创伤性急性肾衰时肾脏分离肾小管上皮细胞DNA损伤的意义.pdf

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1、1 5 9 9 第2 8 卷第 1 5 期 2 0 0 6 年 8 月 第三军医大学学报 A C T A A C A D E MI A E ME D I C I N A E MI L I T A R I S T E R T I A E V o l . 2 8 ， N o . 1 5 A u g . 2 0 0 6 论著 创伤性急性肾衰时肾脏分离肾小管上皮细胞 D N A损伤的意义 文章编号: 1 0 0 0 - 5 4 0 4 ( 2 0 0 6 ) 1 5 一 1 5 8 8 - 0 3 梁培禾， 靳风烁， 张克勤， 李彦锋， 葛成国( 第 三军医 大学 大坪医 院 野战 外科研究 所泌 尿

2、 外科， 重庆4 0 0 0 4 2 ) 提 要: 目 的 探讨肾小管上皮细胞D N A 损伤在急性肾功能衰竭( a c u t e r e n a l f a il u r e , A R F ) 中的意义。方法 W i s t a r 大鼠1 0 8 只， 等分为大、 小剂量及对照组， 分别于后肢肌肉注射1 0 , 5 m l/ k g 5 0 %甘油及1 0 m V k g 生理盐水。于1 , 3 , 6 , 1 2 , 2 4 , 4 8 h 测定血 尿素氮( b l o o d u r e a n i t r o g e n , B U N ) 、 肌醉( c r e a t i n

3、 i n e , C r ) ， 取肾 脏分离肾 小管上皮细胞， 单细胞凝胶电泳 ( s i n g l e c e l l g e l e l e c t r o p h o r e s i s , S C G E ) 技术测定D N A 损伤。 结果 两实验组B U N , C r 分别于1 2 , 6 h 起较对照组显著升高 ( P 0 . 0 5 , P 0 . 0 1 ) ， 两实验组间B U N和C r 分别在1 2 h 和2 4 h 起出现显著差异( P 0 . 0 5 , P 0 . 0 1 ) ， 表明肾功能受损 程度不同。肾脏分离肾小管上皮细胞D N A 损伤对甘油注射呈现

4、剂量和时间依赖性， 其变化趋势与尿脱落细胞D N A损伤 相似， 但损伤程度较轻。结论D N A损伤、 细胞脱落及凋亡等变化参与了肾小管上皮细胞的损伤， 是A R F 病理生理变化 过程“ 多米诺骨牌” 中的重要环节， 在预防或及时阻断其发生在A R F的救治中有重要意义。 关键词: 急性肾功能衰竭; 肾小管上皮细胞脱落; D N A 损伤 中图法分类号: R 3 2 2 . 6 1 ; R 3 2 9 . 2 4 ; R 6 9 2 . 5文献标识码: A D N A d a m a g e o f r e n a l t u b u l a r e p i t h e l i a l c

5、e l l s i n a c u t e r e n a l f a i l u r e L I A N G P e i - h e ， J I N F e n g - s h u o ， MA N G K e - q i n , L I Y a n - f e n g , G E C h e n g - g u o ( D e p a r tm e n t o f U r o lo g y , In s titu te o f S u rg e ry R e s e a r c h , D a p i n g H o s p i t a l , T h i r d M i l i t a

6、r y M e d i c a l U n i v e r s i t y , C h o n g q i n g 4 0 0 0 4 2 ， C h i n a ) A b s t r a c t : O b j e c t iv e T o i n v e s t i g a t e t h e r o l e o f D N A d a m a g e i n t h e d e v e l o p m e n t o f a c u t e r e n a l f a i l u r e ( A R F ) ， e s p e c i a l l y a t t h e e a r l

7、 y s t a g e . M e t h o d s A R F o f d if f e r e n t d e g r e e w a s i n d u c e d b y i n t r a m u s c u l a r i n j e c - t i o n o f 1 0 ， 5 m l / k g g l y c e r o l o r p h y s i o l o g i c a l s a l i n e t o 1 0 8 Wi s t a r r a t s ( n = 3 6 f o r e a c h t r e a t m e n t ) . C r a n

