大鼠脂肪细胞分化过程中脂代谢相关基因转录表达时序的研究.pdf

《大鼠脂肪细胞分化过程中脂代谢相关基因转录表达时序的研究.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《大鼠脂肪细胞分化过程中脂代谢相关基因转录表达时序的研究.pdf（5页珍藏版）》请在三一文库上搜索。

1、中图分类号:S8 6 5. 1 2:Q7 8 6 文献标识码:A 文章编号:1 6 7 3 - 4 6 9 6(2 0 0 6)0 4 - 0 3 0 6 - 0 5 大鼠脂肪细胞分化过程中脂代谢相关基因 转录表达时序的研究 卢建雄1 ,2, 刘翊中1, 臧荣鑫1, 陈粉粉2, 杨公社2 ( 1.西北民族大学 生命科学与工程学院, 甘肃 兰州 7 3 0 0 3 0; 2.西北农林科技大学 动物科技学院, 陕西 杨凌 7 1 2 1 0 0) 摘要:对大鼠附睾和肾周脂肪组织分离的前体脂肪细胞原代培养, 采用R T - P C R法分析脂代 谢重要酶和转录因子基因在不同分化阶段转录表达的时序变化

2、。结果显示, 在前体脂肪细胞阶段, 固醇调控元件结合蛋白( S R E B P)- 1 c、 碳水化合物反应元件结合蛋白(C h R E B P) 以及脂肪酸合成酶 ( F A S) 、 乙酰辅酶A羧化酶(A C C 1) 、 硬酯酰辅酶A去饱和酶(S C D) 和激素敏感脂酶(H S L) 基因 均不转录表达;H S LmR NA在分化初期表达, 中期表达水平最高, 分化末期降低; S C D mR NA在 分化中期表达, 末期表达水平显著提高; 分化初期F A SmR NA水平明显高于中期和末期;A C C 1 mR NA仅在末期表达; 分化初期S R E B P - 1 cmR NA水平

3、较高, 中期和末期显著下降;C h R E B PmR - NA表达水平在分化末期稍高于中期, 但差异不显著。表明,S R E B P - 1 cmR NA的表达与脂肪细胞 早期分化调控有关, 分化成熟脂肪细胞的C h R E B PmR NA表达可能与生脂基因的转录激活有关。 关键词:脂肪细胞; 分化; 脂代谢; 转录表达 S t u d i e so ne x p r e s s i o no r d e r so f l i p i dm e t a b o l i s m - r e l a t e dg e n e s d u r i n gd i f f e r e n t i a

4、 t i o no f r a t a d i p o c y t e s L UJ i a n - x i o n g 1,2, L I U Y i - z h o n g 1, Z ANGR o n g - x i n 1, CHE NF e n - f e n 2, YANGG o n g - s h e 2 (1.C o l l e g e o fL i f eS c i e n c ea n dE n g i n e e r i n g,N o r t h w e s tU n i v e r s i t yf o rN a t i o n a l i t i e s,L a n z

5、 h o u7 3 0 0 3 0,C h i n a;2.C o l l e g e o fA n i m a lS c i e n c ea n dT e c h n o l o g y,N o r t h w e s t S c i - T e c hU n i v e r s i t yo fA g r i c u l t u r ea n dF o r e s t r y, Y a n g l i n g7 1 2 1 0 0,C h i n a) A b s t r a c t:P r e a d i p o c y t e s i s o l a t e df r o ma d

6、i p o s e t i s s u eo fm a l eS Dr a t sw e r ec u l t u r e da n dd i v i d e di n t o4 s t a g e so fd i f f e r e n t i a t i o ni n c l u d i n gp r e a d i p o c y t e s,e a r l y,m i d d l ea n dt e r m i n a ld i f f e r e n t i a t i n ga d i p o c y t e s t h r o u g ht h eo i l r e dOs t

7、a i n i n g . O r d e r c h a n g e so f t r a n s c r i p t i o n a l e x p r e s s i o no f g e n e s e n c o d i n g l i p i dm e t a b o - l i c e n z y m e s a n d t r a n s c r i p t i o n f a c t o r s i nv a r i o u s s t a g e so f d i f f e r e n t i a t i o nw e r e e x a m i n e du s i n

