恒河猴大脑注射Aβ1-42 和THIORPHAN对胆碱能神经元影响的研究.pdf

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1、翊j E 匡药兰Q 塑生! 圣旦筮! ! 鲞笙垫朗丛! 蛙i 丛! 尘型Q ! 婴堂：兰Q 嫂：! 竺! ! ! 旦塑奠垒2 兰 恒河猴大脑注射A 3 1 - 4 2 和T h i o r p h a n 对胆碱能 神经元影响的研究 李文德吴玉娥闵凡责黄家园黄韧 【摘要】目的观察颅内灌注A t 3 1 4 2 和T h i o r p h a n 给药后恒河猴基底、核大脑皮质等部位胆碱能神 经元的改变。方法将恒河猴4 只，分为对照组( 1 只) 与实验组( 3 只) ，对照组开颅后只注射0 9 氯化 钠溶液，实验组开颅后先注射T h i o r p h a n 到猕猴的基底核和大脑皮质消耗已存

2、在的N e p r i l y s i n ，然后再缓慢 的注射孵育好的纤丝状A B l - 4 2 ，再植入舍有T h i o r p h a n 的微渗透泵到基底核。免疫组织化学方法检测大脑 切片胆碱乙酰转移酶( C H A T ) 免疫反应活性及阳性神经元数量及形态学改变。结果给药后实验组恒河 猴基底核、皮质等部位的胆碱能神经元教量减少和C h A T 水平降低。结论A B l 4 2 和T h i o r p h a n 联合颅内 给药后损害大脑基底核、皮质等部位的胆碱能神经元。 【关键词】恒河猴；阿尔茨海默病；胆碱乙酰转移酶：免疫组化 【中图分类号】R 一3 3 2 ；R7 4 2【

3、文献标识码lA【文章编号】1 0 0 2 7 3 8 6 ( 2 0 0 9 ) 2 3 3 1 8 1 一0 4 E f f e c t so nc h o l i n e r g t cn e u r o n si nM a c a c aR h e s u sm o d e li n d u c e db yi n t r a c r a u l a lC O - i n f u s i o no fA 1 3 1 4 2a n d T h i o r p h a n L I W e n d e ，W UY u e 。，M I NF a n g u i ，e t 以D e p a r t

4、 m e n to fP h a r m a c o l o g y ，a u a n g d o n gK e y L a b o r a t o r yf o rR e s e a r c ha n dD e v e l o p m e n to fN a t u r eD 兀l g ，G u a n g d o n gM e d w 甜C o l l e g e ，G u a n g d o n g ，Z h a 耐a n g 5 2 4 0 2 3 C h i n a 【A b s t r a c t 】O b j e c t i v e T oo b s e r v et h ee

5、f f e c t so nc h o l i n e r g i cn e u r o n si nM a c a c aR h e s u sm o d e li n d u c e db y i n t r a c r a n i a lC O i n f u s i o no fA B l - 4 2a n dT h i o r p h a n M e t h o d sA f t e rd r i l l i n gt h es k u l l ，t h eT h i o r p h a nW a gi n j e c t e d i n t ot h ec e r e b r a

6、lc o r t e xa n di n t ot h eb a s a lg a n g l i at oc o n s u m et h ee x i s t e dN e p r i l y s i n ，t h e ni n f u s i n gt h ef L b r i l l a A B l - 4 2s l o w l ya n di m p h n t i n gm i n i e s m o t i cp u m pw i t hT h i o r p h a ni n t ot h eb a s a lg a n g l i a T h ep a t h o l o g

7、 i c a lc h a n g e s a n dn u m b e ro fi m m u n o r e a c t i v en e u r o n e sw e r e o b s e r v e d ，a n d t h e a c t i v i t y o fC h A TW a sd e t e c t e d b y i m m u n o h i s t o c h e m i s t r y R e s u l t s T h en u m b e ra n dl e v e l so fC h A Tp o s i t i v en e u r o si nb u

8、s a lg a n g l i aa n dc e r e b r a l c o r t e xo fM a c a c aR h e s u sb r a i nd e c r e a s e ds i g n i f i c a n t l yi ne x p e r i m e n t a l 固r o u p ，a sc o m p a r e dw i t ht h o s ei nc o n t r o l l g r o u p C o n c l u s i o nT h ec o m b i n e da p p l i c a t i o no fA 3 1 - 4 2