8、 d B U N i n s e r u m w e r e d e t e c t e d a t 1 ， 3 ， 6 ， 1 2 ， 2 4 a n d 4 8 h a f t e r i n j e c t i o n . A t t h e s a m e t i m e ， D N A d a m a g e o f t u b u l a r c e l l s i s o l a t e d f r o m k i d n e y a n d e x f o l i a t i v e t u b u l a r c e l l s i n u r i n e w e r e a

9、 s s a y e d b y s i n g l e c e l l g e l e l e c t r o p h o r e s i s a s - s a y ( S C G E ) . R e s u lt s A f te r g l y c e r o l in j e c ti o n ， B U N a n d C r i n c r e a s e d s i g n i f i c a n tl y w i th s t a t i s t i c a l d i f f e r e n c e a m o n g g r o u p s . T h e D N A d

10、 a m a g e i n t h e t u b u l a r c e l l s o f t w o g l y c e r o l t r e a t e d g r o u p s p r e s e n t e d e a r l i e r t h a n C r a n d B U N i n s e ru m . T h e D N A d a m a g e o f t u b u l a r c e l l s s h o w e d a d o s e - a n d t i m e - d e p e n d e n t m a n n e r w i t h g

11、l y c e r o l d o s e a n d p o s i t i v e r e l a t i o n s h i p t o t h e d e g r e e o f r e n a l f u n c t i o n d a m a g e . B u t t h e D N A d a m a g e w a s m o r e s e r i o u s i n u r i - n a ry e x f o l i a t i v e t u b u l a r c e l l s . C o n c l u s io n T h e r e s u l t s s

12、u g g e s t t h a t c e l l e x f o l i a t i o n a n d D N A d a m a g e a r e i m p o r - t a n t m e c h a n i s m s o f t u b u l a r c e l l i n j u ry i n A R F ， a n d t h e i r p r e v e n t i o n a n d b l o c k i n g m a y p l a y a n i m p o r t a n t r o l e i n t h e t r e a t me n t o

13、f ARE K e y w o r d s : a c u t e r e n a l f a i l u r e ; r e n a l t u b u l a r e p i t h e l i a l c e l l e x f o l i a t i o n ; D N A d a m a g e 急性肾功能衰竭( a c u t e r e n a l f a i l u r e , A R F ) 是常见 的危急重症。在进行肾脏移植、 心血管手术， 或发生感 染性休克、 失血性休克及创伤等的患者中， 其发生并不 少见。有文献报道这些患者一旦发生A R F ， 即使有先 进的透析和

14、I C U支持治疗， 病死率仍高达 2 5 % - 9 0 %。 而在外科操作如出 现并发症并导致患者死亡的 情况中， 大多数可见A R F的参与， 因而对其早期病理 作者简介: 梁培禾( 1 9 7 2 一 ) ， 男， 山 西省平遥县人， 硕士， 主治医师， 主要从事 泌尿系统创伤和泌尿生殖系统肿瘤方面的研究。电话: ( 0 2 3 ) 6 6 3 1 9 9 4 4 通讯作者: 靳风烁， 电 话: ( 0 2 3 ) 6 8 7 5 7 3 6 4 收稿日期: 2 0 0 5 - 0 7 - 1 1 ; 修回日期: 2 0 0 6 - 0 1 - 1 9 生理改变， 尤其是肾小管上皮细胞

15、损伤的研究具有重 要意义 。 传统的观点认为， A R F 最常见的 病理类型 是“ 急 性肾小管坏死( a c u t e t u b u l a r n e c r o s i s , A T N ) “ , 即 狭义的A R F 。但近年研究表明， 脱落、 凋亡等坏死 以外的肾小管上皮细胞丢失途径在 A R F中有重要意 义【 ， 。 我 们曾 对脱落、 凋亡及坏死等不同形式的肾 小管上皮细胞损伤在A R F中的意义加以研究， 并发现 尿脱落活细胞中D N A损伤严重， 且与肾功能损害相 关 3 。 本实验 则在以 往研究基础上， 由肾 脏直接分离 肾小管上皮细胞并对D N A损伤进行了

