浙江新分离汉坦病毒ZT71株S基因片段的克隆及序列分析.pdf

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1、文章编号： 1 0 0 2 - 2 6 9 4 （2 0 0 5） 0 7 - 0 5 7 0 - 0 4 浙江新分离汉坦病毒Z T 7 1株S基因片段的 克隆及序列分析 谢荣辉， 翁景清， 姚苹苹， 李婵， 徐芳， 朱函坪， 赵芝雅， 茅海燕， 朱智勇 摘要： 目的为了获得浙江省汉坦病毒基因组更为详尽的资料， 研究汉坦病毒的进化状况及变异程度， 为疫苗病毒株 的选择使用提供科学依据。方法本实验室利用R T - P C R方法扩增Z T 7 1株S基因片段并克隆入质粒载体， 进行核苷酸序列 测定及分析。结果 Z T 7 1株S基因由1 7 5 4个核苷酸组成， 只有一个开放读码框架， 共编码4

2、 2 9个氨基酸。与H T N型病毒 （7 6 - 1 1 8） 的核苷酸和氨基酸同源性分别为7 2 . 0 %和8 2 . 6 %， 与S E O型病毒 （S R- 1 1、 R 2 2、G u o 3、8 6 1 0） 核苷酸和氨基酸同源 性分别为8 8 . 4 %9 6 . 5 %和9 8 . 1 %9 9 . 0 %， 与其它型汉坦病毒的同源都很低。结论表明此分离的病毒为S E O型汉坦病 毒， 为进一步研究其进化和变异提供了有利条件。 关键词： 汉坦病毒； Z T 7 1株；S片段， 序列分析 中图分类号： R 3 7 3 文献标识码： A M e o l e c u l a r c

3、 l o n i n ga n dn u c l e t i d e s e q u e n c e a n a l y s i s o f t h eS s e g L e n t o f H a n t a n v i r u sZ T 7 1s t r a i n i s o l a t e d i nZ h e j i n a gp r o v i n c e X I ER o n g - h u i，WE N GJ i n g - q i n g，Y A OP i n g - p i n g，L IC h a n，X UF a n g，Z H UH a n g - p i n g Z

4、 H A OZ h i - y a，MA OH a i - y a n，Z H Uz h i - y o n g （Z h e j i a n gP r o v i n c i a lC e n t e r f o rD i s e a s eP r e v e n t i o na n dC o n t r o l， H a n g z h o u3 1 0 0 0 9，C h i n a） A B S T R A C T：T h eS s e g m e n t c D N Ao f h a n t a v i r u sZ T 7 1s t r a i nw a s o b s t a

5、i n e db y r e v e r s e t r a n s c r i p t i o na n dp o l y m e r s e c h a i nr e a c - t i o n，s u b s e q u e n t l y c l o n e d i n t op G E M - Tv e t o r . T h e s e q u e n c e o f p o s i t i v e r e c o m b i n a n t sw a s d e t e r m i n e db y t h em e t h o do f d i d i o x yc h a i

6、 n t e r m i n a t i o n，w h i c h r e v e a l e d t h a t t h eS s e g e m e n tw a s 1 7 5 4n u c l e o t i d e i n l e n g t hw i t hao p e nr e a d i n g f r a m e e n c o d i n gap r o t e i no f 4 2 9 a m i n o a c i d s . T h e c o m p a r i s o nw i t hH T Nt y p e （7 6 - 1 1 8s t r a i n） i

7、 n d i c a t e d t h a t t h e r ew a s 7 2 . 0 %o f h o m o l o g g a t t h en u c l e o t i d e l e v e l a n d 8 2 . 6 %o f h o m o l o g y a t t h e a m i n o a c i d l e v e l . C o m p a r i s o nw i t hS E Ot y p e （S R - 1 1， R 2 2，G u o 3，8 6 1 0s t r a i n s）s h o w e d8 8 . 4 %9 6 . 5 % h

