微囊化神经组织联合脱细胞神经移植修复犬坐骨神经缺损.pdf

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1、第3 0 卷第2 4 期第三军医大学学报V 0 1 3 0 ，N o 2 4 2 0 0 8 年1 2 月 A C T AA C A D E M I A EM E D I C l N A EM I L I T A R I ST E R T I A ED e c 2 0 0 82 31 1 文章编号：1 0 0 0 删( 2 0 0 8 ) 2 4 2 3 1 1 0 5 微囊化神经组织联合脱细胞神经移植修复犬坐骨神经缺损 王 雷，蒋电明( 重庆医科大学附属第一医院骨科，重庆4 0 0 0 1 6 ) 乏论著忍 摘要：目的了解微囊化神经组织与脱细胞神经联合移植桥接犬坐骨神经3 0m m 缺损后腓

2、肠肌的变化。方法 将健康成年杂种犬1 2 只随机分为A 、B 、c 、D 4 组( 凡= 3 ) ：A 组截取双侧坐骨神经行化学萃取制备脱细胞神经；B 、c 组使用 脱细胞神经移植修复犬的坐骨神经3 0 唧缺损，B 组同时辅以微囊化神经组织移植；D 组行自体神经移植修复缺损。术 后定期观察术侧肢体运动功能恢复情况6 个月时检测神经移植段运动传导速度，并取术侧及健侧腓肠肌行琥珀酸脱氢酶 ( s u c c i I l i cd e h y d m g e n 鹊e ，S D H ) 、突触素和运动终板染色，以及取距远端吻合口以远lc m 的坐骨神经神经行M 鹊s o n 、固蓝 及N F 2 0

3、 0 染色。结果B 、C 、D 组实验动物均纳入实验动物数量分析、无脱失。图像分析表明B 组腓肠肌S D H 光密度、肌 纤维截面积、突触素及运动终板光密度及面积等与c 组有明显统计学差别。而与D 组无明显统计学差别，运动功能恢复、 电生理及坐骨神经形态学检测均与腓肠肌检测结果相符合。结论微囊化神经组织细胞与脱细胞神经联合移植修复缺 损神经后，重新支配靶器官，使腓肠肌萎缩明显减弱，效果优于单纯脱细胞神经移植，有望代替自体神经移植。 关键词：微囊；脱细胞神经；移植；腓肠肌 中图法分类号：R 3 3 2 ；R 6 2 2 3 ；R 6 5 1 3 0 5 文献标识码：A T r a n s p l

4、 a n t a t i o n 、订t hm i c r o e n c a p s u l a t e dp e r i p h e r mn e r V et i s s u ea n da c e U u l a rn e r V e 0 ns c i a t i cn e r V ed e f b c t si nd o g s W A N Gk i ，J I A N GD i a n m i n g ( D e p 咀眦n to f0 r t h 叩d i c 8 ，- 1 1 l eF i 塔tA 伍l i a t e dH o s p i t a lo fC h o n g q

5、 i I I gM e d i c a lU 面v e r s 畸，C h o n g q i n g 4 0 0 0 1 6 ，C h i 蛆) A b s t r a c t ：O b j e C t i V e 7 r oi n v e s t i g a t et h ea c t i v i t ) ，0 fg 鹪t r o c n e m i u sm u s c l ea f t e ra c e l l u l a rn e r v et r a n s p l a n t a t i o n 而t hm i c r o e n c a p s u l a t e dp e r

6、 i p h e r a ln e et i s s u et or e p a i rs c i a t i cn e r v eg a pi nd o g s M e t h o d sT h e l v ed o g s w e r es e l e c t e da n dd i v i d e dm n d o m l yi n t of o u rg r o u p sw i t ht h r e ei ne a c h B o t hs c i a t i cn e n r e so ft h ed o g si ng m u p Aw e r ec u ta n dc h e

7、m i c a U ye x 的c t e dt om a k ea c e l l u l a rn e n r e s A c e l l u l a rn e n ，e sw e r et m n s p l a n t e di n t 0t h ed o g s o fg r o u p sBa n dCt ob r i d g e3 0m ms c i a t i cn e r 、，eg a p s ，肌da d d i t i o n a l l ym i c r o e n c a p s u l a t e dp e r i p h e r a l1 1 e r v ew e