16、研究， 以探讨其 在A R F 发病机制中的意义。 第 巧期梁培禾， 等. 创伤性急性肾衰时肾脏分离肾小管上皮细胞 D N A损伤的意义 1 5 8 9 表2 甘油注 射后3 组 大鼠 血C r 变化 情况( C B / l u n o l L 一 ， x t s ) 1 材料与方法 1 . 1 动物模型 W i s t a r 大鼠1 0 8 只， 雌雄不拘， 体质量( 2 0 0 士 2 0 ) 9 ( 由本院 实验动物中 心提供) ， 分为大、 小剂量及对照组各3 6 只， 禁食1 2 h 后2 %戊巴比妥钠腹腔注射麻醉， 大剂量组 1 0 m l / k g ， 小剂量 组5 m U

17、k g 分双侧后肢肌肉注射5 0 %甘油诱导A R F ; 对照组以 生理盐水1 0 m l/ k g 代替。此后动物自由摄食进水。 1 . 2 标本采集与实验 各组动物于甘油注射后 1 , 3 , 6 , 1 2 , 2 4 , 4 8 h 取血标本测定 血尿素氮( b l o o d u r e a n i t r o g e n , B U N ) 、 肌配( c r e a t i n i n e , C r ) ， 每 次6 只。同时取肾脏， 每次5 只， 按文献 3 , 4 的方法分离肾小 管上皮细胞制成( 2 . 5 一 3 . 0 ) x 1 0 5 / m l P B S 悬

18、液， 并进行S C G E 检测， 简要步骤如下: 1 0 0国1 . 0 %正常熔点琼脂糖( N M A ) P B S 凝胶铺于磨砂载玻片上， 4， 1 0 m i n 固化; 3 7， 细胞 P B S 悬液与低熔点琼脂糖 L M A ) P B S 凝胶混匀， 7 5闪铺于第1 层N M A 上( 细胞终浓度1 3 0 / 国， L M A 0 . 6 %) ， 固 化; 同前铺 第3 层无细胞0 . 6 % L M A ， 固化; 浸人细胞裂解液4, 2 h ; 水平电泳槽， 高 p H电泳缓冲液浸泡 2 0 m i n ; 低温 ( 1 5 C ) , 3 0 0 m A , 2

19、5 V ， 电泳2 0 m i n ; p H 7 . 5 , 0 . 4 m o l / L T r i s 浸洗， 5 m i n x 3 次; .2 0 m 岁L 澳化乙陡染色1 5 m i n ; 0 - l y m p u s B X -6 0 荧光显微镜下选取5 个x 4 0 0 视野， 每个视野观 察 1 0 个细胞， 计算有拖尾细胞( 彗星) 比 例， 目 镜测微尺测定彗 星尾长， 并根据尾长及目 测D N A迁移量( 与尾长、 尾部荧光强 度成正比) 将损伤分为无损伤( 无拖尾) 、 轻、 中、 重度和完全损 伤( 彗头碎裂， 荧光弱， D N A全部逸出细胞外) 5 级，

20、分别计数。 1 . 3 统计学分析 数据以x 1 、 表示， 用E x c e l 2 0 0 0 统计软件进行， 检验， 计 数资 料用x ， 检验。 2 结果 2 . 1 肾功能变化 动物注射甘油后约 1 h 排出酱油样尿， 大剂量组尿色深于 小剂量组， 1 5 h 后转清。与对照组比较， 大、 小剂量组 B U N , C r 均有显著升高， C r 变化较早， 两组均在6 h 起显著升高， B U N则 于1 2 h 起显著升高( P 0 . 0 5 , P 0 . 0 1 ) 。大、 小剂量组间B U N 和C r 也分别在1 2 h 和2 4 h 起出现显著差异( P 0 . 0

