实验性自身免疫性甲状腺炎动物模型的比较.pdf

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1、实验性自身免疫性甲状腺炎动物模型的比较 7 姜玲8 ，胡玲6 ，黄慧钟。 ( 南昌大学a 研究生院医学部2 0 0 7 级，南昌3 3 0 0 0 6 ；b 第三附属医院内分泌科，南昌3 3 0 0 0 8 ； C 研究生院医学部2 0 0 8 级，南昌3 3 0 0 0 6 ) 摘要：目的采用2 种不同方法建立实验性自身免疫性甲状腺炎的动物，比较两者的成功性、可靠性和可操作性。 为研究自身免疫性甲状腺疾病的发病机制及其治疗提供有效的动物模型。方法2 个实验组的大鼠分别使用单纯 的碘剂喂养和碘剂联合抗原免疫，分别建立动物模型，分别进行甲状腺组织学病理改变的观察和血清中甲状腺自 身抗体水平的测定

2、。结果2 个实验组与正常对照组相比，甲状腺组织中均可见炎症反应和炎症细胞浸润，血清中 甲状腺自身抗体的水平有不同程度的升高；且碘剂联合抗原免疫组的甲状腺炎发病率、抗体水平均要高于单纯碘 剂喂养组。结论采用碘剂联合抗原免疫所诱导的动物模型较好，与人类的桥本氏甲状腺炎具有相同的病理学基 础与表现，能更好地应用于对自身免疫性甲状腺疾病的发病机制及其治疗的研究。 关键词：动物模型；自身免疫性甲状腺疾病；动物，实验；大鼠 中图分类号：R 一3 3 2文献标志码：A文章编号：1 0 0 9 - - 8 1 9 4 ( 2 0 1 0 ) 0 3 0 0 0 7 - - 0 3 T h eC o m p a

3、 r i s o nb e t w e e nE x p e r i m e n t a l A u t o i m m u n eT h y r o i d i t i sA n i m a lM o d e l J I A N GL i n g 一，H UL i n g b ，H U A N GH u i z h o n 岔 ( a 2 0 0 7G r a d eo fM e d i c a lD e p a r t m e n to fG r a d u a t eS c h o o l ，N a n c h a n g U n i v e r s i t y ，N a n c h a

4、 n g3 3 0 0 0 6 ，C h i n a ；b D e p a r t m e n to fE 咒d o c r i 咒o Z o g 了，t h eT h i r dA f f i l i a t e d H o s p i t a lo fN a n c h a n gU n i v e r s i t y ，N a n c h a n g3 3 0 0 0 8 ，C h i n a ；e 2 0 0 8G r a d eo fM e d i c a l D e p a r t m e n to fG r a d u a t eS c h o o l ，N a n c h a

5、n gU n i v e r s i t y ，N a n c h a n g3 3 0 0 0 6 ，C h i n a ) A B S T R A C T ：0 b j e c t i v e T oc o m p a r et w od i f f e r e n tm e t h o d sf o re s t a b l i s h i n gt h em o d e lo fe x p e r i m e n t a la u t o i m m u n et h y r o i d i t i s ( E A T ) i nr a t sa n dt op r o v i d e

6、a ne f f e c t i v ea n i m a lm o d e lf o rf u r t h e r i n v e s t i g a t i n gt h ep a t h o g e n e s i sa n dt r e a t m e n to fa u t o i m m u n et h y r o i dd i s e a s e s M e t h o d s T h ee x p e r i m e n t a lg r o u p sw e r er e s p e c t i v e l yf e du s i n gi o d i n ea n di

7、o d i n ec o m b i n e da n t i g e ni m m u n i z a t i o n ， t h e nc o m p a r ew i t ht h ec o n t r o l s T h ep a t h o l o g i c a lo ft h et h y r o i da n dt e s tt h es e r u ml e v e l so ft h y r o i da u t o a n t i b o d i e sw e r ee x a m i n e da f t e re x p e r i m e n t R e s u l

8、 t sT h et w oe x p e r i m e n t a lg r o u p se o m p a r e dw i t ht h en o r m a lc o n t r o lg r o u p ，i n f l a m m a t o r yr e s p o n s ea n di n f l a m m a t o r yc e l li n f i l t r a t i o n w a sa b l et ob es e e ni nt h et h y r o i dt i s s u e ；t h es e r u ml e v e l so ft h y