8、 o m o l o g ya t t h e n u c l e o t i d e l e v e l，9 8 . 1 %9 9 . 0 %h o m o l o g y a t t h e a m i n o a c i d l e v e l . T h e r e s u l t s o f n u c l e o t i d e a n d a m i n o a c i d c o m p a r - i s o n s a tm o l e c u l a r l e v e l i n d i c a t e d t h a t Z T 7 1s t r a i n i s

9、S E OH a n t a n v i r u s . K E YWO R D S：H a n t a n v i r u s；Z T 7 1s t r a i n；Sg e n o m e s e g m e n t；s e q u e n c e a n a l y s i s 汉坦病毒 （H a n t a n v i r u s） 是引起肾综合征出血热 （H F R S） 的病原体， 属布尼亚病毒科， 其基因组由大 （L） 、 中 （M） 和小 （S） 3个基因片段的单股负链R N A 组成， 分别编码多聚酶、 外膜蛋白及核蛋白。汉坦病 毒目前可分为2 0型 亚型， 而且还不断有新的

10、型别或 亚型被发现 1 - 2 。在我国流行的主要是汉滩型 （H T N 型） 和汉城型 （S E O型） ， 可引起肾综合征出血热 （H F R S） 。其中汉坦病毒的S基因片段所编码蛋白在 病毒感染及复制过程中具有重要的作用 3 ， 而且S基 因片段具有相对的保守性， 进行序列分析及进化研究 对流行病学的调查具有举足轻重的意义， 可为疫苗毒 株的选择使用提供科学的依据。本文就2 0 0 3年浙江 新分离到的汉坦病毒Z T 7 1全S基因进行了测定及与 其它毒株进行比较， 探讨浙江分离株Z T 7 1与国内相 关病毒株的进化及变异情况。 1 材料与方法 1 .1 主要试剂 O n eT u

11、b eR T - P C R试剂盒购自 T a k a r a公司，R N A提取试剂盒式购Q i g e n公司，T a q 酶及质粒载体p G E M - T购自P r o m e g a公司， A g r o s e 割胶回收试剂盒购自上海博亚生物技术公司。 1 . 2 毒株来源汉坦病毒Z T7 1株由本实验室自 2 0 0 3年在浙江省天台县境内的褐家鼠肺组织中分 离， 病毒分离采用沙鼠腹腔接种法， 先将汉坦病毒抗 原阳性肺组织研磨制成悬液， 然后进行动物接种。 1 . 3 病毒R N A的制备将病毒接种到长满单层 作者单位： 浙江省疾病预防控制中心， 杭州 3 1 0 0 0 9 0

12、75 中 国 人 兽 共 患 病 杂 志 C h i n e s e J o u r n a l o f Z o o n o s e s 2 0 0 5，2 1（7） 的V e r oE 6细胞瓶中， 接种71 4 d后， I F A检查细 胞感染程度。当7 5 %以上的细胞有感染病毒特异 性荧光颗粒时， 胰酶消化感染细胞， 并抽提总R N A. 1 . 4 引物的设计与合成 用D N A S T A R对汉坦病毒 S基因进行比对， 选择汉坦病毒S基因的保守区， 应 用此软件设计引物， 引物由上海生物工程有限公司 合成。设计的引物如下： F 1：5-T A G G A G C A - G A

13、C T C C C T A A A G A G C T A C T-3 ；R 1：5-C T G - G C C T A G T T G T A T C C C C A T T G A T TG-3 ；F 2：5 - T C A G A A G C A C A C A C A A T G G G R A T A C -3 ； R 2：5- A G A C G C A T G C T C C C T A A A A A G A - C A A T C- 3 。 1 . 5 S基因c D N A合成 由F 1和R 1扩增片段A， 由F 2和R 2扩增片段B .用O n eT u b eR T -