21、5 , P 0 . 0 1 ) 。 见表1 , 2 。表明肾功能受损程度不同 3 ,5 1 0 2 . 2 肾脏分离肾小管上皮细胞D N A损伤测定 甘油注射后早期即可见分离肾小管上皮细胞 D N A损伤明 显， 呈现一定时间和甘油剂量依赖性， 变化趋势与文献 3 报道 相似， 但损伤程度较尿脱落细胞轻。见表3 一 5 0 组别 甘油 注射后 时间( “ h ) 习 巳M一 1 3 6 1 2 2 4 4 8 大剂 量组 5 6 . 0 8 t 1 8 . 5 9 刁 俐量组 5 6 . 8 8 1 5 . 7 9 对昭全 日 绍 铭士 1 1 . 0 1 6 7 . 田 土1 2 . 1 2

22、 6 0 . 5 8 t 8 . 5 0 5 9 . 2 0土8 . 2 9 刀. 阶 1 9 . 2 3 6 7 . 0 7 1 7 . 5 0 5 1 . 4 3士 9 . 3 8 8 4 . 1 2土1 0 . 4 2 c 2 2 9 . 刀 士 3 4 . 6 8 - 2 8 4 . 8 8 土 5 7 . 0 0 7 4 . 1 7 1 7 . 2 6 b 1 5 2 . 5 1 1 9 . 0 7 2 5 3 . 4 2 1 4 0 . 1 8 c 5 7 . 8土1 2 . 3 7 5 6 . 8 17 . 1 5 6 1 . 5 5 1 7 . 1 8 a : P 0 . 0

23、1 ， 与小M量组比较; b : P 0 . 0 5 , c : P 0 . 0 1 ， 与对照 组 比较 表3 甘油注射后肾 脏分离肾小管上皮细胞D N A损伤分级计数恤1 s ) 组别 无损伤轻度损伤 损伤分级 中度损伤重度损伤完全损伤 大剂量组 1 h d 3 h a d 6 h b d 1 2 h a d 2 4 h a d 4 8 h d 小剂量组 1 h d 3 h d 6 h d 1 2 h d 2 4 h d 4 8 h d 对照组 1h 3h 6 h 1 2 h 2 4 h 4 8 h 1 1 . 611 . 3 5 . 811.9 1 . 0士0 . 7 2 . 410 .

24、 9 5 . 2上1 . 6 1 1 . 211 . 9 1 1 . 2土2 . 4 8 . 2士1 . 3 2 . 2士 0 . 8 5 . 81 0 . 8 9 . 4士0 . 9 1 4 . 8土1 . 6 1 2 . 611 . 7 1 2 . 8士 3 . 6 4 . 6土2 . 2 9 . 6士3 . 2 1 3 . 0士2 . 0 1 1 . 8士1 . 3 1 1 . 4士1 . 3 1 7 . 6土2 . 3 3 1 . 6土2 . 0 2 5 . 8士2 . 6 1 9 . 2士2 . 3 1 0 . 8士1 . 3 3 . 2士0 . 8 5 . 6士1 . 7 1 0

25、. 6士1 . 9 6 . 4士2 . 5 3 . 211 . 5 1 . 410 . 5 1 9 . 811 . 6 1 7 . 8士1 . 3 1 0 . 2士1 . 3 1 2 . 611.9 1 5 . 0 12 . 5 1 9 . 211.5 1 7 . 2士1 . 3 1 0 . 4士1 . 7 4 . 6士1 . 3 7 . 811 . 8 1 2 . 011 . 6 1 9 . 611 . 8 7 . 2士1 . 8 9 . 8士1 . 5 1 4 . 2士1 . 3 1 2 . 611.1 1 2 . 0士1 . 4 7 . 211 . 3 5 . 4士1 . 1 1 1 .

26、 0士0 . 7 1 7 . 0士1 . 0 1 4 . 6士2 . 3 1 0 . 6士1 . 8 3 . 8士0 . 8 0 . 4土0 . 2 1 . 010 . 3 4 . 0士0 . 5 2 . 4士0 . 5 0 . 4士0 . 2 0. 2士0 . 2 4 1 . 6士1 . 5 4 2 . 411 . 7 4 3 . 0士2 . 0 4 5 . 411 . 1 4 4. 2士2 . 2 4 3 . 4 1 0 . 9 7 . 6士1 . 5 7 . 411 . 5 6 . 6士2 . 1 4 . 411 . 1 5 . 4士2 . 3 6 . 4士1 . 1 0 . 6士0 .