9、r o i da u t o a n t i b o d i e sw i t hd i f f e r e n t d e g r e e so fi n c r e a s e T h ed i f f e r e n tl e v e l so ft h y r o i da u t o a n t i b o d i e sa l s oe x i s t e db e t w e e nt h et W Oe x p e r i m e n t a lg r o u p sw i t hs t a t i s t i c a ls i g n i f i c a n c e C o

10、n c l u s i o n T h ee x p e r i m e n t a lu s i n gi o d i n ec o r n b i n e da n t i g e n - i n d u c e da n i m a lm o d e lw i t hm o r ee f f e c t i v e n e s st h a no t h e r I th a st h es a m ep a t h o l o g i c a lb a s i sa n dp e r f o r m a n c ew i t hh u m a nH a s h i m o t o st

11、 h y r o i d i t i s I tc o u l db ea p p l i e dt ot h ea u t o i m m u n et h y r o i dd i s e a s ep a t h o g e n e s i sa n dt r e a t m e n tr e s e a r c h K E YW O R D S ：a n i m a lm o d e l ；a u t o i m m u n et h y r o i dd i s e a s e ；a n i m a l ，l a b o r a t o r y ；r a t s 收稿日期：2 0 0

12、 9 I I 一3 0 作者简介：姜玲( 1 9 8 2 一) ，女，硕士研究生，主要从事自身免疫性甲状腺疾病的发病机制与治疗研究。 通信作者：胡玲。女，主任医师，E - m a i l ：h u l m e d m a i l c o r n c n 。 万方数据 8 实用临床医学2 0 1 0 年第1 1 卷第3 期P r a c t i c a lC l i n i c a lM e d i c i n e ，2 0 1 壁! ! ! ! ! ! ! 塑! 三 自身免疫性甲状腺疾病( A I T D ) 是一种器官特 异性自身免疫性疾病，属于多基因遗传。主要包括 桥本甲状腺炎( H a

13、s h i m o t o St h y r o i d i t i s ，H T ) 、 G r a v e s 病( G r a v e s d i s e a s e ，G D ) 和产后甲状腺炎 ( p o s t p a r t u mt h y r o i d i t i s ，P P T ) 。随着饮食中含碘 量的增加、生活节奏的改变，加上内环境的影响，本 病的发病率呈现逐年增高的趋势，其发病率约为 0 3 1 5 10 0 0 人年，男女比例1 ；( 1 5 3 0 ) ，特别 是3 0 5 0 岁的女性发病率较高；遗传、妊娠、性别和 环境等多种因素共同作用，使患者免疫功能发生

14、紊 乱及甲状腺组织多种淋巴细胞浸润，从而产生一系 列针对甲状腺组织的自身抗体甲状腺球蛋白抗 体( T g A b ) 和甲状腺过氧化物酶抗体( T P O A b ) 等超 过正常导致自身免疫性甲状腺炎的发生与发展 1 之 。 目前H T 的病因和发病机制尚未完全阐明，实 验性自身免疫性甲状腺炎( e x p e r i m e n t a la u t o i m - m u n et h y r o i d i t i s ，E A T ) 动物与人类H T 具有相同 的病理学基础与表现，因而被广泛用于相关的研 究口 。本研究采用2 种不同方法建立E A T 动物模 型，通过比较两者的成功

15、性、可靠性及可操作性，为 今后深入研究A I T D 的发病机制及治疗提供有效的 动物模型。 皮下多点注射，每周1 次做安慰对照。 1 4 检测指标 分别于第0 、2 、4 、6 、8 周大鼠尾静脉取血，分离 血清并保存于一2 0 。采用E L I S A 间接法检测大 鼠血清中T g A b 、T m A b ，采用R I A 法检测F T 3 、 F T 4 。 1 5 甲状腺组织病理学改变的检查 取大鼠甲状腺组织，置于l o 中性福尔马林固 定，常规石蜡包埋切片，H E 染色，光镜下观察甲状 腺组织病理形态改变。包括滤泡大小、上皮形态、上 皮及滤泡间的淋巴细胞浸润。参考T a n gH