8、 gR T - P C R. T h e mR NA so f s t e r o l r e g u l a t o r ye l e m e n tb i n d i n gp r o t e i n(S R E B P)- 1 c,c a r b o h y d r a t er e s p o n s i v ee l e m e n tb i n - d i n gp r o t e i n(C h R E B P) ,a c e t y l - C o Ac a r b o x y l a s e(A C C 1) ,f a t t ya c i ds y n t h a s e(

9、F A S) ,s t e a r o y l - C o Ad e - s a t u r a s e(S C D) ,a n dh o r m o n es e n s i t i v e l i p a s e(H S L)w e r en o t e x p r e s s e d i nr a tp r e a d i p o c y t e s .H S LmR NA b e g a nt oe x p r e s s i ne a r l ya n dr e a c ht om a x i m a l l e v e l i nm i d d l ed i f f e r e n

10、 t i a t i n ga d i p o c y t e s . S C DmR NAl e v e l w a ss i g n i f i c a n t l yh i g h e r i nt h em i d d l ed i f f e r e n t i a t i n ga d i p o c y t e s t h a nt h a t i nt e r m i n a l d i f f e r e n t i a t i n ga d i p o - c y t e s . F A SmR NAl e v e lw a s l o w e r i nm i d d l

11、 e a n d t e r m i n a l t h a n t h a t i ne a r l yd i f f e r e n t i a t i n ga d i p o c y t e s,a n d A C C 1mR NAw a se x p r e s s e do n l y i nt e r m i n a l s t a g e . T h er e s u l t ss u g g e s t e dt h a t t h ee x p r e s s i o no fS R E B P - 1 cg e n ec o u l db er e l a t e d w

12、 i t ht h ee a r l yd i f f e r e n t i a t i o nr e g u l a t i o no fa d i p o c y t e,a n d mR NAl e v e l so f C h R E B Pc o i n c i d ew i t ht h ec h a n g e s i nt h ee x p r e s s i o no f l i p o g e n i cg e n e i nl a t ed i f f e r e n t i a t e da d i p o c y t e s . K e yw o r d s:a d

13、 i p o c y t e;d i f f e r e n t i a t i o n;l i p i dm e t a b o l i s m;t r a n s c r i p t i o n 收稿日期:2 0 0 6 - 0 1 - 2 4;修回日期:2 0 0 6 - 0 3 - 3 0 作者简介:卢建雄(1 9 6 5) , 男, 甘肃榆中人, 副教授,博士, 主要从事生物技术研究,E - m a i l: l u 2 0 0 3 j x y a h o o . c o m. c n 中国兽医科学 2 0 0 6, 3 6(0 4) :3 0 6 - 3 1 0 V e t e r

14、 i n a r yS c i e n c e i nC h i n a 脂肪细胞分化是不同阶段标志基因时序表达的 结果。脂肪细胞不仅是贮能细胞, 也是内分泌细胞, 其分化失常可引起脂肪堆积过多, 导致肥胖和胰岛 素抵抗, 并可能是动脉粥样硬化、 2型糖尿病等多种 肥胖相关疾病的共同危险因素 1。转录因子固醇调 节元件结合蛋白( S R E B P)- 1 c, 脂代谢相关酶脂肪酸 合成酶( F A S) 、 乙酰C o A羧化酶(A C C 1) 、 硬脂酰 辅酶A去饱和酶( S C D) 、 激素敏感脂酶(H S L) 等对 脂肪细胞分化和脂质代谢平衡发挥着重要作用 2。 此外, 碳水化合

15、物反应元件结合蛋白(C h R E B P) 是 近年在肝发现的与糖酵解和生脂调控有关的重要转 录因子 3, 在脂肪细胞分化过程中的表达及可能的 调控作用尚不清楚。因此, 本试验以原代培养大鼠 前体脂肪细胞为对象, 结合油红O染色计数法, 研 究编码上述蛋白的基因在不同分化阶段转录水平的 变化, 为进一步探索脂肪细胞分化机理提供理论 依据。 1 材料与方法 1. 1 试验动物与试剂 2 0日龄二级S D(S p r a g u e - D a w l e y) 雄性大鼠购 自第四军医大学实验动物中心;DMEM培养基( 低 糖) 、型胶原酶购自G i b c o公司;T r i z o l总R