27、 5 0 . 21 0 . 4 0 . 410 . 5 0 . 210 . 4 0 . 4士 0 . 5 0. 2 土0. 4 0 . 21 0 . 4 0士0 010 0士0 010 0士0 010 0士0 0土0 0士0 010 0 10 a : P 0 . 0 5 , b : P 0 . 0 1 ， 与, 1 , 剂量组比较; c : P 0 . 0 5 , d : P 0 . 0 1 ， 表 4 与对照组比较 甘油注射后肾脏分离肾小管上皮细胞D N A损伤率( %) 甘油注射后时间( t / h ) 组别 1361 22 44 81 3 6 1 2 2 4 4 8 大剂量组 小剂量组

28、对照组 7 6 . 8 d 6 0 . 4 1 6 . 8 8 8 . 4 6 d M . 4 c 1 5. 2 9 8 . o l d 7 9 . 6 d 1 4. 0 9 5 . 2 1 d 7 4 . 8 d 9 . 2 8 9 . 6 8 d 7 0 . 0 d 1 1 . 6 7 7 . 6 d 5 1 . 6 1 3 . 2 a : P 0 . 0 5 , b : P 0 . 0 1 ， 与小剂量组比较; c : P 0 . 0 5 , d ; P 0 . 0 1与对照组比较 表5 甘油注射后肾脏分离肾小管上皮细胞D N A损伤彗星 平均尾长 ( 1 / p i n , x t s

29、 ) 比由 注M, 后时间( t,/ h ) 组别 1 3 6 1 2 2 4 4 8 表1甘 油 注 射 后3 组 大鼠 血B U N 变 化 情 况( C , / m m o U L L 一 , S t s ) 大 剂量 组 3 7 . 6 3 土 2 . 7 9 - d 6 4 . 4 5 土 3 . 1 1 6 d 9 2 . 8 7 士 4 . 9 2 6 d 7 5 . 8 7 1 3 . 3 1 6 d 4 2 . 4 3 土 5 . 1 1 a d 3 2 . 8 9 士 或 6 6 8 d 1 1 1p1 量组 3 1 . 7 8 士 4 . 2 3 d 4 1 . 刀士 5

30、 . 5 3 4 5 9 . 7 6 土 5 . 2 0 4 5 1 . 5 6 土 3 . 7 5 4 3 5 . 1 3 士 1 . 4 0 4 2 6 . 1 1 x 4 . 6 1 7 4 MM ? 1 1 6 1 t18 9 2) . 2 51 2 . 4 6 7 0 . 3 311 . 3 3 2 ) . 1 911 . 9 7 2 0刀 12 . 9 3 2 0 . 3 01 2 . 1 0 甘油注射后时间( t/ h ) 组别习 L M 1 3 6 1 2 2 4 4 8 a : P 0 . 0 5 , b : P 0 . 0 1 ， 与小剂量组比较; c : P 0 . 0

31、5 , d : P 0 . 0 1 ， 与对照组比较 大 剂影 目 ，J 例 量组 对贝 醚侣 6 . 泥 t 0 . 男 5 . 阴 t1 . 1 3 5 . 刀 士1 . 刃 6 . 份 11 . 肠 5 . 9 5 1 0 . 9 5 59 0士1 . 为 7 . 1 2 土 1 . 4 1 9 . 7 8 土 2 . 8 6 - 2 7 . 臾土 7 . 8 3 6 d 历. 差士 1 4 . 4 0 6 d 6 . 1 7 士 1 . 0 0 氏7 5 士 0 . 男1 4 . 田土 2 . 刀d 2 9 . 7 3 士 5 6 0 d 5刀 士 0 . 7 8 6 . 3 8土 0

32、 . 9 5 5 . 5 3士0 . 刀5 . 7 2士 0 . 9 2 3 讨论 a : P 0 . 0 5 , b : P 0 . 0 1 ， 与小4 11 量组比较; c : P 0 . 0 5 , d : P 0 . 0 1 ， 与对照组比较我们曾在前期实验中对有望成为创伤性 A R F预 1 5 9 0 第三军医大学学报第 2 8 卷 警诊断指标的尿脱落肾小管上皮细胞计数进行研究的 同 时， 发现 其D N A 损伤 严重 。 本实验 在此 基础上 进 一步发现A R F 早期由肾脏直接分离肾小管上皮细胞 即有明显 D N A损伤， 彗星细胞比例、 分级计数及尾长 等指标均对甘油注射