9、a n dT h i o r p h a ni nM a c a c aR h e s u sb r a i nC f l l ld a m a g et h e c h o l i n e r g i cn e u r o n si nb a s a lg a n g l i aa n dc e r e b r a lc o r t e xo fM a c a c aR h e s u sb r a i n 【K e yw o r d s 】 M a c a c aR h e s u s ；A l z h e i m e rd i s e a s e ；c h o l i n ea c e

10、t y h r a n s f e r a s e ；i m m u n o h i s t o c h e m i s t r y 阿尔茨海默病( A l z h e i m e rd i s e a s e 。A D ) 临床表现为进行性 的记忆丧失和其他认知功能障碍。脑内胆碱能神经系统损伤 及胆碱能神经元丢失是老年性痴呆的主要病理改变，也是造成 学习记忆能力下降的直接原因。N e 研l y s i n ( N E P ，E C3 4 2 4 1 1 ) 一种锌的金属蛋白酶被确认为是水解淀粉样蛋白的关键 酶一1 ，该酶是9 4 k D a 的跨膜蛋白，在多个器官或者组织中有表 达【3 】。

11、在大鼠模型胆4 j3 及人类尸解帕川的结果显示N E P 的表 达量与A D 的病理特征严重程度存在反比例关系。前人的研 项目来源：广东省自然科学基金重点攻关项目( 编号：0 1 0 0 8 6 ) ；广 东省科技计划项目( 编号：2 0 0 6 8 3 6 0 0 4 0 1 5 ) ；广东省自然科学基金自由 申请项目( 编号：0 6 0 2 3 0 1 3 ) 作者单位：5 2 4 0 2 3 广东省湛江市，广东天然药物研究与开发重点 实验室，广东医学院药理学教研室( 李文德、闵凡贵、黄家园) ；广东省实 验动物监测所( 吴玉娥，黄韧) 通讯作者：黄韧，5 2 4 0 2 3 广东省实验动

12、物监测所； E m a i l ：l a b k i n g s o h u c 鲫 3 1 8 l 论著 究结果证明随着年龄的增加N E P 的含量随之下降哺1 ，这些与 A D 发病率在6 0 岁以上的人群中明显增高的流行病学数据相 吻合。在啮齿类实验进一步表明敲除N E P 基因的大鼠一及 N E P 的选择性抑制剂T h i o r p h a n 能够抑制A B 的代谢，诱发p 淀 粉样蛋白沉淀此1 并出现行为学改变。本试验采用与人类亲 缘关系较近的，年龄较大的猕猴作为实验动物，采用大脑注射 A 1 3 1 4 2 和T h i o r p h a n 的方法，观察其对胆碱乙酰基转移

13、酶 ( C H A T ) 免疫反应活性及阳性神经元数量及形态学改变。探讨 该法是否可以诱发猕猴产生类似A D 样胆碱能神经元损害的 病理改变。为是否可以用大脑注射A 1 3 1 4 2 和，I k o r p h 硼的方 法建立A D 模型打下研究基础。报告如下。 1 材料与方法 1 1 实验动物与材料恒河猴4 只，雄性，1 6 一1 7 岁，由广东 省高要市康达实验动物科技有限公司提供，生产许可证S C X K ( 粤) 2 0 0 4 - 0 0 0 9 ，使用许可证S Y X K ( 粤) 2 0 0 4 - 0 0 3 1 ，粤监证字 2 0 0 4 A 0 4 0 号。编号( 8

14、8 0 0 5 、8 8 0 0 7 、8 9 0 0 1 、8 9 0 2 3 ) 。A 9 1 4 2 ( S i g m a 公司，A - 9 8 1 0 ) ；D L 一1 1 l i o r p h 锄( S i g m a 公司，T 6 0 3 1 ) ；抗坏 万方数据 3 1 8 2 塑j 量匡药至Q 塑生1 2 旦箜! ! 鲞筮箜塑丛竺竖i 丛! 垫i 丝婴堡坐：兰璺塑：! 竺! 兰! 坠堕丛! ：望 血酸( S i g m a 公司，A 5 9 6 0 ) ；A b e t 泵( M o d e l ：2 M I A ) D U R E C T 公 司C a n a d a