16、等H J 的炎症分级标准，光镜下观察甲状腺组织的炎症细 胞( 包括淋巴细胞、浆细胞、嗜中性粒细胞) 浸润程 度：1 级：炎症细胞在两个或多个甲状腺滤泡间聚 集；2 级：炎症细胞病灶可达一个甲状腺滤泡大 小；3 级：1 0 4 0 的甲状腺组织被炎症细胞取 代；4 级：超过4 0 的甲状腺组织被炎症细胞取 代。E A T 炎症分级标准：- 1 级为正常，1 、 2 级 为轻度，2 、 3 级为中度，3 4 级为重度。 1 6 统计学方法 应用1 3 0S P S S 统计软件处理，采用方差分 析，P 0 0 5 表示差异具有统计学意义。 1 材料与方法2 结果 1 1 动物及分组 雌性S D 大

17、鼠3 2 只，体质量1 2 0 1 4 0g ，由江 西中医学院实验动物中心提供，在江西省人民医院 动物房饲养。所有动物用标准饲料喂养，饮用自来 水。随机分成3 组：A 组( 行= 8 ) 为正常对照组，B 组 ( 竹= 1 2 ) 为碘剂喂养组，C 组( 7 = 1 2 ) 为碘剂联合抗 原免疫组。 1 2 主要试剂 甲状腺球蛋白( P o r c i n eT h y r o g i o b u l i n ，P T g ) 、 完全弗氏佐剂( F r e u n d ，Sa d j u v a n tc o m p l e t e ，C F A ) 、 不完全弗氏佐剂( F r e u

18、n d Sa a j u v a n ti n c o m p l e t e ， I F A ) ( 美国S i g m a 公司) ，N a I ( 上海宝新化工科技有 限公司) ，T g A b 和T P O A b 放射免疫检测试剂盒 ( 北京北方生物技术研究所) 。 1 3 方法 C 组大鼠初次免疫：取P T g 与C F A 等体积混 合充分乳化，在大鼠足垫部皮下注射P T g1 0 0p g 只。加强免疫：取P T g1 0 0b t g 只+ I F A 等体积混 合乳化，第1 4 天后在大鼠四肢内侧及背部皮下多点 注射，每周加强1 次至8 周结束。B 组和C 组大鼠 同时给予

19、碘化钠碘水喂养，现配现用，避光保存。A 组大鼠仅予以清洁自来水喂养。A 、B2 组在C 组 免疫的同时也予以生理盐水在大鼠四肢内侧及背部 2 1 甲状腺组织病理学改变 显微镜下观察到A 组大鼠甲状腺组织的甲状 腺滤泡发育成熟，滤泡腔充满胶质，分布均匀，滤泡 呈小叶状排列，小叶周围有少量纤维组织和血管，未 见炎细胞浸润( 封三图1 A ) 。B 组中患E A T 的有6 只，其中4 只大鼠甲状腺滤泡呈圆形或椭圆形，内充 深红色染胶质，滤泡胶质潴留上皮细胞增生，新滤泡 增生，间质水肿及毛细血管扩张，炎症分级为1 级； 另外2 只大鼠可见其的滤泡结构轻度被破坏，炎症 分级为2 级( 封三图1 B )

20、 。C 组中患E A T 的有8 只，其中有3 只大鼠的滤泡结构中度被破坏，约 2 0 的甲状腺组织被炎症细胞取代，炎症分级为3 级；另外有3 只炎症分级为2 级，还有2 只炎症分级 为1 级( 封三图1 C ) 。总的来说，有1 4 只大鼠符合 E A T 动物模型的病理改变，但所有大鼠中未出现严 重甲状腺炎改变，见表1 。 表1 各组甲状腺炎发病率情况的比较 万方数据 拳用临床医学2 0 1 0 年第1 1 卷第3 期P r a c t i c a l C l i n i c a lM e d i c i n e ，2 0 1 0 ，V o ll l ，N o3 2 2 甲状腺自身抗体滴度