33、呈现出剂量和时间依赖性， 虽程 度较轻， 但变化趋势与细胞脱落及脱落细胞D N A损伤 相似 ， 与损伤程度有一定相关性。可见， A R F 发病 过程中D N A 损伤在细胞损伤中 发挥了 重要作用， 作为 不同的损伤形式或表现， 与细胞脱落也存在一定联系。 研究显示， A R F中肾小管上皮细胞损伤有多种启 动因素/ 途径， 目 前研究较多的有细胞能量供应改变、 氧化应激、 细胞内钙平衡的紊乱、 脂质代谢异常等， 构 成了复杂的网络， 甚至互为因果， 既是损伤的表现又是 进一步损伤发生的原因。创伤性 A R F或挤压综合征 经典的动物模型是肌肉注射高渗甘油， 主要机制是横 纹肌溶解释出肌红

34、蛋白对肾小管上皮细胞产生毒性作 用， 其中自 由 基发挥了 重要作用 “ 。 横纹肌溶解还可 释放其他毒性物质， 或刺激机体产生代谢产物、 细胞因 子及血管活性物质导致血流动力学改变、 全身炎症反 应等， 加之肌肉部位大量组织液渗出， 导致有效循环血 容量的不足， 使肾脏遭受缺血和/ 或再灌注及炎症反应 等打击， 造成能量代谢障碍及组织损伤的同时也促进 了自由基生成。而细胞能量代谢障碍和自由基造成的 细胞及细胞器膜脂质损伤除会使细胞钙隔离机制衰 竭， 形成钙超载， 通过钙离子激活一些生物酶， 诱导凋 亡外， 还能进一步干扰蛋白质流动、 缔合， 影响物质转 运、 能量转换、 信息识别以及膜结合酶

35、或受体功能发 挥， 又影响了自 由 基的产生、 信号转导、 C a t + 平衡状态、 线粒体功能及能量供应， 以及细胞其他生命活动。正 是这个复杂的网络最终导致了肾小管上皮细胞坏死、 凋亡及脱落等形式的丢失。D N A正常结构和功能的 维持直接、 间接地受到这些因素的影响， 如自由基可直 接攻击细胞 D N A分子中的碱基、 核糖、 磷酸二醋键， 造 成碱基与核糖氧化、 链断裂或与蛋白质交联等多种类 型的损伤; 能量供应障碍则可导致细胞骨架、 微管、 中 间 丝等结构紊乱， 细胞极性改变， N a - K - A T P 酶重新 分布及勃附 分子表达异常， 并进一步损害D N A正常结 构及

36、细胞在基底膜上的勃附， 导致了细胞D N A 损伤及 脱落 7 ,8 。 本实验结果显示， 在体的肾 小管上皮细胞D N A损 伤同发生 A R F 后脱落的肾小管上皮细胞一样， 与凋亡 的 发生 存在一定关联! 。当肾小管上皮细胞D N A损 伤后可直接影响复制、 转录和蛋白质合成。如损伤因 素持续存在， 可出现以下情况 9 ; 10D N A损伤不能修 复， 小管上皮细胞坏死脱落， 可导致寡细胞性间质纤维 化， 这可能是 A R F后肾功能受到长期影响的机制之 一; 部分修复或修复不完全， 细胞发生凋亡， 再生能 力下降; 如 D N A损伤后 p 5 3 发挥基因警卫作用， 使 D N

37、A 合成前期G ， 期延长， 修复受损D N A ， 如无法修复 则激活凋亡基因 转录， 细胞发生凋亡 10 未完全修 复之D N A诱导基因突变， 导致肿瘤发生。 因此， D N A损伤不仅是创伤后 A R F肾小管上皮 细胞损伤的表现形式， 也是造成进一步损伤的因素。 以上肾小管上皮细胞损伤因素并非创伤性 A R F 所特有的， 多种原因的A R F中均可见它们的参与， 这 个由损伤因素构成的网络类似于复杂的串联、 并联或 循环排列的多米诺骨牌。不同原因的A R F中， 多米诺 骨牌排列可能具有一定相似性， 最大的区别仅在于推 倒的第一张牌不同， 当骨牌开始大面积坍塌时， 无论扶 起中间哪