15、；混合麻醉药( 氯胺酮0 。1 以r a l ，速眠新1m l 支，阿 托品0 5g 支，由南方医院实验动物中心提供) ；牙科钻( c o r n - p a xe p 3 2 5 ，由南方医院实验动物中心提供) ；A 1 3 1 - 4 2 多克隆抗 体( B S O I O T R 北京博奥森生物技术有限公司) ；即用型S A B C 试 剂盒( S A l 0 2 2 。汉博士德生物工程有限公司) ；5 B S A 封闭液； 二抗：山羊抗兔I g G ；D A B 显色试剂盒( A R l 0 2 2 ，武汉博士德生 物工程有限公司) ；生物自动脱水机，湖北省医用电子仪器厂； B M V

16、 型组织包埋机，湖北省医用电子仪器厂；生物组织摊片烤 片机，湖北省医用电子仪器厂；O l y m p u sC H K 型显微镜，奥林巴 斯光学工业株式会社；O l y m p u sC H - 9 4 3 5 型显微镜。奥林巴斯光 学工业株式会社；L e i c aR M 2 3 1 5 型石蜡切片机，L e i c aC o ，G e r - m a l l ；L e i c aS P 9 0 0 0 全自动磨刀机，L e i c aC o ，G e r m a n o 1 2 实验方法 1 2 1 实验分组：本次实验分为对照组和给药造模组，对照组 为1 号猴没有注射任何药物，仅接受手术开

17、颅，注射0 9 氯 化钠溶液。实验组为2 、3 、4 号。 1 2 2 手术给药：实验组为2 、3 、4 号猴子。先将猴子剃去头 皮。用2m l 注射器吸取混合麻醉药按体重0 1 5 0 2m l k g 肌内注射。术者戴手套以海绵钳夹持2 5 碘酒和7 5 乙醇 纱球消毒。术者确定穿刺部位，以颧弓和正中矢状缝为骨性标 志，参照广西猕猴脑立体定位图谱确定注射位点“，递2 0 号刀片切开头皮各层，递头皮钳夹持头皮止血，干棉球或者纱 块吸干血液，暴露颅骨，牙科钻开颅。先采取左顶骨开口，用微 量注射器先注射1 5 斗l 的T h i o r p h a n ( 2m g , d ) 消耗内源性A B

18、 降解酶，3 5m i n 后再缓慢注射1 5 出的A 1 3 1 4 2 ( tm s m 1 ) ( 预先将A I M 4 2 置于D M E M F 1 2 培养液中3 7 下孵育4 7d ) 到恒河猴大脑顶叶皮质( 两个皮质位点) 和基底核( 一个位 点) 。头皮下分离足够空间放置灌装好的A L Z E T 泵，内含D L - T h i o r p h a n2m s m l 和抗坏血酸lm m o l m l 以及人工脑脊液，注 射到基底核，长达2 8d 抑制内源性度B 降解酶，以生物胶粘合 固定。再行右侧颢骨开口，往前后方向选择两个皮质位点。每 个皮质位点先注射l O 山的T h

19、 i o r p h a n ( 2m s m 1 ) ，间隔3 5m i n 后再注射1 0 山的A B l 4 2 ( 1m g m 1 ) 。以吸收性明胶海 绵封闭。用7 1 l 圆针缝合肌肉、筋膜层，9 2 4 角针7 号缝线 间断缝合皮肤。最后海绵钳夹持酒精纱球消毒切口周围皮肤。 术前2d 注射头孢拉啶肌内注射，术后每天2 次肌内注射头孢 拉啶加阿米卡星加维生素C ，预防颅内感染。术后抗感染治疗 3 5d 。全水果喂养5 7d 。 图l 对照组l 号基底核C h A T 免 疫组化显示数量较多着色较深的 阳性神经元( X 4 0 0 ) 图2 实验组2 号左侧基底核注射 位点附近只是