16、NA提 取试剂盒、 T a q D NA聚合酶、 反转录试剂盒、D E P C 均购自F e r m e n t a s公司; 胎牛血清购自兰州民海生 物公司。 1. 2 原代脂肪细胞的培养和处理 断颈处死S D大鼠, 无菌条件下取附睾和肾周 白色脂肪组织, 剪成1mm 3小块, 加型胶原酶消化 液( 9. 5g /LDMEM+ 2 0g/L牛血清白蛋白, 临用 时加入型胶原酶 1g /L) 3 7消化6 07 0m i n, 然 后过筛, 10 0 0 r/m i n离心1 0m i n, 弃上清液, 加红细 胞裂解液室温静置后离心, 用无血清培养液冲洗, 以 51 0 4/ c m 2密度

17、接种于 6孔培养板, 每孔分别加 25 0 0L培养液(9. 5g/LDMEM,1 0 0m L/L胎牛 血 清, 青 霉 素 和 链 霉 素 各1 0 0I U/m L,2. 2g/L N a HC O3, 三蒸水稀释) , 置3 7、5 0m L/LC O2培 养箱培养, 1d后换液, 以后每2d换1次培养液。 1. 3 脂肪细胞的染色 培养的细胞用P B S冲洗,1 0 0m L/L甲醛固定 1 0m i n。P B S漂洗后, 用油红O工作液染色8m i n, 自来水冲洗, 6 0 0m L/L异丙醇分色1 02 0s, 自来 水冲洗, 苏木精染色1m i n。冲洗后, 2 0 0倍光

18、学显 微镜下对染色细胞计数, 每孔随机计数3个视野, 区 分不同分化阶段。 1. 4 脂肪细胞R N A的提取 吸出6孔培养板中的培养 液, 每 孔 加1m L T r i z o l溶液提取细胞总R NA。琼脂糖凝胶电泳检 测R NA的完整性, 并用紫外分光光度计测定其 浓度。 1. 5 R T - P C R分析 取2. 5g总R NA, 用反转录试剂盒合成第一 链c D NA。2Lc D NA产物在P T C-2 0 0梯度热循 环仪中扩增, 反应体系包括- a c t i n( 内对照) 和特异 基因的引物对。反应条件为: 9 5 1 0m i n,5 56 0 4 5s; 然后9 4

19、 1m i n,5 56 0 4 5s,7 2 1 m i n,2 62 8个循环( 见表1) 。反应采用“ 热启动” 方式, 即预变性后加入 T a q D NA聚合酶。每对特 异基因引物分别与- a c t i n引物序列比对, 二者无同 源性。分别在单独加特异基因引物、 - a c t i n引物及 二者 均 加 的 情 况 下, 同 管 扩 增, 进 行 竞 争 对 照 试验 4。 表1 有关基因P C R反应的引物及参数 T a b l e1 P r i m e r s s e q u e n c e sa n dp a r a m e t e r s f o rP C Ra m p

20、 l i f i c a t i o no f t h er e l a t e dg e n e s 基因G e n e s引物P r i m e r s产物长度/b pL e n g t h退火温度/Tm循环次数T i m e s - a c t i n S:5 - A C T G C T G C AT C C T C T T C C T C - 3 A:5 - C T C C T G C T T G C T GAT C C A C AT C - 3 3 9 95 5. 76 2. 42 62 8 C h R E B P S:5 - G C AT C C T C AT C C GA C C

21、 G T TA - 3 A:5 - C C T C T G T GA C T G T C C T T G T G - 3 2 2 26 0. 82 8 A C C 1 S:5 - G T T G C A C ATAAG GAT T T C AG - 3 A:5 - C G C AT TA C C AT G C T C C G C A C - 3 5 0 45 5. 72 8 S R E B P - 1 c S:5 - C G C TA C C G T T C AT C TAT C AAT G - 3 A:5 - A C T T C G C AG G G T C AG G T T C T - 3

22、 1 6 85 5. 72 6 F A S S:5 - C C T TAG TA C T G C G T G G T C G TAT - 3 A:5 - C AGAG G G T G C T T G T TAGAAAGAT - 3 3 0 16 0. 82 6 H S L S:5 - GAT T C G C C ATAGA C G C AGAG - 3 A:5 - G C T T GA C AG C G C AG C AG TAG - 3 5 7 96 2. 42 6 S C D S:5 - T G T C C C T G TAG C G C AAT C C A - 3 A:5 - AG GA