14、P C R试剂 盒一步法扩增。A片段的克隆方法具体方法如下： 总R N A1 2 u l， 酶混合物1 u l， R N A酶抑制剂1l， d N T P5l， 上F 1和R 1各1l，D T T2 . 5l， 无R N A 酶水2 6 . 5 l， 反应体系为5 0l。R T - P C R反应条件 如下： R T反应条件5 0 0 3m i n，P C R条件为：9 4 预变性2 m i n， 9 4 变性3 0 s，5 6 退火3 0 s，7 2 延伸 2 m i n，3 0次循环后，7 2 延伸7m i n。B片段克隆的 具体方法同上。 1 . 6 目的片段的克隆和筛选扩增产物A片段，

15、 B 片段割胶纯化回收， 连接反应按P r o m e g a提供的 P G E M - TE a s yV e c t o r克隆k i t说明书进行， 连接产 物转化D H 5 a感受态细胞， 并涂于含氨苄表霉素的 L B平板上， 筛选并鉴定阳性克隆。 1 . 7 c D N A序列的测定与分析 筛选的阳性克隆 经P C R鉴定， 然后进行序列测定， 用A B IP R I S M B i g - D y e测序试剂盒在A B I 3 7 7自动测序仪上进行 测序， 并用生物学软件D N A S T A R对其进行序列的 比较及分析。 2 结果 2 . 1 R T - P C R扩增产物的

16、检测 在琼脂糖凝胶电 泳中检查R T - P C R扩增产物， 产物分子量分别在1 2 0 0b p，6 0 0b p左右， 与期望的扩增片段相符， 无非 特异性条带出现， 表明特异性地扩增了目的基因。 2 . 2 Z T 7 1株S基因全序列的测定及分析Z T7 1 株S基因片段由1 7 5 4个核苷酸组成 （G e n B a n ka c - c e s s i o nA Y 7 5 0 1 7 1） ， 由5N C R、 开放阅读框 （O R F） 和3 N C R3部分组成。与4株S E O型汉坦病毒 （S R- 1 1、 R 2 2、G u o 3、8 6 1 0） 的S片段同源性

17、分别为 9 6 . 1 %、9 6 . 2 %、8 8 . 4 %和9 6 . 5 %， 与H T N型7 6- 1 1 8的同源性为7 2 . 0 %， 与其它型汉坦病毒的同源 性较低 （见表1） 。序列分析表明Z T 7 1只有1个开 放读码框架， 起始密码子位于4 34 5个核苷酸， 终 止密码子位于1 3 3 0 1 3 3 2位核苷酸， 共编码4 2 9个 氨基酸， 与S E O型汉坦病毒标准株R 2 2仅有4个氨 基酸的差异， 同源性高达9 9 %， 与H T N型汉坦病毒 标准株7 6-1 1 8和D O B型汉坦病毒的氨基酸同源 性分别只有8 2 . 6 %和8 0 . 7 %

18、， 而与其它型别的汉坦 病毒氨基酸同源性更低， 见表1。 表1 Z T 7 1株与其它汉坦病毒型 （株） 之间S片段核苷酸和氨基酸序列的同源性比较 T a b l e . 1 C o L p a r i s o no f a L i n oa c i d s e q u e n c e （ t o p ） o fNp r o t e i na n d t h en u c l e o t i d e s e q u e n c e （b o t t o L）o f S s e g L e n t o f t h eZ T 7 1a n d o t h e rk n o w nh a n t a

19、 n v i r u s v i r u s s t r a i n7 6 - 1 1 8B A Y B C C D O B 8 6 1 0 K B R MO N MU LN YP U UR 2 2 S R - 1 1Z T 7 1I V E L M C G u o 3P HR O I S T O PS N 7 6 - 1 1 8* 6 3 . 4 6 3 . 6 8 2 . 3 8 2 . 8 6 1 . 9 6 2 . 5 6 2 . 2 6 2 . 7 6 1 . 4 8 2 . 8 8 2 . 8 8 2 . 6 6 2 . 3 6 1 . 5 8 2 . 6 6 1 . 6 6 1