20、留下少数的C h A T 免 疫组化阳性神经元( x 4 0 0 ) 1 。2 3 剖杀及取材：颅内给药5 0d 后剖杀猴子。氯胺酮 0 1 5m g k g ，深度麻醉猴子，分离双侧颈总动脉及颈外静脉，一 侧颈总动脉插管，用于灌注0 9 氯化钠溶液，断开对侧颈总动 脉放血，当放血侧颈总动脉和静脉的流出液变清时，更换预先 配制好4 的多聚甲醛溶液灌注固定。待完全置换完0 9 氯 化钠溶液后，以止血钳封闭放血侧已经分离好的血管。开颅取 大脑，置于1 0 的中性甲醛溶液中保存。 1 2 4 免疫组化方法亲合素一生物素一过氧化物酶复合物法 ( A B C 法) ：常规石蜡包埋切片，切片置于3 0 H

21、 2 0 ：溶液1 份 加蒸馏水l O 份，室温浸泡2 0r a i n ，灭活内源性过氧化酶，蒸馏 水洗3 次；热修复抗原。将切片置于0 0 1m o i L 枸橼酸钠缓冲 溶液( p H 值6 O ) ，电炉加热至沸腾。断电5 一l Or a i n ，反复l 一2 次，冷却用P B S 洗切片3 次；滴加5 B S A 封闭液，3 7 2 0m i n 。 甩去多余液体，不洗；滴加一抗( 1 ：1 0 0 稀释) ，3 7 lh 。P B S 洗3 次，每次5r a i n ；滴加二抗( 生物素化山羊抗小鼠I g G ) ，3 7 2 0r a i n 。P B S 洗4 次，每次5r

22、a i n ；滴加S A B C ( 链酶亲和素一生 物素一过氧化物酶复合物) ，3 7 0 C2 0m i n 。P B S 洗4 次。每次 5m i n ；D A B 显色：室温显色，镜下控制反应时间，显色约5 1 0r a i n ；苏木索轻度复染。脱水、透明、封片，显微镜观察。 2 结果 免疫组化结果表明：C h A T 免疫阳性神经元胞体以及树突 部位深染，神经元为中等程度大小的细胞，排列无方向性， c h A T 免疫阳性物质主要位于神经元胞体内。实验组C h A T 免 疫阳性神经元较对照组组的神经元小，且数目明显减少，胞体 的轴突及树突变短。实验组基底核C h A T 免疫阳性

23、神经元数目 和平均光密度均减少 图l - 6 ) 。 3 讨论 胆碱乙酰转移酶( c h A T ) 是乙酰胆碱( A C h ) 的合成酶，它 在胆碱能神经元细胞体内合成，与A C h 的分布几乎平行。是胆 碱能神经元的特殊标志。故常可以作为研究胆碱能神经的标 志或估计A C h 含量的间接指标。胆碱能系统在学习记忆过程 中具有重要作用，研究表明大鼠的学习记忆过程伴有皮质和海 马的A c h 水平和C h a T 活性升高“。拟胆碱能药物能改善学 习和记忆功能；反之。抗胆碱能药物则损坏学习和记忆功能。 在人类和动物模型的痴呆研究中，很多结果都证实了新皮质或 海马的胆碱能通路功能降低与A D

24、的学习和记忆能力丧失有 密切关系1 5 , 1 6 1 。近年来的研究更加明确了胆碱能系统与A D 的关系。通过切断脑内胆碱能系统通路，能够严重破坏动物的 学习记忆能力0 1 7 。通过药物损伤胆碱能系统的研究也证实了 图3实验组3 号左侧基底核 C h A T 免疫组化，设有见到阳性神 经元细胞可以见到神经元萎缩小 胶质细胞大量浸润( 4 0 0 ) 围4 实验组4 号左侧基底核 C h A T 免疫组化结果( x 4 0 0 ) 万方数据 塑j E 医药2 Q 鲤生1 2 旦筮! ! 鲞筮垫期旦! 照i 坠型i 型! ! 望趟：圣Q 塑。! ! ! 三! 旦墼塑壁：垫 图5 实验组注射位点

25、附近 皮质神经元C h A T 免疫组化 阳性神经元少，锥体神经元 胞体内存在分散的着色，树 突未见着( x 4 0 0 ) 围6 实验组皮质神经元 数量减少而且着色较浅 提示这些部位的神经元 C h A T 含量下降( 4 0 0 ) 这一点“。细胞培养和动物在体实验的结果都一致表明，B 淀 粉样蛋白具有破坏脑内胆碱能系统的能力“，与学习记忆障 碍有密切关系。目前，对A D 公认有效的治疗手段就是胆碱酯 酶抑制药。尽管还存在一些问题，但新型的、高选择性的胆 碱能抑制药不断涌现，并表现出良好的临床效果12 0 ) 。这是证 明胆碱能系统和A D 有密切关系最直接而有力的证据。 猕猴与人类的亲缘