21、测定 1 ) 大鼠血清T g A b 水平：B 组血清中T g A b 水平自第2 周逐渐升高，第8 周达到高峰。C 组血 清中T g A b 水平自第2 周开始升高，在第4 周达到 高峰，随后略有下降，在第8 周高于B 组( P 0 0 5 ) 。B 组血清中T g A b 虽然低于C 组，但高于A 组( P 0 0 5 ) ，见表2 。 2 ) 大鼠血清T m A b 水平：大鼠T m A b 水平 的变化与T g A b 相似，B 组血清中T m A b 水平自第 2 周逐渐升高，第8 周达到高峰。C 组血清中 T m A b 水平自第2 周开始升高，在第4 周达到高峰， 随后略有下降，

22、在第8 周高于B 组( P 0 0 5 ) 。B 组血清中T m A b 水平虽然低于C 组，但高于A 组 ( P O 0 5 ) ，见表2 。 表23 组自身抗体第8 周测定结果比较( i 士s ) 与A 组相比，* P 0 0 5 ；与C 组相比，P 0 0 5 3 讨论 1 9 1 2 年，H a s h i m o t o 对淋巴细胞性甲状腺炎进 行了描述，1 9 5 6 年，T G A b 首次在患者血清中得以 发现，随后T m A b 、T P O A b 、T R A b 、抗钠碘同向转 运体抗体、甲状腺胶质第二抗体、甲状腺细胞膜抗体 及T 4 、T 3 抗体等相继得以发现，其中

23、T g A b 、T P O A b 、T m A b 等试剂盒广泛应用于临床，成为判定自 身免疫性甲状腺炎的重要指标口 。 本次实验中，B 组的E A T 发病率为5 0 0 ，C 组的E A T 发病率为6 6 7 。病理切片提示：C 组 患有E A T 大鼠的炎症浸润程度比B 组严重；B 组 滤泡结构轻度破坏，而C 组滤泡结构中度破坏。C 组抗体水平也明显高于B 组，可见C 组的造模效果 较B 组好。在所有E A T 大鼠的甲状腺小叶内均可 见不同程度的炎症细胞浸润，但仅发生1 3 级甲状 腺炎，均未见4 级甲状腺炎。其原因可能是多方面 的，如动物种系的选择、实验误差、观察周期太短、给

24、药剂量不足等。通过实验对比也发现不论是单纯的 使用碘剂还是碘剂加抗原免疫联合诱导，动物体内 所生产的自身抗体的水平均有不同程度的改变，甲 状腺病理学也有变化。成功的E A T 模型指标包括 2 个方面：血清中含有高水平的甲状腺特异性抗 体，尤其是T g A b 、T P O A b 和T S H 受体抗体 ( T R A b ) 。使用T g 或T P O 抗原免疫动物可出现3 种抗体的显著升高。甲状腺组织中滤泡上皮细胞 9 嗜酸性变、坏死及大量淋巴细胞浸润，继而滤泡萎 缩，胶质减少，上皮细胞肿胀，体积增大，胞浆嗜酸 性，称A s k e n z a y 细胞，后期出现结缔组织增生和纤 维化改

25、变。本实验观察到C 组大鼠初次免疫后第 3 8 天血清T g A b 增高，约为正常大鼠的5 6 倍，与 B 组比较也高出约2 3 倍，这种现象被称为抗原决 定簇的扩散。在大多数自身免疫性疾病中，最初的 免疫反应只针对一个决定簇、随后扩散到同一靶组 织的其他蛋白质分子，称分子间扩散。T g 和T P O 均可引起甲状腺组织抗原决定簇的扩散，从而产生 其他甲状腺自身抗体。而甲状腺自身抗体升高是甲 状腺自身免疫功能紊乱的一个重要标志 6 。甲状腺 组织的炎症，特别是淋巴细胞的浸润，并非与自身抗 体同时出现。有研究认为，甲状腺自身抗体的出现 要早于甲状腺组织病理学改变，E A T 的甲状腺功能 可表

26、现为正常、低下或亢进 7 。 E A T 已成为研究人类自身免疫性甲状腺炎的 重要工具 8 ，而采用碘剂加抗原免疫联合诱导免疫 动物，建立的E A T 动物模型具有较高的成功性和 可靠性，且诱导的实验方法简单、经济、有效、易行、 可操作性强，目前已广泛应用于对自身免疫性甲状 腺疾病的发病机制及其治疗的研究。 参考文献： 1 F l y n nJC ，W a nQ ，P a n o sJC ，e ta 1 C o e x p r e s s i o no fs u s c e p t i b l e a n dr e s i s t a n tH L AC l a s sI It r a n s