8、 r e a d d e di ng r o u pB A u t o g r a f tw a su s e df o rr e p a i r i n gt h ed e f e c t si ng m u pD T h em o t o rf u n c t i o no fo p e I I a t e dl i l b s w e r eo b s e r v e dr e g u l a d ya f t e ro p e r a t i o n s i xm o n t h sa f t e ro p e r a t i o n ，m o t o rc o n d u c t i

9、 o nV e l o c i t yo ft h es p e c i m e n s o fs c i a t i c 孕曲i n gI 圮r v es e g m e n tw e r eo b s e r v e d ，肌dt h eg a s t r o c n e m i u sm u s c l eo fb o t hs i d e sw e r eo b t a i n e da n d p e r f o 珊e ds u c c i n i cd e h y d r o g e n a s e ( S D H ) ，s y n a p t o p h y s i n ( S

10、Y P ) a n dm o t o re n dp l a t eh i s t o c h e m i c a Js t a i n i n g ， a n ds c i a t i cn e elc mf 壬o m d i s t a le n ds t o I I l aw e 而o b t a i n e da n du n d e r w e n tM 鹊s o n Ia l x o lf b tb l u ea n dN F 2 0 0 乱a i n i n g R e S U l t sA l lt I l ed o g si ng r o u p sB ，Ca n dDw e

11、 r ei n V o l v e di nt l l er e s u l t sa n a l y s i sw i t l l o u t1 0 8 s I m a g e 锄a l y s i si n d i c a t e dt h eo p t i c a ld e n s i t ya n dt h ec r o s ss e c t i o na r e ao fg a s t m c n e m i u sm u s c l e ，a r e aa n do p t i c a ld e n s i t yo fs y n a p t o p h y s i n ，a r

12、e aa n do p t i e a ld e n s i t yo fm o t o re n dp l a t ei ng m u pBs h o w e ds t a t i s t i c a l l ys i g n i f i c a n td i f e r e n c ec o m p a r e dw i t ht h o s ei ng r o u pC ，b u tn os i g n i 6 c a n td i f k r e n c ew i t I It h o s ei ng r o u pD T h er e s u l t so fm o t o r f

13、u n c t i o nr e c o v e r yo fo p e r a t e d 1 i m b ，e l e c t r o p h y s i o l o g i c a le 】【a m i n a t i o na n dm o 叩h o l o g i co b s e r v a t i o n so f s c i a t i c n e n r ew e r ea Uc o n s i s t e n tw i t l It h ed e t e c t i o n so fg 船t r o c n e m i u sm u s c l e C 0 n c l u

14、s i o nT h eg a s t m c n e m i u sm u s c l e m a yb ea g a i ni n n e r v e db yn e r v e ，a n dt h em u s c l ea 咖p h yi ss i g n i f i c a n ya u e V i a t e dm e ra c e l l u l a rn e r v et r a n s p l a n t a t i o nw i t hm i c r o e n c 印s u l a t e dp e 而p h e r a ln e r v et i s s u ef o

15、rr e p a i r i n gs c i a t i cn e n r eg 印T h er e g e n e m t i o no f n e n r ew 鹤b e t t e r 曲e rt h ec o m 姊n e dt r a n s p l a J l t a t i o nt h 锄o T l l ya c e l l u l a rn e n ，et r 肌s p l a n t a t i o n ，s ot l l ec o T I l b i n a t i o n o fa c e U u l a rn e ea n dr n i c r o e n c 印s

16、 u l a t e dp e r i p h e m ln e n ，et i s s u em a yb eau s e “s u b s t i t u t eo fa u t o 铲出f o rn e n r e r e p a i r K e yw o r d S ：m i c r o e n c a p s u l a t e ；a c e U u l a rn e r v e ；t 珊s p l a n t a t i o n ；g 船t I ，o c n e m i u s 作者简介：王雷男，新疆石河子市人，博士研究生主要从事周围神经损伤方面的研究。电话：( 0 2 3 ) 8