26、关系最近，其与人类基因的同源性达到 9 2 5 一9 5 ，脑的结构和功能与人类最为相似“。更主要 的是老年猕猴会自发性出现人类A D 病变特征性淀粉样斑块、 神经元减少以及行为学改变，这些与人类A D 患者的病理特征 几乎完全一致 2 L i 2J ，这些都是在研究A D 中猕猴具有啮齿类动 物无法比拟的优势。也有少数文章报道注射淀粉样蛋白- z s 和神经毒性物质( 阻断p 7 5 N T R ) L 圳到非人灵长类大脑内建 立A D 模型，其中有成功也有失败。失败的原因之一就是由于 动物体内存在淀粉样蛋白清除系统，能够迅速水解外源性的淀 粉样蛋白J 。因此，本次实验在注射A t 3 1

27、4 2 的同时，还放置 A l z e t 泵。长达一个月缓慢释放T h i o r p h a n 抑制淀粉样蛋白的降 解，从理论上最大限度的促使淀粉样蛋白不被水解，发生积聚。 在体内外的实验均已证实淀粉样蛋白增多会损害胆碱能 神经系统，表现为C h A T 活性下降】、乙酰胆碱神经元减少旧1 以及行为学的改变。M o u r i 等驯在大鼠侧脑室灌注T h i o r p h a n 的实验结果表明，动物出现空间学习记忆行为障碍，但是与对 照组比较，由尼古丁刺激所引起的乙酰胆碱释放的量无区别。 对于出现行为学障碍，乙酰胆碱含量不变与现有的理论相矛盾 的实验结果。M o u r i 等驯认为

28、可能是由于大脑不同区域对淀粉 样蛋白的敏感度不一致所造成：还有就是由于T h i o r p h a n 引起 集聚的啮齿类内源性淀粉样蛋自在肽段上与人类的存在差别 所致。本次实验观察到给药后5 0d 内猕猴的行为学的无改变， 但是基底核及海马以及顶叶皮质等给药部位C h A T 免疫组化 结果显示实验组的C h A T 的活性以及C h A T 免疫阳性神经元较 对照组组的神经元小，且数目明显减少。这与M o u f i 等l 训的结 果刚好相反，也与现有的记忆与乙酰胆碱含量的理论相矛盾， 有赖于今后进一步的研究。 我们的实验表明，通过注射外源性的淀粉样蛋白及基底核 灌注T h i o r

29、o p h a n 抑制内源性N e p r i l y s i n 的活性，未见引起猕猴 出现工作记忆等行为学的改变，但是C h A T 的活性以及C h A T 免疫阳性神经元数目明显减少的结果。 参考文献 1C a r s o nJ A T u r n e rA J B e t a a m y l o i dc a t a b o l i s m ：r o l e sf o rn e p r i l y s i n 3 1 8 3 ( N E P ) a n do t h e rm e t a l l o p e p t i d a s e s ? JN e u r e e h e m

30、2 0 0 2 8 1 ：J 8 2F u k a m iS 。W a t a n a h eK ，L w a 扭N 。e ta 1 A h e m - d e g r a d i n ge n d o p e p t i d a s e ， n e p r i l y s i n i n m o u s eb r a i n ：s y n a p t i ca n da x o n a ll o c a l i z a t i o n i n v e r s e l y c o r r e l a t i n gw i t hA b e t sp a t h o l o g y N e u

31、r n s e iR e s 2 0 0 2 ，4 3 ：3 9 - 5 6 3 T u r n e rA J I s a a cR E ，C o a t e sD 1 1 l en e p r i l y s i n ( N E P ) f a m i l yo fz i n c m e t a l l o e n d o p e p t i d a s e s ：g e n o m i c sa n df u n c t i o n B i o e s s a y s ，2 0 0 1 ，2 3 ：2 6 1 2 6 9 4 M a r tR A ，B o c k e n s t e i