20、. 86 36 1 . 8 B A Y5 9 . 1 * 9 2 . 1 6 2 . 5 6 2 . 7 7 3 . 4 8 8 . 1 9 2 . 5 8 7 . 47 36 2 . 5 6 2 . 5 6 2 . 5 7 5 . 8 8 4 . 4 6 2 . 7 7 6 . 5 8 3 . 4 7 4 . 18 6 B C C5 8 . 8 7 6 . 8 * 6 2 . 7 6 3 . 4 7 3 . 9 8 5 . 89 08 5 . 3 7 3 . 9 6 3 . 2 6 3 . 2 6 3 . 27 68 3 . 2 6 3 . 2 7 6 . 2 8 1 . 8 7 4 . 8

21、 8 3 . 2 D O B7 3 . 0 5 9 . 0 5 8 . 6 * 8 0 . 7 6 0 . 7 6 2 . 76 26 2 . 9 6 1 . 2 8 0 . 7 8 0 . 7 8 0 . 7 6 1 . 4 6 1 . 5 8 0 . 5 6 1 . 6 6 1 . 1 6 1 . 2 6 1 . 8 8 6 1 07 2 . 0 5 6 . 9 5 8 . 9 7 1 . 2 * 6 2 . 1 6 2 . 2 6 1 . 5 6 2 . 9 6 2 . 6 9 8 . 8 9 8 . 8 9 9 . 0 6 3 . 3 6 1 . 3 9 8 . 4 6 2 . 8 6

22、 0 . 86 36 1 . 5 K B R5 8 . 4 6 3 . 1 6 2 . 6 5 8 . 8 5 9 . 4 * 7 1 . 17 27 1 . 8 8 7 . 1 6 1 . 9 6 1 . 9 6 1 . 9 8 0 . 9 7 0 . 9 6 1 . 68 27 1 . 6 9 5 . 4 7 0 . 6 MO N5 8 . 4 6 6 . 0 6 5 . 3 5 7 . 5 5 7 . 1 6 1 . 5 * 8 3 . 49 67 0 . 66 26 26 27 5 . 3 8 4 . 1 6 2 . 2 7 4 . 6 8 2 . 3 7 1 . 69 3 MU L5

23、 8 . 1 7 4 . 1 7 4 . 3 5 8 . 3 5 8 . 4 6 4 . 0 6 5 . 6 * 8 3 . 47 36 1 . 1 6 1 . 1 6 1 . 1 7 5 . 8 8 2 . 5 6 1 . 1 7 4 . 8 8 0 . 97 38 2 . 1 N Y5 7 . 0 6 6 . 3 6 4 . 9 5 7 . 8 5 8 . 4 6 2 . 0 8 1 . 8 6 6 . 0 * 7 1 . 6 6 2 . 7 6 2 . 7 6 2 . 7 7 6 . 2 8 4 . 1 6 2 . 9 7 4 . 8 8 2 . 8 7 2 . 3 9 2 . 8 P

24、U U5 8 . 6 6 3 . 0 6 3 . 5 5 9 . 1 5 8 . 6 7 2 . 6 6 1 . 6 6 3 . 7 6 2 . 8 * 6 2 . 3 6 2 . 3 6 2 . 3 8 0 . 4 6 9 . 9 6 1 . 9 7 9 . 3 7 1 . 3 8 6 . 9 7 0 . 2 R 2 27 2 . 3 5 6 . 6 5 8 . 7 7 1 . 2 9 8 . 9 5 9 . 3 5 7 . 0 5 8 . 4 5 8 . 4 5 8 . 7 * 9 9 . 8 9 9 . 0 6 2 . 8 6 1 . 1 9 8 . 4 6 2 . 6 6 0 . 4