17、 9 0 I l O l 7 ，E m 且i l ：”l e i - 7 8 y a h 0 0 唧皿 通信作者：蒋电明，电话：( 0 2 3 ) 8 1 9 0 1 1 0 1 8 ，E m a i l ：j d n l 5 7 1 0 2 6 “P 1 6 3 咖 收稿日期：2 8 0 3 0 l ；修回日期：2 0 0 8 0 6 0 5 万方数据 2 3 1 2 第 三 军 医 大 学学 报 第3 0 卷 周围神经缺损后，功能恢复不佳的一个重要因素 就在于失神经支配后，骨骼肌即失去相应的神经营养 因子供应和运动收缩能力，往往等再生神经轴突到达 靶肌肉时，靶肌肉已发生不同程度、无法挽回的

18、萎缩变 性。因此如何在尽可能短的时间内获得较高神经再生 的效果，这是急待解决的问题。 采用微囊化神经组织细胞与脱细胞神经联合移植 修复犬一定长度坐骨神经缺损，通过对其术后一定时 间的腓肠肌进行检测，结合对术侧肢体运动功能观察、 对移植段神经进行运动传导速度测定和对远端吻合口 远侧神经进行形态学检测等综合分析讨论这一治疗方 案的可行性，从而为将来临床应用提供实验依据。 1 材料与方法 1 1 材料及分组 选用健康成年杂种犬1 2 只( 由重庆医科大学实验动物中 心提供) ，雌雄不限，体质量1 2 1 5k g ，分成4 组( A 、B 、c 和D 组) ，每组3 只。健康s D 大鼠1 0 只，

19、雌雄不限，体质量1 2 0 一 1 2 5g ，由大连医科大学实验动物中心提供。佰t o n x 1 0 0 、脱氧 胆酸钠( S i 舭) ，胎牛血清、1 6 4 0 ( G i b c o ) ，大鼠神经生长因子 ( N G F ) E L I s A 试剂盒( 武汉博士德) ，抗突触素兔多克隆抗体、 生物素化羊抗兔抗体二抗( 兔I g G ) ( 武汉博士德) ，其余试剂由 重庆医科大学基础医学研究所提供。 1 2方法 1 2 1 微囊化神经组织的制备 1 2 1 1 取材乙醚麻醉s D 大鼠，常规碘酒、酒精消毒双 下肢，俯卧位固定，在无菌条件下取双侧全段坐骨神经，长 2 5 4c m

20、。取下的神经在解剖显微镜下剥除神经外膜和神经 束膜，用锋利手术剪刀剪成约O 1m m 0 1 舢l 0 1I 姗的神 经组织小块，在室温下加入0 2 5 胰蛋白酶消化液消化 3 0I I I i n ，用1 0 F C S 的D M E M 培养液终止消化，滴管吹打成细 胞团，5 0 目细胞筛过滤后，8 0 0r m i n 离心5m i n ，弃去上清。 1 2 1 2 微囊化将神经组织重新悬浮在过滤除菌的海藻 酸钠溶液中。海藻酸钠一神经组织悬浮液通过注射器泵的针头 滴出，通过大功率高压脉冲微胶囊制备仪剪切注射器泵滴出的 液滴，并控制其粒径。海藻酸钠神经组织液滴在氯化钙溶液中 凝胶化，形成海

21、藻酸钠一神经组织胶珠；将海藻酸钠一神经组织胶 珠悬浮在过滤除菌的多聚赖氨酸溶液中，多聚赖氨酸与海藻酸 钠发生聚电解质络合反应成膜，形成包埋神经组织的多聚赖氨 彰海藻酸钠( A P A ) 微胶囊，用生理盐水洗去残渣，再浸入海藻 酸钠溶液形成又一层海藻酸钠外表，然后使微胶囊的中心部分 再液化，制成的微囊化神经组织直径约2 0 0 3 0 0 斗m ，储存在 l O 胎牛血清的1 6 4 0 培养液中，于3 7 、5 C 0 2 培养箱环境 下培养待用，每3 天换液1 次。移植前检测培养液N C F 含量以 明确微囊内神经组织的活性。 1 2 2 脱细胞神经的制备A 组：犬麻醉后经双侧股后外 侧切