32、nE ，M u k h e r j e eA ，e la 1 N e p r i l y s i ng e n et r a n s f e r r e d u c e sh u m a na m y l o i dp a t h o l o g yi nt r a n s g e a i cm i c e JN e m m B c i 2 0 0 3 ， 2 3 ：1 9 9 2 1 9 9 6 5Y a s o j i m aK ，A k j u t a m aH ，M cG e e rG e ta 1 R e d u c e dn e p f i l y s i ni nh i g h

33、p l a q u ea r e a so fA l z h e i m e rb r a i ntap o s s i b l er e l a t i o n s h i p t od e f i c i e n td e g c a - d a t i o no fb e t a a m y l o i dp e p t i d e N e u r o s c iL e l t ，2 0 0 1 ，2 9 7 ：9 7 1 0 0 6 W a n gD S ，1 w a t aN ，H a r mE ，e ta 1 O a i d i z e dn e p r i l y s i ni

34、n 喇n ga n d A l z h e i m e r d i s e a s eb r a i n s B i o c h e mB i o p h y sR e sC o m m u n 2 0 0 3 ，3 1 0 ： 2 3 6 2 4 1 7 M i n e r sJ S Y a mH e l m o n dZ ，C h a l m e rS e la 1 D e c r e a s e de x p r e s s i o na n d a c t i v i t yo fn e p r i l y s i ni nA l z h e i m e rd i s e a s ea

35、 r ea s s o c i a t e dw i t hc e r e b r a l a m y l o i da n g i o p a t h y JN e u r o p a t h o lE x pN e u r o f 2 0 0 6 6 5 ：1 0 1 2 1 0 2 1 81 w a t aN ，T a k a k iY F u k a m iS e la 1 R 酾o n s p e c i f i cr e d u c t i o no fAb e t a d e g r a d i n ge n d o p e p t i d a s e ，n e p r i l

36、y s i n 。i nf n o u a eh i p p o c a m p n su p o n 蛔r l g J N e u r e s e iR e s ，2 0 0 2 7 0 ：4 9 3 - 5 0 0 9M o h a j e r iM H W o l f e rD P N e p r i l y s i nd e f i c i e n c y d e p e n d e n ti m p a i r m e n to f c o g n i t i v ef u n c t i o n si nam o u g em o d e lo fa m y i o i d o s

37、 i a N e u r o c h e mR e s 。 2 0 0 9 ，3 4 ：7 1 7 - 7 2 6 1 0M o u r iA ，Z o uL B ，1 w m aZ ，e la 1 I n h i b i t i o no fn e p r i l y s i n b yT h i o r p h a n ( i e y ) c 丘n 8 e B 赳la c c u m u l a t i o no fa m y l o i db e t aa n di m p a i r m e n to f l e a r n i n ga n dm e m o r y B e h a

38、vB r a i nR e s 2 0 0 6 ，1 6 8 ：8 3 - 9 1 1 ll w a t aN ，T s u b u k iS T a k a k iK e ta 1 I d e n t i f i c a t i o no ft h em a j o rA b e t a l 4 2 一d e g r a d i n gc a t a b o l i cp a t h w a yi nb r a i np a r e n c h y m a ：s u p p r e s s i o nl e a d s t ob i o c h e m i c a la n dp a t h

39、 o l o g i c a ld e p o s i t i o n N a tM e d ，2 0 0 0 ，6 ：1 4 3 - 1 5 0 1 2N e w e l lA J ，S u eL I ，S c o t tS e ta 1 T h i o r p h a n ，i n d u c e dn e p r i l y s i ni n h i b i t i o nr a i s e sa m y l o i db e t al e v e l si nr a b b i tc o l _ t e xa n dc e r e b r o s p i n a lf l u i d

40、， N e u r o s c iL e t t ，2 0 0 3 ，3 5 0 ：1 7 8 1 8 0 1 3 杨文光中缅树嗣、广西猕猴脑立体定位图谱第l 版南宁：广西 科学技术出版社，1 9 9 0 1 6 3 1 6 7 1 4 P e r r yE W a l k e rM ，G r a c eJ ，e ta 1 A c e t y l c h o l i n ei nm i n d ：an e u r o t r a n s m i t t e rc o r r e l a t eo fc o n s c i o u s n e s s ? T r e n d sN e u r c

