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1、成年猪和大鼠胰岛分离纯化的实验研究 黄跃南，吴德全，单世光，郭欣 （哈尔滨医科大学附属第二医院 普外科，黑龙江 哈尔滨 !“#$%） 摘要 目的选择最佳猪、 鼠胰岛的制备方法。方法采用不同的胶原酶消化法及不连续密度梯度纯化法。结 果选出了制备适合猪、 鼠胰岛的最佳方法。结论由于猪、 鼠胰腺结构的不同， 制备胰岛细胞应采取不同的消化 及纯化方法。 关键词 胰岛； 分离； 纯化； 猪； 鼠 中图分类号 6? （!“#$%(6;3 D3C E3;AF AG HI3H6I6 CJ CK9$)./1,.C 3B;5L =I6F B35I;3 6F2? CJ C J3I3 HI3H6I3FK:$,2+),
2、;3 D3C E3;AFC AG HI3H6I6 CJ C J3I3 GA25F A2K;/(-+2,3 F CI2B2I3 D3J335 CJ H65BI36C， ;3 F F;AFC AG C HI3H6I6； 收稿日期!+ #$ (# 基金项目黑龙江省自然科学基金资助课题 （!+$ 年） 作者简介黄跃南 （!+N) ） ， 男， 主治医师， 硕士。 糖尿病是常见的内分泌代谢性疾病， 它严重危 害人民身体健康。随着人们生活水平的提高， 生活 方式的改变， 老龄人口的增长， 糖尿病的发生率也明 显上升 ! ， 因此彻底治愈糖尿病是医学领域急待解 决的重要课题。胰岛移植是临床替代外源性胰岛素
3、治疗!型糖尿病最有希望的方法， 而胰岛移植物的 质量与数量是决定胰岛移植成功的关键， 理想的胰 岛移植物的制备方法能提供足够纯净、 存活、 具有良 好功能的胰岛和胰岛细胞。本文采用胰管内灌注胶 原酶消化和不连续密度梯度离心法来研究大鼠、 猪 胰腺胰岛的分离和纯化， 获得较为理想的效果。现 报告如下。 材料与方法 !K!动物和试剂 !O!O!76I 大白鼠， 体重在 )# P (#= 之间， 由我 校二院动物中心提供。 !O!O)市肉联厂提供的成年杂种活猪， 猪龄 !) P ), 个月， 体重在 !#Q= 以上。 !O!O(试剂： 胶原酶!型、 R 型、 SI65 （上海试剂二厂出品） ， 胰岛
4、素放射免疫试剂盒 （上海生物制品研究所出 品） 。 !K)鼠胰岛分离纯化的实验方法 !K)K!取胰方法： 大白鼠术前禁食 ! 日， 戊巴比妥 钠溶液 （(#E=XQ=） 腹腔内注射麻醉。按 M2I=;35 ) 报 道的方法稍加修改， 无菌操作打开腹腔， 于肝门总胆 管内插管 （ )% 号套管针 ） ， 结扎邻近十二指肠的远 端与插针的近端， 然后破心放血， 将含钙胶原酶! !#E? 从插管处逆行注入， 使胰腺膨胀， 破坏腺泡组 织， 迅速摘取胰腺， 将其置入含胶原酶!溶液的锥形 瓶中。 !K)K)胰岛分离纯化： 将锥形瓶置入 ($Y水浴中 震荡消化 !#E， 均在 无菌及 +条件下进行。 “?
5、5猪胰岛分离纯化的实验方法 “?5?“取胰方法： 猪被屠宰放血后， 在相对无菌条 件下， 仔细地取出整个胰腺， 用 + ()$* -./ 液冲 洗， 然后放入含 + -./ 液体的保温盒中， 迅速送 到实验室， 整个过程热缺血时间 0) ! 5)$%AIHCJ6 管吸收上两层胰岛 （以 “, ! 05,层为最多） 。用 :;， 均在无菌及 +条件下进行。 “?胰岛鉴定 经石蜡切片， 醛复红改良法染色镜检。 “?(胰岛计数 双硫腙染色， 取定量沉淀物镜下做胰岛计数， 计 数方法采用定量加样器在胰岛悬液中取样 5 次， 每 次 ()!*， 分别镜检计数双硫腙染色阳性细胞团数， 按 下面公式 计数胰
6、岛： 胰岛数 D 5 次细胞总数 K 5 L 0) L 样本总量 （$*） 。 “?#胰岛成活率测定 用台盼蓝染色显示成活率。 “?E胰岛纯度估计 用镜检胰岛数量与外分泌组织量之比来估 计 ( 。 “?8胰岛素测定 用双抗 M ;NO 放射免疫测定法。用于胰岛素释 放试验测定。 !结果 0?“分离纯化结果 0P“P“大鼠： 热缺血时间 （5 Q “） $%?(=,8,:， !$?$， ? （!） ： !:B，!$G， $ （!） ： !HI“ J 董维平， 张洪德， 王煜非， 等 “ 胰岛移植物质量鉴定方法的研究 # “ 中华器官移植杂志， !$?， !$ （J） ： )7+98 L， M,)