27、 g e n e si nm u r i n ee x p e r i m e n t a l a u t o i m m u n et h y r o i d i t i s ：D Q 8m o l e c u l e sd o w n r e g u l a t eD R 3 一 M e d i a t e dt h y r o i d i t i s - J A u t o i m m u n i t y ，2 0 0 2 ，1 8 ：2 1 3 2 2 0 E 2 F o u n t o u l a k i sS ，T s a t s o u l i sA O nt h ep a t

28、h o g e n e s i so fa u t o i m m u F l et h y r o i dd i s e a s e ：a u n i f y i n gh y p o t h e s i s J C l i nE n d o c r i n o l ( O x f ) ，2 0 0 4 ，6 0 ：3 9 7 - 4 0 9 3 唐伟，贾悦，刘超，等实验性自身免疫性动物模型的建立 J 国外医学免疫学分册2 0 0 3 ，2 6 ( 4 ) ：2 1 1 2 1 4 4 T a n gH ，M i g n o nG o d e f r o yK ，M e r o n iPL

29、，e ta 1 T h ee f f e c t so f am o n o c l o n a la n t i b o d yt Oi n t e r f e r o n - g a m m ao ne x p e r i m e n t a l a u t o i m m u n et h y r o i d i t i s ( E A T ) ：p r e v e n t i o no fd i s e a s ea n dd e c r e a s eo fE A T s p e c i f i cTc e l l s J E u rJI m m u n o l ，1 9 9 3 ，

30、2 3 ( 1 ) ：2 7 5 2 7 8 5 S i n c l a i rD C l i n i c a la n dl a b o r a t o r ya s p e c t so ft h y r o i da u t o a n t i b o d i e s J A n nC l i nB i o c h e m ，2 0 0 6 ，4 3 ( P t 3 ) ：1 7 3 1 8 3 6 3R u w h o fC 。D r e x h a g eHA I o d i n ea n dt h y r o i da u t o i m m u n ed i s easei na

31、 n i m a lm o d e l s J T h y r o i d ，2 0 0 I ，1 1 ( 5 ) ：4 2 7 4 3 6 7 D e m i r b i l e kH ，K a n d e m i rN ，G o n eEN ，e ta 1 H a s h i m o t o St h y r o i d i t i si nc h i l d r e na n da d o l e s c e n t s ：ar e t r o s p e c t i v es t u d yo n c l i n i c a l e p i d e m i o l o g i e a

32、la n dl a b o r a t o r yp r o p e r t i e so ft h ed i s e a s e - J JP e d i a t r E n d o e r i n o lM e t a b 。2 0 0 7 。2 0 ( 1 1 ) ：1 1 9 9 1 2 0 5 8 M a n yMC ，M a n i r a t u n g aS ，D e n e fJF T h en o n o b e s ed i a b e t i c ( N O D ) m o u s ela na n i m a lm o d e lf o ra u t o i m m

33、u n et h y r o i d i t i s 口 E x pC l i nE n d o c r i n o lD i a b e t e s ，1 9 9 6 ，1 0 4 ( S 3 ) 1 1 7 2 0 ( 责任编辑：况荣华) 万方数据 大鼠局灶性脑缺血再灌注模型的制作及经验体会( 正文见第l 页) # 侧为假 木目m H 目，# 实目太R * 自色为缺m E ，a e i E 圈1 犬鼠脑“ c E 镕* 5 一氟脲嘧啶壳聚糖缓释微球的制备疑其体外药物缓释性观察( 正文见第4 页) 目1 单十徽球的目描电镜目目2 ；个m # 自描自目 一晶”一；。j j6 目35 氟嘧日m 球2 4h 自g “ # 蔽线目4m # E 7d 自的g ”# 实验性自身免疫性甲状腺炎动物模型的比较( 正文见第7 页) 目13 m 目状臁病m 片 “M H i “0 琶*x=x 匹 鞘 万方数据