22、口切取坐骨神经8c m 。共6 根，用4 号线结扎神经两端，将 神经做以下处理：每瓶内3 条神经，5 0 0r n l 消毒双蒸水低渗 处理1 2h ，3 6 ，速率1 2 0 次I I l i n ，持续回旋震荡，每4 小时换 水1 次。2 5 0I I I l 消毒5 T r i t 伽x 1 0 0 ，3 6 ，速率1 2 0 次l i n ， 持续回旋震荡1 2h 。5 0 0l I I l 消毒双蒸水震荡，3 6 ，速率 1 2 0 次I I l i n ，持续回旋震荡1 2h 。2 5 0I l l l 消毒5 脱氧胆酸 钠3 6 ，速率1 2 0 次I I l i n 持续回旋震

23、荡1 2h 。5 0 0I l l l 消毒 双蒸水震荡，3 6 ，速率1 2 0 次I I I i n ，持续回旋震荡1 2h 。重 复步骤至一次。钴枷y 射线辐照消毒，p H = 7 4 的0 1 r m y L P B S 中4 C 保存引。取部分脱细胞神经行石蜡包埋，常 规H E 染色了解脱细胞情况。 1 2 3 手术B 组、C 组和D 组：均选取左后肢为手术侧， 取股后外侧切口逐层切开，暴露坐骨神经后锐性切除3c m 造 成神经缺损模型，B 组用微囊化神经组织( 使用前经检测培养 液中有N G F 存在) ，1 “，约20 0 0 个微囊，注射于神经移植远、 近吻合端周围，与脱细胞神

24、经联合移植，C 组单纯使用脱细胞 神经移植，D 组采用自体神经切断后原位倒置移植修复神经缺 损。术后分笼喂养，定期观察其一般情况。 1 3 取材及检测 1 3 1 运动功能观察及电生理检测术后定期观察患肢运 动功能恢复情况，并于术后6 个月统一对术侧肢体移植段神经 运动传导速度进行检测，同时以健侧为对照。手术经双侧股后 切口暴露并游离左侧神经移植段和右侧坐骨神经，长约1 0c m 。 选择肌电仪运动传导速度检查程序。刺激远近点分别位于术 侧移植吻合口远近端2c m 处，间距7c m ，健侧两刺激点位于与 左侧相应部位、相同间距作为正常对照。记录电极经皮刺人腓 肠肌肌腹。刺激参数为：1 O 一2

25、 0I n AO 2 鹏1 OH z ，肌电仪 自动记录并计算两点间的运动传导速度。 1 3 2 腓肠肌及远端吻合口远侧坐骨神经形态学检测 处 死动物，取手术侧及健侧新鲜腓肠肌组织块迅速投入液氮中冷 冻保存。将腓肠肌标本放入恒冷切片机中，一2 0 下，沿腓肠 肌肌纤维方向，在最大横径部位做连续冰冻切片3 套，分别行 S D H 组织化学染色、突触素组织化学染色和运动终板胆碱脂酶 法组织化学染色。同时取距远端吻合口以远lc m 处坐骨神经 约O 5c m ，常规石蜡切片，行M 鹊n 染色、固蓝( L u x o l 缸t b l u e ) 染色及N F 2 0 0 染色。 1 4 图像定量测定

26、分析 腓肠肌各组切片在恒定显微镜光源亮度和放大倍数前提 下，每张切片随机( 随机数字表法) 观察5 个视野，记数低倍视 野下运动终板数量，使用北航真彩色病理图像分析系统进行图 像分析，测量s D H 组织化学染色腓肠肌纤维横断面积和光密 度值，分别测量突触素组织化学染色和运动终板组织化学染色 的光密度值及面积大小。 1 5 统计学分析 数据以i l 表示，采用S A S8 2 进行t 检验。 2 结果 2 1 微囊化神经组织及脱细胞神经形态学观察 微表化神经组织倒置相差显微镜下呈完整球形，微囊膜表 现光滑，囊内为半消化神经组织( 图1 ) 。脱细胞神经纵截面光 镜下见大量纵形纤维，排列整齐，呈