41、 i 1 9 9 9 2 2 ：2 7 3 - 2 8 0 1 5D u d k i nK N 。C h u v a ，M a k a r o vF N e ta A l t e r a t i o n so ft h es e n s o r ya n d c o g n i t i v ec o m p o n e n t so fo p e r a t i v em e m o r yi nam o n k e ym o d e lo fA I z h e i m e r gd i s e a s e D o k lB i o lS c i 2 0 0 3 3 8 9 ：9 9 1 0

42、1 1 6 D e K o s k yS T 1 k o n o m o v i cM D ，S t y r e nS D ，e ta 1 U p r e g u l a t i o no fc h o l i n e a c e t y l t r a n s f e r a s ea c t i v i t yi nh i p p o e a m p u sa n df r o n t a lc o r t e x o fe l d e r l y s u b j e c t sw i t h m i l dc o g n i t i v ei m p a i r m e n t A n

43、nN e u r 0 1 2 0 0 2 。5 1 ：1 4 5 1 5 5 1 7 隋承光。尹元琴任常山A l z h e i m e r 病动物模型的构建及其分子病 理学的变化中国老年学杂志，2 0 0 5 ，2 5 ：1 0 6 9 1 0 7 1 1 8 M a u f i c eT L o c k h a nB P P r i v a tA A m n e s i ai n d u c e di nm i c eb yc e n t r a l l y a d m i n i s t e r e db e t a - a m y l o i dp e p t i d e si n v

44、 o l v e sc h o l i n e r g i cd y d u n c f i o n B r a i nR e s ，1 9 9 6 ，7 0 6 ：1 8 1 1 9 3 1 9 李广强，王小洁。元小冬，等益脑胶囊治疗阿尔茨海默病大鼠模型 病理改变的研究河北医药2 0 0 9 。3 I ：1 7 2 4 1 7 2 6 2 0G e e r t sH G r o s s b e r gG T P h a r m a c o l o g yo fa c e t y l c h o l i n e s t e r a s ei n h i b i t o r s a n dN -

45、 m e t h y l - D a s p a r t a t er e c e p t o r sf o rc o m b i n a t i o nt h e r a p yi nt h et r e a t m e n to fA l r k e i m e r l 3d i s e a s e JC l i nP h a r m a c o l ，2 0 0 6 ，4 6 ( S u p p l1 ) ：8 - 1 6 2 1B o t hG S 。M a t t i s o nJ A ，O t t i n g e rM A 。e la 1 A g i n gi nr h e s u

46、 sm o n k e y s ：t e l e v i l “ i c et oh u m a nh e a i t hi n t e r v e n t i o n s S c i e n c e 2 0 0 4 3 0 S ：1 4 2 3 1 4 2 6 2 2S a n i S T r a u lD 。K i l nK A e ta 1 D i s t r i b u t i o n ，p r o g r e s s i o na n dc h e m i c a l c o m p o s i t i o no fc o r t i c a la m y l o i d - b e

47、 t ad e p o s i t si na g e dr h e s u sm o n k e y s ： s i m i l a r i t i e st ot h eh u m a n A c t aN e u r o p a t h 0 1 2 0 0 3 1 0 5 ：1 4 5 1 5 6 2 3 P o d l i s n yM B ，S t e p h e n s o nD T ，F r o s c hM I ，e la 1 M i c r o i a j e e t i o no fs y n - 万方数据 3 1 8 4 t h e t i ca m y l o i db

48、 e t a p m t e i ni nm o n k e yc e r e b r a lc o r t e xf 越I st op r o d u c e a c u t en e u r o t o x i c i t y A mJP a t h o l 。1 9 9 3 1 4 2 ：1 7 2 4 2 4M a c l e a nC J B a k e rH F ，R i d l e yR M e ta 1 N a t u r a l l yo c c u r r i n ga n de x p e r - i m e n t a l l yi n d u c e db e t a - a m y l o i dd e p o s i t si nt h eb r a i n so fn H 盯K 噶e t s ( C a l l i t h r i xi a c c h u $ ) JN e u r a lT r a n s m ，2 0 0 0 ，1 0 7 ：7 9 9 - 8 1 4 2 5 吴玉娥，黄韧，李文德侧脑室持续灌注和海马急性注射A 1 3 对食蟹 猴的神经毒性作用中国神经精神疾病杂志。2 0 0 8 ，3 5 ：2 8 2 - 2 8 6 2 6 H a r k a n yT C h o l i