25、6 2 . 8 6 1 . 3 S R- 1 17 1 . 3 5 6 . 4 5 8 . 7 7 1 . 1 9 5 . 6 5 9 . 0 5 6 . 8 5 7 . 6 5 8 . 4 5 8 . 6 9 5 . 7 * 9 9 . 0 6 2 . 8 6 1 . 1 9 8 . 4 6 2 . 6 6 0 . 4 6 2 . 8 6 1 . 3 Z T 7 17 2 . 0 5 7 . 0 5 8 . 3 7 1 . 5 9 6 . 5 5 9 . 6 5 7 . 2 5 8 . 2 5 8 . 3 5 9 . 1 9 6 . 2 9 6 . 1 * 6 2 . 8 6 1 . 1 9

26、 8 . 1 6 2 . 6 6 0 . 4 6 2 . 8 6 1 . 3 I V5 9 . 2 6 3 . 2 6 3 . 5 5 8 . 8 5 8 . 4 7 0 . 9 6 2 . 2 6 3 . 8 6 3 . 6 7 0 . 9 5 8 . 5 5 8 . 3 5 8 . 4 * 7 4 . 1 6 2 . 3 8 8 . 2 7 3 . 9 8 1 . 6 7 4 . 4 E L M C5 7 . 5 6 6 . 8 6 6 . 6 5 7 . 0 5 9 . 1 6 2 . 4 6 8 . 5 6 8 . 4 6 9 . 7 6 1 . 8 5 9 . 2 5 8 . 6 5

27、 8 . 8 6 3 . 4 * 6 0 . 8 7 3 . 2 9 0 . 97 28 4 . 1 G u o 37 1 . 4 5 7 . 4 5 8 . 6 7 1 . 1 8 8 . 4 5 9 . 9 5 7 . 7 5 8 . 9 5 8 . 2 5 9 . 8 8 8 . 5 8 8 . 2 8 8 . 4 5 8 . 6 5 8 . 8 * 6 2 . 6 5 9 . 9 6 2 . 6 6 1 . 1 P H6 0 . 2 6 5 . 3 6 5 . 3 5 9 . 5 5 9 . 6 7 1 . 5 6 4 . 4 6 5 . 6 6 4 . 9 6 9 . 8 5 9 .

28、 6 6 0 . 0 6 0 . 5 7 6 . 1 6 4 . 2 5 9 . 3 * 7 2 . 58 27 3 R O I S5 6 . 2 6 8 . 1 6 7 . 1 5 7 . 7 5 7 . 6 6 3 . 7 6 8 . 4 6 7 . 9 6 8 . 2 6 4 . 8 5 7 . 7 5 7 . 9 5 7 . 8 6 3 . 8 7 4 . 2 5 8 . 4 6 4 . 3 * 7 2 . 58 3 T O P5 7 . 3 6 2 . 9 6 3 . 2 5 9 . 8 5 8 . 7 7 9 . 9 6 2 . 4 6 4 . 5 6 2 . 9 7 2 . 7

29、5 8 . 7 5 8 . 8 5 9 . 1 7 0 . 5 6 3 . 9 5 9 . 6 7 2 . 2 6 3 . 3 * 7 1 . 1 S N5 6 . 4 6 5 . 7 6 5 . 6 5 7 . 3 5 6 . 8 6 2 . 6 7 7 . 3 6 7 . 4 7 6 . 7 6 2 . 1 5 6 . 6 5 6 . 1 5 6 . 9 6 1 . 9 6 9 . 0 5 7 . 4 6 2 . 7 6 8 . 3 6 1 . 5 * 注： 本项研究所引用的病毒株及基因库上的序列号 （G e n e B a n ka c c e s s i o nn u m b e r