27、波浪状，纤维之间有明显的 空隙，没有发现髓鞘或细胞成分( 图2 ) 。 万方数据 第2 4 期王雷，等微囊化神经组织联合脱细胞神经移植修复犬坐骨神经缺损 2 3 1 3 2 4 腓肠肌相关检测 2 4 1 琥珀酸脱氧酶( s u c c i n i cd e h y d r o g e n 鼬e ，S D H ) 组织化学 染色B 、c 、D 组术侧及健侧腓肠肌切片染色后均呈不同程 度的深蓝色，光镜下健侧颜色最深，其次B 组，再次D 组，C 组 较之其他组最浅( 图3 ) 。经图像分析系统检测后，B 、c 组间比 较有显著性的差异，B 、D 组间差异不明显，B 组术侧与健侧比 较有显著性差异。

28、而比较术侧腓肠肌纤维截面积后发现B 、D 组肌肉萎缩程度明显比C 组轻，虽然B 、D 组间有轻微差别，但 无显著统计学性差异。B 组术侧肌纤维截面积明显小于健侧， 反映仍有一定程度的肌萎缩( 表2 ) 。 图l 微囊化神经组织形态学观察( 倒置相差显微镜4 0 0 ) 图2 脱细胞神经形态学观察( H E 2 0 0 ) 2 2 术侧肢体运动功能恢复情况 术后B 、c 、D 组动物均出现三足站立、患肢悬吊姿势，且均 出现舔食息足足背现象，C 组有l 例发生足背溃疡，经过肌注 青霉素及伤口清洗护理，于术后第4 周愈合。术后1 0 周左右 B 、D 两组动物开始恢复患足着地负重，四足行走第l l

29、周左右 B 组动物也出现恢复四爪行走，但3 组动物初始患足着地时常 出现足背着地现象，行走时明显力量不足，与其余三足不协调， 呈“跑跳步态”后随时间推移行走姿势逐渐改善。B 、D 两组动 物在第1 5 周时已能出现前足抬起扒持笼栏，短暂依靠后足站 立扑咬动作，患侧肢体肌力恢复较好，行走时四足基本协调，而 c 组出现此征象相对要晚2 周，即第1 7 周时才出现上述情况。 1 8 周时B 、D 组动物于笼内行走时步态已与术前无明显差别 但是在奔跑及扑咬时仍旧出现术侧后肢肌力与健侧不甚协调 的情况，C 组此时笼内行走时已能做到四足较为协调，但跑跳 时术侧肌力明娃低于健侧。 2 3 移植段神经运动传导

30、速度检测 术后6 个月针对移植神经段的运动传导速度比较后发现， B 、D 组神经传导速度均明显高于c 组；B 组甚至还略高于D 组，但没有明显的统计学差异；B 组术侧与健侧比较后发现，尽 管经过了6 个月的恢复时间，术侧神经传导速度还是不及健侧 ( 表1 ) 。 袭l 移植段神经运动传导速度( m s ，孟s ) B ：P O 0 5 与C 组比较；b ：P O 0 5 ，与健侧比较 圈3B 组腓肠肌的形态学观察( s D H 2 0 0 ) 表2B 、C 、D 组术侧及健侧腓肠肌间S D H 光密度值和 肌纤维横断面积( j F ) a ：P 0 0 5 ，与B 组比较；b ：P 0 0 5

31、 ，与术侧比较 2 4 2 突触素( S Y P ) 组织化学染色B 、c 、D 组术侧及健侧 切片染色后均可在腓肠肌终板带的肌间隙数镀面积和着色深 度不一的特异性颗粒状或点状棕黄色着色( 图4 ) 。将随机5 个视野的阳性染色区域面积累加，作为该样本的突触素面积测 量值。B 组阳性染色区域面积及光密度在各组术侧中最接近 正常值，与D 组比较无统计学差异，而c 组的各项指标则相对 最低，B 组术侧与健侧比较后反映尽管有一定的恢复，但是距 离正常水平还有不小的差距( 表3 ) 。 图4B 组腓肠肌突触素形态学观察( s Y P 1 0 0 ) 2 4 3 胆碱脂酶法运动终板组织化学染色各组均可见