23、AAG C GATAT G G C A C C C - 3 4 4 75 7. 82 7 S: 上游引物;A: 下游引物 S:s e n s ep r i m e r;A:a n t i s e n s ep r i m e r 703 第4期 卢建雄等: 大鼠脂肪细胞分化过程中脂代谢相关基因转录表达时序的研究 2. 5LP C R扩增产物在 1 0g /L琼脂糖凝胶上 电泳。电泳分离的D NA片段在W e a l t e c凝胶成像 系统拍照, 并用D o p h i n - 1 D凝胶软件分析。结果用 特异基因与- a c t i n电泳带相对吸光度的比值表示。 1. 6 统计分析 采用S

24、 P S S1 1. 5统计软件对试验数据进行单因 子方差分析。试验结果以平均值标准差表示。 2 结果 2. 1 前体脂肪细胞的分化 对分离、 培养的脂肪细胞进行了形态学观察。 结果, 前体脂肪细胞呈梭状, 无脂滴, 类似于成纤维 细胞; 随着培养时间延长, 细胞开始出现多个小脂 滴, 并逐渐聚集为数目较少的大脂滴。用油红O染 色进行形态学鉴定, 分化的细胞脂滴着色, 呈鲜红 色。通 过 油 红O染 色 计 数, 将 未 充 脂 和 分 别 有 2 0%、5 0%及9 5%充脂的细胞分为前体脂肪细胞及 分化初期、 中期、 末期脂肪细胞共4个阶段( 见图 1) 。本试验中此4个阶段分别为培养1、

25、3、5和8d 的细胞。 2. 2 脂代谢基因m R N A表达水平的变化 由表2可见, 所测定的6种脂代谢相关基因在 前体脂肪细胞阶段均不转录表达; 分化的脂肪细胞 表达S R E B P - 1 cmR NA, 并以分化初期为最高, 随着 分化的进行表达水平显著下降 (P0. 0 5) 。在分化初期 没有检测到S C D mR NA和C h R E B P mR NA的表 达产物, 但在分化末期S C D mR NA表达水平显著 高于分化中期, 而C h R E B P mR NA表达水平在分 化末期稍高于中期, 但二者间无显著性差异。在细 胞分化的初期和中期没有检测到A C C 1mR N

26、A表 达, 但分化末期有较高的表达水平。脂解酶H S L 基因在细胞分化初期表达, 分化中期和末期转录表 达水平显著提高(P0. 0 5) , 但末期水平低于中期 ( P0. 0 5) 。 图1 不同分化阶段的脂肪细胞油红O染色结果 2 0 0 F i g . 1 O i l r e dOs t a i n i n gr e s u l t so fv a r i o u sd i f f e r e n t i a t i n gs t a g e so f r a t a d i p o c y t e s 1: 培养第1d, 前体脂肪细胞;2: 培养第3d, 分化初期脂肪细胞;3: 培养

27、第5d, 分化中期脂肪细胞;4: 培养第8d, 分化末期脂肪细胞 1:C u l t u r e do nd a y1,p r e a d i p o c y t e s;2:C u l t u r e do nd a y3,a d i p o c y t e s i ne a r l yd i f f e r e n t i a t i o ns t a g e;3:C u l t u r e do nd a y5,a d i p o c y t e s i nm i d d l e d i f f e r e n t i a t i o ns t a g e;4:C u l t u r e

28、 do nd a y8,d i f f e r e n t i a t e da d i p o c y t e s 表2 不同分化阶段原代大鼠脂肪细胞脂代谢相关基因m R N A的表达水平 T a b l e2 E x p r e s s i o nl e v e l so f l i p i dm e t a b o l i c - r e l a t e dg e n e sm R N A s i nv a r i o u sd i f f e r e n t i a t i n gs t a g e so fp r i m a r yr a t a d i p o c y t e s

29、基因G e n e s前体P r e a d i p o c y t e分化初期E a r l ys t a g e分化中期M i d d l es t a g e分化末期T e r m i n a l s t a g e S R E B P - 1 c01. 1 10. 1 2 1 a 0. 9 3 00. 0 8 6 b 0. 4 6 00. 0 5 5 c C h R E B P000. 4 0 00. 0 3 20. 4 2 80. 0 2 4 F A S01. 1 50. 1 2 8 a 0. 8 7 20. 0 6 3 b 0. 8 4 20. 0 4 8 b H S L00. 7

