ea n d s e l e c t i v ei n d u c i b l en i t r i co x i d es y n t h a s ei n h i b i t o ro np a t h o p h y s i o l o g y o f s e p s i si naC L Pm o d e l J J o n u r a lo fS u r g i c a lR e s e a r c h ，2 0 0 8 ， 1 4 6 ( 2 ) ：2 9 8 3 0 3 6 A n nS ，Y o r a mV ，R i c

38、h a r dW ，e ta 1 N i t r i co x i d ea n dw o u n dr e p a i r ： r o l eo fc y t o k i n e s ? J N i t r i cO x i d e ，2 0 0 2 ，7 ( 1 ) ：1 1 0 【7 B a h a rT ，S e d a tA ，O r h a nU ，e ta 1 E f f e c t so fc y c l o o x y g e n a s ei n ， h i b i t o r so nn i t r i co x i d ep r o d u c t i o na n d

39、s u r v i v a li nam i c e - m o d e lo f s e p s i s J P h a r m a c o l o g i c a lR e s e a r c h ，2 0 0 3 ，4 8 ( 1 ) ：3 7 4 8 8 A l e j a n d r o P ，C o m e l l a s ，A r t u r o B ，e t a l R o l e o fe n d o t h e l i n 一1i n e c u t e l u n gi n j u r y J T r a n s l a t i o n a lR e s e a r c

40、h ，2 0 0 9 ，1 5 3 ( 6 ) ：2 6 3 2 7 1 【收稿日期】2 0 0 9 1 1 1 0 ( 上接第1 3 1 7 页) 的琥珀酸脱氖酶能使外源性M 1 v r 还原为 水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒并沉积在细胞中，其甲瓒量与细 胞存活成比例，而死细胞无此功能。该方法简便、快速，适合 大量样本的分析。 肝细胞损伤或死亡是药物性肝损伤表现的基础。该实验 结果表明当药物作用于L 一0 2 细胞时，大黄素随着作用时间 的延长抑制作用增强随浓度的增高抑制率增大；大黄酸随着 作用时间的增加抑制作用增强，随浓度的增高抑制率增大；二 苯乙烯苷对L 一0 2 细胞抑制作用不明显。当药物作

41、用于 B E I ，细胞时，大黄素随着作用时间的延长抑制率增大，随浓 度的增高抑制率增大；大黄酸随着作用时间的延长抑制率增 大，随浓度的增高抑制率增大；高浓度的二苯乙烯瞢( 在4 0 0 t u m o l L 浓度以上，相当于日服何首乌2 0 0g 以上) 对B E L 细 胞有抑制作用，低于4 0 0t - m o l L 浓度对细胞作用不明显。提 示：大黄素、大黄酸是何首乌引发不良反应一肝毒性的主要成 分。在高浓度、长时间作用下有细胞毒作用；二苯乙烯苷对肝 细胞和肝癌细胞的影响不明显，无细胞毒作用。葸醌类成分 引发肝细胞损伤的机制有待进一步研究。 参 考文献 】 1 】姜鹏，张俊何首乌的肝损害 J 】中医药临床杂志。2 0 0 5 ，1 7 ( 6 ) ：6 1 7 6 1 8 2 李杰张陆勇。江振溯大黄素的药理学研究近况 J 药学进 展，2 0 0 5 ，2 9 ( 1 2 ) ：5 4 0 5 4 4 3 胡锡琴，杨晓青。刑玉瑞何酋乌致肝损害的实验研究 J 陕西 中医，2 0 0 6 ，2 7 ( 5 ) ：6 2 5 6 2 6 【收稿日期】2 0 0 9 一1 2 1 l 万方数据