32、面 积大小与着色深度不一的胆碱脂酶阳性颗粒( 图5 ) 。随机选 万方数据 2 3 1 4第三军医大学学报 第3 0 卷 取5 个低倍( L P ) 视野记数运动终板数量，取其平均数，B 、D 组 数量明显多于c 组。图像分析反映c 组较之其他组术侧而言， 运动终板明显面积细小和着色浅淡，B 、D 组术侧运动终板面积 大小基本一致，着色较深，结构较清晰，B 组运动终板面积和光 密度值略高于D 组，但经过统计学比较无显著性差异。经过比 较C 组术侧与健侧运动终板检测结果反映经过6 个月的恢复， 无论从数量面积、着色程度到结构的完整性方面，都未能达到 正常水平( 表4 ) 。 表3B 、C 、D

33、组术侧及健侧腓肠肌突触素阳性颗粒光密度值 和面积( j $ ) a ：J p O 0 5 ，与C 组比较；b ：P O 0 5 ，B 组术侧与健侧比较 表4B 、C 、D 组术侧及健倒腓肠肌间运动终板光密度值、 面积和数量( j s ) 光密度值面积( u m 2 ) 术侧健侧术侧健侧 敷骷( 千L P ) 术侧健侧 a ：p O 0 5 与C 组比较；b ：P 0 0 5 。B 组术侧与健侧比较 圈5B 组腓肠肌运动终板的形态学观察 ( A c h E 2 0 0 ) 2 5 远端吻合口远侧神经相关检测 M 幽n 染色纵切片光镜下观察发现，在术后6 个月时各组 均可见远端吻合口以远的神经纤维

34、束间结缔组织增生，但B 、D 组主要以靠近神经外膜区域明显，而c 组神经纤维间见较多结 缔组织增生并将神经纤维分隔开来( 图6 A ) 。 固蓝染色横切片光镜下观察发现，B 、D 组均可见大量蓝染 的髓鞘，而C 组无论在髓鞘数量和厚度数量上均与B 、D 组有 明显差距( 图6 B ) 。 N F 2 0 0 染色横切片光镜下观察发现，B 、D 组可见大量密集 分布有髓神经神经纤维断端，c 组则见神经纤维密度较低且不 均一( 图6 C ) 。 3 讨论 骨骼肌形态结构和功能的维持仰赖相关神经支 配，周围神经一旦受到损伤，受其支配的靶肌肉即失去 相应的神经营养因子供应及收缩运动能力，而在周围 神经

35、损伤后功能恢复不佳的重要因素就在于失神经支 配后的肌变性、萎缩和纤维化。 周周神经缺损的修复除了作为“金标准”的自体 皮神经移植外，针对各种移植材料的探索也取得了不 同程度的成果，脱细胞神经作为一种异体神经移植物 在动物模型上进行了较多实验，并已有个别进行了临 床实验，取得了不错的效果H 。J 。但是在实验中显示， 随着桥接神经长度的增加，神经再生的效果有所降低， 尽管有一定程度的功能恢复，但仍不及自体神经移 植8 | 。 微囊化组织、细胞移植是近年来发展起来的一项 新技术，利用微囊的免疫隔绝作用以及半透膜特性，移 植后既可避免宿主的免疫排斥发应，又可发挥移植物 的分泌功能等生物效应。有学者将

36、微囊化神经组织移 植到单纯切断后原位吻合的神经局部，发现其较单纯 吻合而言，能显著提高神经再生的效果一1 。如果将其 与脱细胞神经联合移植，发挥其能够分泌各种参与损 伤神经再生和功能修复的生长因子的特点，也许就能 够提高脱细胞神经移植效果。 肌纤维在细胞器方面常见的线粒体改变主要有肿 胀、水肿，晚期则基质消失或线粒体破碎。琥珀酸脱氢 酶是三羧酸循环中催化琥珀酸和延胡索酸问反应的 酶，是呼吸链的标志酶之一，主要分布于线粒体内膜和 嵴上，其反应产物呈点状分布，它的活性是检测线粒体 A ：M a s 蚰n 染色；B ：固蓝染色；C ：N F 2 0 0 染色 圈6B 组远端吻合口远侧坐骨神经形态学观