30、 50. 0 5 5 a 0. 9 9 00. 0 8 5 b 0. 8 4 20. 0 5 3 c S C D000. 6 3 00. 0 5 1 a 0. 8 8 80. 0 7 3 b A C C 10001. 0 9 00. 0 7 3 同一行内标有不同字母的平均数之间差异显著(P0. 0 5) M e a n sw i t hd i f f e r e n t l e t t e r s i nt h es a m er o wa r es i g n i f i c a n t l yd i f f e r e n t(P0. 0 5) 3 讨论 3. 1 S R E B P -

31、1 c又 称 脂 肪 细 胞 定 向 分 化 因 子1 (A D D 1) , 是脂肪细胞分化过程中一种重要的核转 录因子, 与P P AR - 和C/E B P S共同调控脂肪细胞 的分化; 同时, S R E B P - 1 c还直接调控脂肪酸合成及 葡萄糖代谢相关酶基因的转录表达,A C C 1、F A S、 S C D基因等是其作用的靶基因 2。对3 T 3 - L 1脂肪 803 中国兽医科学第3 6卷 细胞系 5和原代培养猪 S/V细胞 6的研究表明, S R E B P - 1 c基因在分化初期就有表达且表达量相对 较高。与此一致, 本试验在未分化的前体脂肪细胞 中没有检测到S

32、R E B P - 1 cmR NA表达, 而分化初期 脂肪细胞S R E B P - 1 cmR NA的表达水平最高, 以后 随着分化的进行, 其表达水平显著降低, 再次说明 S R E B P - 1 cmR NA的表达与脂肪细胞分化的调控有 关, 但随着脂肪细胞的成熟, 它在脂肪生成及生脂基 因转录调控中所起的作用可能不如在肝细胞中那样 重要。 3. 2 C h R E B P是在肝发现的调控碳水化合物代谢 的重要转录因子, 它通过与肝细胞生脂和糖酵解相 关酶和蛋白( S C D、F A S、A C C 1、S 1 4) 基因及肝丙酮 酸激酶(L P K)D NA序列上的碳水化合物反应元

33、件 (C h R E) 结合, 调控这些基因转录表达 3,7。但它在 脂肪细胞中表达的时期及与各种脂肪生成酶表达的 关系未见报道。由表2可见, 在体外培养条件下, 前 体 脂 肪 细 胞 和 分 化 初 期 的 脂 肪 细 胞 均 不 表 达 C h R E B PmR NA, 而在分化中期和末期有较高表达 丰度。这一结果提示,C h R E B P基因的表达与脂肪 细胞的前期分化无关, 可能在分化后期调控生脂酶 基因转录表达。 3. 3 S C D基因主要在脂肪组织中表达, 表达产物 参与细胞的新陈代谢和前体脂肪细胞的分化, 也是 合成不饱和脂肪酸的限速酶。S C D基因的表达及 其产物的活

34、性决定脂肪细胞单不饱和脂肪酸的合成 及细胞膜磷脂和甘油三酯的组成, 不仅与人类相关 疾病如肥胖症、 糖尿病及高血压等密切相关 8, 也是 改善动物产品脂肪酸组成的候选基因 9。S C D是 3 T 3 - L 1脂肪细胞末期分化的标志, 其表达量随分化 的进行呈上升趋势 8。本研究在原代培养的大鼠脂 肪细胞中, S C DmR NA在分化中期脂肪细胞中就已 表达, 且随分化的进行, 表达水平显著提高。 3. 4 利用葡萄糖等底物合成脂肪酸是脂肪生成的 重要途径, 此过程在以碳水化合物为主要能量来源 的人和动物尤为重要。在脂肪生成过程中,F A S和 A C C 1是脂肪酸生物合成的2种关键酶。