38、一张都不能阻止最后一张的倒下。因此 A R F 应强调早期救治的重要性。 参考文献: 1 C A R M I C H A E L P , C A R M I C H A E L A R . A c u t e r e n a l f a i l u r e i n t h e s u r - g i c a l s e t t i n g J . A N Z J S u r g , 2 0 0 3 ， 7 3 ( 3 ) : 1 4 4 一 1 5 3 . 2 D E V A R A J A N P . C e l l u l a r a n d m o l e c u l a r d e r

39、 a n g e m e n t s i n a c u t e t u b u l a r n e c r o s i s J .C u r r O p i n P e d i a t r , 2 0 0 5 ， 1 7 ( 2 ) : 1 9 3 一 1 9 9 . 3 梁培禾， 靳风烁， 岳明， 等. 急性肾功能衰竭中肾小管上皮细胞 脱落及D N A 损伤的意义 J . 第三军医大学学报， 2 0 0 2 , 2 4 ( 2 ) : 1 7 6一1 7 8 . 4 Z A G E R R A , B U R K H A R T K M , G M U R D J . P o s t i

40、s c h e m i c p r o x i m a l tu b u l a r r e s i s t a n c e t o o x i d a n t s t r e s s a n d C a t . i o n o p h o r e - i n d u c e d a t t a c k . I m p l i c a t i o n s f o r r e p e r f u s i o n i n j u r y J .L a b I n v e s t , 1 9 9 5 ， 7 2 ( 5 ) : 5 9 2一6 0 0 . 5 梁培禾， 靳风烁， 江 军， 等 大鼠急

41、性肾功能衰竭时肾小管上皮 细胞F a s , F a s L 表达的意义【 J . 创伤外科杂志， 2 0 0 3 , 5 ( 2 ) : 1 1 8 一1 2 1 . 6 G U G L I E L M I N O TTI J , G U I D E T B . A c u t e r e n a l f a i l u r e i n r h a b d o m y o l y - s i s J . M i n e r v a A n e s t e s io l , 1 9 9 9 , 6 5 ( 5 ) : 2 5 0 一 2 5 5 . 仁 7 WA L D F A , F I G

42、 U E R O A Y , O R I O L O A S , e t a l . M e m b r a n e r e p o l a r - i z a t i o n i s d e l a y e d i n p r o x i m a l t u b u l e s a f t e r i s c h e m ia - r e p e r f u s i o n ; p o s s i - b l e r o l e o f m i c r o t u b u l e - o r g a n i z i n g c e n t e r s J .A m J P h y s i o

43、 l R e n a l P h y s i o l , 2 0 0 3 ， 2 8 5 ( 2 ) : F 2 3 0一 F 2 4 0 . 8 郭啸华， 杨俊伟. 细胞的极性与缺血性急性肾功能衰竭L J .肾脏 病与透析肾 移 植杂志， 2 0 0 0 , 9 ( 2 ) : 1 6 7 一 1 7 0 . 9 李 瑛， 刘志红， 郭啸华， 等. 马兜铃酸I 致肾小管上皮细胞D N A 损伤的 实验研究【 J . 肾 脏病与 透析肾 移植杂志， 2 0 0 4 , 1 3 ( 1 ) : 7 一1 2 . 1 0 M E G Y E S I J , S A F I R S T E I N R L , P R I C E P M . I n d u c t i o n o f 夕1 W A F / C I P I / S D I I i n k i d n e y t u b u l e c e l l s a f f e c t s t h e c o u r s e o f c i s p l a - t i n - i n d u c e d a c u t e r e n a l f a i l u r e J . J C l i n I n v e s t , 1 9 9 8 ， 1 0 1 ( 4 ) : 7 7 7一7 9 2. ( 编辑染嘉)