37、察( 4 ) 万方数据 第2 4 期王雷，等微囊化神经组织联合脱细胞神经移植修复犬坐骨神经缺损 2 3l5 损伤程度的敏感标志。有文献报道，琥珀酸脱氢酶慢 性变化常与线粒体的损伤同时出现。早期线粒体肿 胀，膜通透性增加，底物容易进入线粒体内，或s D H 漏 出线粒体外与N i 呐一B T 反应，形成粗大反应颗粒。后 期线粒体损伤加重，基质明显水肿，嵴断裂或消失， S D H 活性明显降低或消失，表明线粒体氧化磷酸化过 程被抑制0 1 2 j 。本实验通过对移植6 个月后各组肌 肉进行琥珀酸脱氢酶染色，分析酶存在处颜色的深浅 来反映酶的活性，颜色越浅表明线粒体功能受损越重。 结果表明微囊化神经

38、组织联合脱细胞神经移植后较之 其他各组S D H 的活性损伤最轻，尽管切片反映其与健 侧比较仍存在一定程度的肌萎缩，但其肌纤维截面积 值较其他组是最接近正常水平的。 突触素是神经元胞体合成后运输到神经末梢的突 触囊泡膜的特异性膜蛋白，参与构成囊泡的特异性膜 通道。调节神经递质释放，其表达与突触形成一致，是 突触前终末的特异性标志。神经修复6 个月后腓肠肌 的突触素颗粒状阳性反应表示，再生轴突已经重建与 靶肌肉功能性连接引。联合移植组阳性染色颗粒的 着色、面积明显高于单纯脱细胞组，在一定程度甚至高 于自体神经移植组，尽管在统计学上是没有显著性差 异的。但是通过与其健侧比较，阳性颗粒数量仍偏少，

39、提示肌肉的再神经支配仍是不完全的。而对运动终板 的检测发现，联合移植组术侧腓肠肌运动终板的数量、 面积和光密度综合比较后也最接近正常水平，表明再 生的神经轴突已部分抵达靶器官- 用 肠肌，并可能形成 新的运动终板，从而支配和营养肌肉，使肌肉的萎缩程 度减轻4 ”1o 基于腓肠肌的上述检测分析，结合术侧肢体的运 动功能恢复情况及相应移植吻合口远端神经的检测结 果，我们有理由相信，脱细胞神经辅以微囊化神经组织 移植修复神经缺损的效果明显优于单纯使用脱细胞神 经移植，其为神经再生创造了良好的微环境，再生的神 经能较快的通过神经缺损，并重新支配相应的骨骼肌， 防止肌组织的进一步萎缩。而且我们在实验中发

40、现， 微囊化神经组织联合脱细胞神经移植在一定程度甚至 超过了自体神经移植的效果，这种差异尽管没有统计 学上的意义，但是究其原因可能是：微囊化神经组织 细胞的“溢出效应”，即在移植体内初期。微囊内空间 较为适宜，雪旺细胞等释放的各种神经营养因子得以 源源不断的释放，随着时间的推移，囊内组织细胞不断 增殖和死亡，产生的废物逐渐堆积，囊内空间环境逐渐 局促，随着组织细胞活力的降低，释放的相应生长因子 也随之减少；术后观察的时间偏短；术后观察测量 存在误差，究竟是哪种因素起主要作用，微囊化神经组 织在体内究竟能存活多长时间，远期观察是否仍有差 别，这些问题有待于进一步的研究。但基于目前研究 结果而言，