35、A C C 1催 化乙酰C o A羧化为脂肪酸合成必需的底物丙二酰 C o A,F A S是脂肪酸合成的限速酶, 催化乙酰C o A 和丙二酰C o A合成棕榈酸。对多种哺乳动物的研 究已经证明, F A S基因的表达主要在转录水平被调 控, 动物体脂水平与F A S基因的表达呈正相关 1 0。 本研究表明, 前体脂肪细胞不表达F A SmR NA, 而 分化的脂肪细胞有较高表达, 符合脂肪细胞利用非 脂类物质合成脂肪的一般性结论。但与在3 T 3 - L 1 脂肪细胞系 5和猪S /V细胞 6的研究中 F A S随着 分化的进行表达量呈上升趋势的研究结果有所不同 的是, 虽然在原代大鼠脂肪细

36、胞分化中期和末期 F A SmR NA水平没有明显差异, 但分化初期明显 更高。这可能与脂肪细胞的性质及种属有关。 3. 5 许多研究表明, 在肝生脂酶基因表达调控中 S R E B P - 1 c起关键作用, 是脂质代谢平衡和胰岛素 作用的主要介导者。然而, 最近在脂肪组织的研究 中取得了不同的结果。B e r t i l e等 1 1发现, 禁食可降 低大鼠腹膜脂肪组织F A SmR NA水平, 但重新饲 喂后 则 表 达 水 平 恢 复 或 更 加 提 高, 而S R E B P - 1 c mR NA表达水平则没有变化;P a l m e r等 1 2也发现, 虽然人为提高S R E

37、B P - 1 c基因表达水平能充分诱导 F A S基因启动子在3 T 3 - L 1细胞中表达, 但在大鼠 附睾 脂 肪 垫 新 分 离 的 脂 肪 细 胞, 胰 岛 素 不 增 加 S R E B P - 1 c基因的转录表达; 此外, 胰岛素以剂量依 赖方式提高猪脂肪细胞葡萄糖结合率和F A S活性, 生长激素(GH) 抑制胰岛素的这种促进作用, 但胰 岛素和/或GH对S R E B P - 1 c基因的转录水平没有 影响 1 3。这些资料提示, 脂肪组织生脂基因的表达 与S R E B P - 1 cmR NA的表达无关 1 11 3。由表2可 知, 虽然脂肪细胞分化初期S R E B

38、 P - 1 cmR NA和 F A SmR NA均高丰度表达, 但随着细胞分化的进 行, 分化中期和末期细胞中S R E B P - 1 cmR NA的表 达水平则下降, 而F A S和S C D基因的表达量稳定 或提高, 与C h R E B P mR NA表达的变化平行。另 外,A C C 1也在末期转录表达。因此, 结合已有的文 献资料和基因序列结构 2,3,7, 笔者认为, 至少在已 分化的成熟脂肪细胞中, 生脂基因F A S、S C D和 A C C 1基因的转录表达与S R E B P - 1 cmR NA的表达 水平不一致, 而与C h R E B P mR NA的表达水平一

39、致, 它们的转录激活可能需要C h R E B P mR NA的 表达或需要S R E B P - 1 cmR NA和C h R E B PmR NA 的共同表达。 3. 6 H S L被认为是脂肪组织中甘油三酯水解的限 速酶,H S L基因的过表达可抑制甘油三酯在脂肪细 胞中的堆积 1 4。在人类皮下脂肪组织, H S L蛋白 水平与脂解活力呈强线性关系 1 5。H S L是3 T 3 - L 1 脂肪细胞末期分化的标志基因, 对于原代培养的猪 S/V细胞, 在分化的第5dH S LmR NA浓度迅速增 加, 但在成熟脂肪细胞的表达量又有所下降 6。本 试验对原代大鼠脂肪细胞的分析表明, 未

40、分化的前 体脂肪细胞不表达H S LmR NA, 在分化初期表达, 分化中期表达水平最高, 分化末期降低, 与M c N e e l 等 6的研究结果一致。 903 第4期 卢建雄等: 大鼠脂肪细胞分化过程中脂代谢相关基因转录表达时序的研究 参考文献( R e f e r e n c e s) 1 K o p e l m a nP G.O b e s i t ya sa m e d i c a lp r o b l e mJ.N a t u r e, 2 0 0 0,4 0 4:6 3 5 - 6 4 3. 2 E b e r l D,H e g a r t yB,B o s s a r dP