30、f o r t h e s e q u e n c eu s e d i n s e g m e n t c o m p a r i s o n s） ： B A Y （B a y o uv i r u s） ， L 3 6 9 2 9；B C C （B l a c k C r e e kC a n a l v i r u s） ，L 3 9 9 4 9；D O B （D o b r a v av i r u s） ，L 4 1 9 1 6；K B R（K h a b a r o v s kh a n t a v i r u s） ，U 3 5 2 5 5；MO N（H a n t a v i

31、 r u sM o n o n g a h e l a） ，U 3 2 5 9 1；MU L（M u l e s h o eh a n - t a v i r u s）U 5 4 5 7 5；N Y （N e wY o r kh a n t a v i r u s）U 0 9 4 8 8；P U U（P u u m a l av i r u s） ，U 2 2 4 2 3， I V（I s l aV i s t av i r u s） ，U 3 1 5 3 4；E L M C （E lM o r oC a n y o nh a n t a v i r u s） ，U 1 1 4 2 7；P H

32、 （P r o s p e c tH i l l v i r u s） ，M 3 4 0 1 1；R O I S（R i oS e g u n d oh a n t a v i r u s） ，U 1 8 1 0 0；T O P（T o p o g r a f o vh a n t a v i r u s） ，A J 0 1 1 6 4 6； S N （P u l m o n a r ys y n d r o m eh a n t a v i r u s） ，L 3 3 6 8 3； 7 6- 1 1 8，M 1 4 6 2 6；G u o 3，A F 1 8 4 9 8 8；S R- 1 1

33、，M 3 4 8 8 1；R 2 2，A F 4 8 8 7 0 7，8 6 1 0，A F 2 8 8 6 4 3 175 2 0 0 5，2 1（7） 中 国 人 兽 共 患 病 杂 志 C h i n e s e J o u r n a l o f Z o o n o s e s 2 . 3 系统进化树分析氨基酸和核苷酸进化分析 结果可见， Z T 7 1与日本分离株S R- 1 1、 河北分离株 8 6 1 0和中国分离株R 2 2处于同一分枝， 而与浙江分 离株G u o 3则不处于同一分枝， 表明Z T 7 1与S R- 1 1、R 2 2和8 6 1 0来源于共同的病毒进化源，

34、见图2。 图1 T 7 1株S基因片段全基因核苷酸及编码的N蛋白的氨 基酸序列 F i g . 1N u c l e o t i d ea n dd e d u c e da L i n oa c i ds e q u e n c e so fS g e n o L e s e g L e n t o fZ T 7 1s t r a i n 3 讨论 以往对汉坦病毒的型别大都是通过血清学方法 确定， 由于此类病毒的结构相似， 存在着交叉反应， 导致血清学鉴定的局限性， 影响对它的正确鉴定， 因 此， 通过对病毒基因序列的测定和分析可进一步确 定它的型别， 为汉坦病毒分子流行流行病学及生物 学特

35、性的进一步深入研究提供了依据。汉坦病毒S 基因所编码的蛋白是影响病毒遗传特性及感染力的 重要因素之一， 与汉坦病毒M基因相比其核苷酸和 氨基酸变异都较小， 因此对汉坦病毒的进化和变异 研究可通过对S基因的测定和分析来获取， 为进一 步对各基因型或亚型病毒生物学表型研究提供理论 依据。 本研究从浙江省江天台县境内的褐家鼠分离得 到的汉坦病毒Z T 7 1， 设计引物后以一步法R T - P C R 扩增得到S基因的两个片段并将其克隆入T载体 进行测序， 发现Z T 7 1株S基因由1 7 5 4个核苷酸组 成， 其中5 N C R由4 2个核苷酸组成， 开放阅读框架 由1 2 9 0个核苷酸组成