41、我们有理由相信，微囊化神经组织联合脱细 胞神经移植有望在不远的将来替代自体神经移植，从 而成为临床治疗周围神经损伤的一种新的手段。 参考文献： 1 粱安霖，蒋电明，安洪G D N F 基因活化的细胞外基质对大鼠坐 骨神经缺损的修复作用【J 第三军医大学学报2 0 0 7 ，2 9 ( 8 ) ： 7 1 7 7 2 0 2 雄鹰，于炜婷，王为，等移植用微囊化神经细胞组织制备 及运输的实验研究 J 中国康复理论与实践，2 0 0 2 ，8 ( 5 ) ：2 9 6 - 2 9 7 3 孙明学，王鑫，赵斌，等化学去细胞法对粗大神经质量评价 方法及影响因素的探讨 J 中国修复重建外科杂志。2 0 0

42、 6 ，2 0 ( 8 ) ：7 7 9 7 8 2 4 H u d nT w ，u us Y ，s c h I n i d t c E E n g i n e 谢T l g 卸i m p r 叫e da c e u u - l a rn e e 鳓v i ao p t i m i z e dc h e m i c a lp r o c 嘲她 罩】7 n 伽eE l l g ， 2 0 0 4 ，l O ( 9 一1 0 ) ：1 3 4 6 1 3 5 8 5 H u d 鲫lTw ，z 洲k os ，D e i s t e rc ，以甜卸血I i z e d 扯e I l u l a rn

43、 e r v e g r a nj Bi m m u n o I o g i c a l l yt o l e m t e d 柚d6 u P P o r I s 陀g e n 廿砒i o n J T i B 叫e E n g ，2 0 0 4 ，1 0 ( 1 l 1 2 ) ：1 6 4 l 1 6 5 1 6 鼬mBs ，Y J J ，A t a L aA 蹦p I l e r a ll 盯v e 他g e n e r a t i 伽m i r I ga c e u u l a rn e Mg r a f t s J JB i o l l l e dM m e r 胁A ，舢，6 8 (

44、 2 ) ：2 0 l 一 2 0 9 7 郭义柱，卢世璧，王岩，等去细胞同种异体神经移植修复人体 长段周围神经缺损 J 中国临床康复，2 0 0 5 ，9 ( 3 8 ) ：2 6 2 7 8 李跃军。陈绍宗，李学拥，等去细胞异体神经材料修复不同长度 周嗣神经缺损 J 中国I 临床康复，2 0 0 3 ，7 ( 4 ) ：5 6 5 ，5 8 5 9 胡昭华，陈绍宗。郭伶俐，等微囊化s D 大鼠周闱神经组织移植 促进周围神经再生的实验研究 J 实用美容整形外科杂志， 2 0 0 3 。1 4 ( 1 ) ：5 l 一5 3 1 0 林巍巍张沛云，王晓冬，等人T 组织神经移植物桥接狗缺损 坐骨

45、神经后腓肠肌内琥珀酸脱氧酶表达含量的变化 J 南通医 学院学报2 0 0 2 ，2 2 ( 4 ) ：3 6 3 3 “，3 6 7 1 1 惠莲，囝艾慧，姜学钧，等不同程度失神经支配后眼轮匝肌 和口轮匝肌的形态学研究 J 中国医科大学学报，2 0 0 7 ，3 6 ( 2 ) ：1 2 2 一1 2 4 1 2 】何双八，孙敬武，孙东东单侧喉返神经切断后甲杓肌结构与酶 学变化的实验性研究 J 安徽医科大学学报，2 0 0 5 ，4 0 ( 3 ) ： 2 3 l 一2 3 3 1 3 张琪，顾晓明，俞光岩，等复合许旺细胞的羊膜衍生物膜修 复神经缺损的动物实验 J 中华口腔医学杂志，2 0 0 6 ，4 l ( 2 ) ： 9 8 一1 0 1 1 4 孙明学唐金树。许文静等化学去细胞同种异体神经移植的 实验研究 J 中华骨科杂志，2 0 0 6 ，2 6 ( 4 ) ：2 6 7 2 7 1 1 5 邵岩，顾立强周围神经损伤与修复的解剖及组织学结局【J 中国临床康复，2 0 0 5 ，9 ( 2 1 ) ：1 6 5 一1 6 7 ( 编辑汪勤俭) 万方数据