7、;-* #， .,;: N， ,8 614OP;C,-7, ),CC,D,-C,-8 C;,) A ， ,8 614 V-C(78;9- 9)61 C,68+ ;- :16(*+8,)+9(:, D;*: 67;1;868,: D6-7),6: +6)P,:8;-* 9) ;:1,8: ;:9168;9- # 4Q)6-: R)97， !$J， W/，L9,1 #，/1,X6-C)9 34 / :;BD1, B,8+9C 9 :86;-;-* ),:+ 6-C 7(18(),C ;:1,8: # 4Q)6-:D16-868;9-， !$?， JI （J） ： ?&HE?&$4 黑龙江省 !$G
8、 Y !$ 年麻疹流行病学分析 阎滨，安志杰，张卓 （黑龙江省卫生防疫站，黑龙江 哈尔滨 !IGG%） 关键词 麻疹； 流行病学； 疫苗 中图分类号3!?!“Z&文献标识码/ 文章编号!GGG !$GI （&GGG） GJ G&I& G! ! 根据发达国家和地区的经验， 麻疹将可能成为人类继消 灭脊髓灰质炎之后要消除的传染病。为研究和掌握我省麻 疹流行规律， 进一步控制和消除麻疹， 现将黑龙江省 !$G Y !$ 年传染病报告系统麻疹发病情况和流行特征分析如下。 流行概况： 我省自 !$? 年全面推行计划免疫以来， 麻疹 发病得到有效控制， 年平均发病率显著降低。!$G Y !$ 年， 全省共
9、报告麻疹 % H$I 例， 年平均发病率为 !“?$!G 万， 发 病率最高的是 !$& 年， 为 I4&!G 万， !$ 年发病率降至历史 最低点， 为 G4!$!G 万。 季节分布： 我省麻疹全年各月均有发病， 但有明显的季 节性， 发病高峰为 Y % 月份， 占全年病例总数的 ?&4 $G。 $G 年代以来， 随着麻疹病例数的减少， 高峰季节病例有集中 趋势， 且占全年病例的比例也稍有增加。 年龄别分布： 我省 !$G Y !$ 年麻疹发病占百分构成较 多的年龄组依次为 !G 岁 Y 组 （!I“&） 、 G 岁 Y 组 （$“HH） 、 !I 岁 Y 组 （?“$H） 、 &G 岁 Y
10、 组 （?“HI） 。$G 年代以来， 我省麻 疹年龄别发病规律有所改变， ! Y I 岁儿童发病比例减少， 而 大龄青少年和小于 ! 岁儿童发病比例增加， 出现麻疹发病年 龄向大龄后移和向 G 岁 Y 组前移现象。 职业别分布： !$?G Y !$ 年间， 我省麻疹发病以散居儿 童和学生为主， 分别占 ?“I&和 ?“!。与 ?G 年代比较 （散居儿童 %J“$， 学生 &“J） ， 散居儿童病例比例下降， 而学生所占比例有较大增高， 工人和农民发病也有所增加。 我省的麻疹控制工作已取得了一定成绩。进入 $G 年 代， 麻疹流行规律发生了一些变化。针对这些变化， 今后我 省麻疹控制工作的重点
11、应在保持较高的常规免疫接种率基 础上， 提高麻疹疫苗的加强免疫接种率， 加强完善麻疹监测 系统， 保证疫情报告及时性和准确性， 对高危人群适时开展 大规律强化免疫活动。此外， 我省近年 ! 岁儿童麻疹发病 也占有一定比例， 因此， 我省应考虑国内一些人的建议， 将麻 疹疫苗初免时间提前到 % 月龄。 &I&哈尔滨医科大学学报第 J “ “ “ “ “ “ “ “ “ “ “ “ “ “ “ “ “ “ “ “ “ “ “ “ “ “ “ “ “ “ “ “ “ “ “ “ “ “ “ “ “ “ “ “ “ “ “ “ “ “ “ “ “ “ “ “ “ “ “ “ “ “ 卷 收稿日期&GG
12、G GI & 万方数据 新建 ! 例人肺鳞癌细胞系 （正文见 “#$ 页） 图 ! 倒置显微镜下， 细胞大小不一， 单层贴壁生长， 有丝分裂相多见“% & !% 图 “ 扫描电镜下， 细胞表面有皱褶， 周边有微绒毛和指状突起& % 图 # 透射电镜下， 细胞有清晰的双核， 核膜不规则， 细胞周边有大量的微绒毛& (% 成年猪和大鼠胰岛分离纯化的实验研究 （正文见 “) 页） 图 ! 双硫腙染色大鼠胰腺消化后组织悬液在倒置显微镜下观察!% & !% 图 “ 双硫腙染色猪胰腺消化后组织悬液在倒置显微镜下观察!% & !% 图 # 石蜡包埋切片经醛复红改良法染色猪胰岛形态!% & !% 图 石蜡包埋切片经醛复红改良法染色大鼠胰岛形态!% & !% 肺腺癌高、 低转移细胞系 *+,-)$#、 *./01#23 中野生型 -(# 基因过表达研究 （正文见 “% 页） 图 ! *42-(# 感染的 *./01#23 细胞于 $ 5 !% 天后全部脱落死亡“% & !% 万方数据