36、， 3N C R由4 2 2个核苷酸组 成。Z T 7 1株5 N C R与其它汉坦病毒具有较高的 同源性， 各血清型及同型毒株之间也较少变异。 Z T 7 1株只有一个主要的编码N蛋白的O R F， 起始 位置为第4 3个核苷酸， 终止于第1 3 3 2个核苷酸， 编 码4 2 9个氨基酸， 同S E O及H T N所编码的氨基酸 个数相同， 比S N型、 E L M C、R O I S和B A Y型的N 蛋白多一个氨基酸， 但比I V型、 K B R型、P H型、 P UU型及T O P型少4个氨基酸。其中Z T 7 1株与 四株S E O型汉坦病毒S R-1 1， R 2 2，G u o

37、 3和8 6 1 0 株的氨基酸同源性分别为9 9 . 0 %， 9 9 . 0 %，9 8 . 1 % 和9 9 . 0 %， 与H T N型7 6 - 1 1 8和D O B型汉坦病毒 氨基酸同源性分别为8 2 . 6 %和8 0 . 7 %， 而其他型汉 坦病毒的同源性则更低， 推测其为S E O型汉坦病 毒。汉坦病毒的S基因相对于L、 M片段而讲， 具有 相对保守性， 但是汉坦病毒的3 N C R具有高度的 变异性， 不同型别汉坦病毒此区域的长度从7 5 4 n t （S N） 到3 3 1 n t（P H） 不等， 同型别的汉坦病毒此区域 的长度也不同。Z T 7 1株3 N C R

38、具有4 4 2个核苷 酸， 与S E O型汉坦病毒3 N C R具有高度的同源性， 与S E O型 的 汉 坦 病 毒S R-1 1，R 2 2，G u o 3和 H B 8 6 1 0的同源性分别是9 3 . 6 %、9 4 . 5 %、9 0 . 8 %和 9 4 . 6 %， 而与其它型汉坦病毒的3N C R的同源性 都低于6 7 %， 与S i g m o d o n t i n a e， A r v i c o l i n a e亚科类 动物所携带的汉坦病毒3N C R的同源性更差。 系统进化树可以分为两大类， 一类为亚洲地区 所分离到的H T N型、 S E O型和D O B型汉坦

39、病毒， 275 中 国 人 兽 共 患 病 杂 志 C h i n e s e J o u r n a l o f Z o o n o s e s 2 0 0 5，2 1（7） 图2 Z T 7 1株病毒与其它汉坦病毒株的S基因 （A） 和N蛋白 （B） 的系统进化树分析结果 F i g . 2 P h y l o g e n e t i c r e l a t i o n s h i po f h a n t a n v i r u s b a s e do nn u c l e o t i d e s e q u e n c ed i f f e r e n c e s i n t h e

40、 S s e g L e n t s （A）a n da L i n oa c i d s e - q u e n c ed i f f e r e n c e s i nNp r o t e i n （B） 注： 本项研究所引用的病毒株及基因库上的序列号 （G e n e B a n ka c c e s s i o nn u m b e r f o r t h e s e q u e n c eu s e d i ns e g m e n t c o m p a r i s o n s） ： B A Y （B a y o uv i r u s） ， L 3 6 9 2 9；B C C （B

41、 l a c kC r e e kC a n a l v i r u s） ， L 3 9 9 4 9；D O B （D o b r a v av i r u s） ， L 4 1 9 1 6；K B R （K h a b a r o v s kh a n t a v i r u s） ， U 3 5 2 5 5；MO N （H a n t a v i r u sM o n o n g a h e l a） ， U 3 2 5 9 1；MU L （M u l e s h o eh a n t a v i r u s） U 5 4 5 7 5；N Y （N e wY o r kh a n t a

42、 v i r u s） U 0 9 4 8 8；P U U （P u u m a l a v i r u s） ， U 2 2 4 2 3，I V （I s l aV i s t av i r u s） ， U 3 1 5 3 4；E L M C （E lM o r oC a n y o nh a n t a v i r u s） ， U 1 1 4 2 7；P H （P r o s p e c tH i l l v i r u s） ， M 3 4 0 1 1；R O I S （R i oS e g u n d oh a n t a v i r u s） ， U 1 8 1 0 0；T O