41、,e ta l. S R E B Pt r a n s c r i p t i o n f a c t o r s:m a s t e r r e g u l a t o r so f l i p i dh o m e o s t a s i sJ.B i o c h e m i c, 2 0 0 4,8 6:8 3 9 - 8 4 8. 3 I s h i iS,I I z u k aK,B o n n i eC,e t a l. C a r b o h y d r a t er e s p o n s ee l e - m e n tb i n d i n gp r o t e i nd

42、i r e c t l yp r o m o t e sl i p o g e n i ce n z y m eg e n e t r a n s c r i p t i o nJ.PNA S,2 0 0 4,1 0 1:1 5 5 9 7 - 1 5 6 0 2. 4 卢建雄, 臧荣鑫, 潘和平, 等.半定量R T - P C R法检测原代培养 脂肪细胞生脂基因mRNA转录表达J.中兽医医药杂志, 2 0 0 5,2 4(6) :1 6 - 1 8. L uJX,Z a n gRX,P a nHP,e t a l. S e m i - q u a n t i t a t i v eR T -

43、 P C R m e t h o dt o m e a s u r emRNAe x p r e s s i o nf o rl i p o g e n i cg e n e si n p r i m a r yc u l t u r ea d i p o c y t e sJ.J o u r n a l o fT r a d i t i o n a lC h i n e s e V e t e r i n a r yM e d i c i n e,2 0 0 5,2 4(6) :1 6 - 1 8.(i nC h i n e s e) 5 R i b a u xPG,I y n e d j

44、i a nPB. A n a l y s i so f t h er o l eo fp r o t e i nk i - n a s eB(c AKT)i ni n s u l i n - d e p e n d e n t i n d u c t i o no fg l u c o k i n a s e a n ds t e r o lr e g u l a t o r ye l e m e n t - b i n d i n gp r o t e i n1(S R E B P 1) mRNA s i nh e p a t o c y t e sJ.B i o c h e mJ,2 0

45、0 3,3 7 6:6 9 7 - 7 0 5. 6 M c N e e lRL,D i n gST,S m i t hEO,e t a l. E x p r e s s i o no fp o r - c i n ea d i p o c y t e t r a n s c r i p t sd u r i n gd i f f e r e n t i a t i o ni nv i t r oa n di n v i v oJ.C o m p a r a t i v eB i o c h e m i s t r ya n dP h y s i o l o g yP a r tB, 2 0

46、0 0,1 2 6:2 9 1 - 3 0 2. 7 M aL,T s a t s o sNG,T o w l eHC. D i r e c t r o l eo fC h R E B PM l x i n r e g u l a t i n gh e p a t i cg l u c o s e - r e s p o n s i v eg e n e sJ.JB i o lC h e m, 2 0 0 5,2 8 0:1 2 0 1 9 - 1 2 0 2 7. 8 C o h e nP,F r i e d m a nJM.L e p t i na n dt h ec o n t r o

47、lo fm e t a b o - l i s m:r o l e f o r s t e a r o y l - C o Ad e s a t u r a s e - 1(S C D - 1) J.JN u t r, 2 0 0 4,1 3 4(S) :2 4 5 5 - 2 4 6 3. 9 D a n i e lZ,R i c h a r d sSE,S a l t e rA M,e t a l. I n s u l i na n dd e x a m - e t h a s o n er e g u l a t es t e a r o y l - C o Ad e s a t u r

48、 a s emRNAl e v e l sa n d f a t t ya c i ds y n t h e s i s i no v i n e a d i p o s e t i s s u e e x p l a n t sJ.JA n i m S c i,2 0 0 4,8 2:2 3 1 - 2 4 1. 1 0 S e m e n k o v i c hCF. R e g u l a t i o no f f a t t ya c i ds y n t h a s eJ.P r o - g r e s s i nL i p i dR e s e a r c h,1 9 9 7,3

49、6:4 3 - 5 3. 1 1 B e r t i l eF,R a c l o tT. mRNAl e v e l so fS R E B P - 1 cd on o tc o i n - c i d ew i t h t h e c h a n g e s i na d i p o s e l i p o g e n i c g e n e e x p r e s s i o nJ. B i o c h e mB i o p h y sR e sC o mm u n,2 0 0 4,3 2 5:8 2 7 - 8 3 4. 1 2 P a l m e rD G,R u t t e rG A,J e r e m y M T. I n s u l i n - s t i m u l a t e d f a t t ya c i ds y n t h a s eg e n