43、P （T o p o g r a f o vh a n t a v i r u s） ， A J 0 1 1 6 4 6；S N （P u l m o n a r y s y n d r o m eh a n t a v i r u s） ， L 3 3 6 8 3；7 6 - 1 1 8，M 1 4 6 2 6；G u o 3，A F 1 8 4 9 8 8；S R- 1 1，M 3 4 8 8 1；R 2 2，A F 4 8 8 7 0 7，8 6 1 0，A F 2 8 8 6 4 3 另一类为欧洲、 南北美洲所分离到的P UU、 N Y型 等汉坦病毒。研究表明汉坦病毒除具有宿主信赖性

44、外， 还具有其地理的簇集性 4 - 5 。浙江省分离到的 Z T 7 1与亚洲所分离得到的H T N型，S E O型及D O B 型处于同一大枝， 而与欧洲、 南美洲等分离到的 P UU，T u l a等汉坦病毒差异较大， 而且Z T 7 1株病毒 在进化分枝图上与S R - 1 1， R 2 2和8 6 1 0处于同一分 枝， 也即在进化上它们高度同源， 提示Z T 7 1与S R - 1 1及R 2 2病毒可能是同一起源的病毒， 而与浙江 分离株G u o 3则不在同一分枝上， 两者核苷酸和氨 基酸的差异分别为1 1 . 6 %和1 . 9 %， 可能属于不同 的亚型， 研究表明浙江省可能

45、潜伏着不同于以前 S E O型汉坦病毒的其他亚型， 有待继续研究分析。 参考文献： 1 Y a s h i n aLN，P a t r u s h e vNA，I v a n o vLI，e t a l . G e n e t i cd i v e r s i t yo f H a n t a a n v i r u sa s s o c i a t e dw i t hh e m o r r h a g i cw i t hr e n a ls y n d r o m ei n t h e f a r e a s t o fR u s s i a J. V i r u sR e s e a

46、r c h， 2 0 0 0，7 0：3 1 - 4 4 . 2 S h iX，L i a n gM，H a n gC，e t a l . N u c l e o t i d e s e q u e n c e a n dp h y l o g e n e t i c a n a l y s i s o f t h em e d i u m （M） g e n o m i cR N As e g m e n t s o f t h r e eH a n t a n - v i r u s i s o l a t e d i nc h i n a a J. V i r u sR e s e a

47、r c h， 1 9 9 8，5 6：6 9 - 7 6 . 3M e y e rBJ， S c h m a l j o h nCS . P e r s i s t e n th a n t a n v i r u s i n f e c t i o n s：c h a r - a c t e r i s t i c s a n dm e c h a n i s m s a J. T r e n d sM i c r o b i o l . 2 0 0 0 F e b； 8 （2） ： 6 1 - 6 7 . 4 S i b o l dC，M e i s e lH，K r u g e rD，H

48、，e t a l . R e c o m b i n a t i o n i nh a n t a n v i r u s e v o l u t i o n：A n a l y s i so fg e n e t i c l i n e a g e s f r o mS l o v a k i aa J. JV i r o l， 1 9 9 9，7 3：6 6 7 - 6 7 5 . 5B o w e nM D，G e l b m a n nM，K s i a z e kTG， e ta l . P u u m a l av i r u sa n d t w o g e n e t i c v a r i a n t s o fT u l av i r u s a r ep r e s e n t i nA u s t r i a nr o d e n t s a J. JM e dV i r o l， 1 9 9 7，5 3：1 7 4 - 1 8 1 . 收稿日期： 2 0 0 5 - 0 1 - 2 6； 修回日期：2 0 0 5 - 0 2 - 1 7 375 2 0 0 5，2 1（7） 中 国 人 兽 共 患 病 杂 志 C h i n e s e J o u r n a l o f Z o o n o s e s