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1、! 墅堕! ! ! ! = ! ! Q ! C N l 2 一1 3 5 2 N 实验室科学 L A B O R A T O R YS C I E N C E 第1 3 卷第2 期2 0 1 0 年4 月 V 0 1 1 3N o 2 A p r 2 0 1 0 硼酸缓冲液应用于电泳实验的效果分析 尹丽，王永和，何弘水 ( 漯河医学高等专科学校，河南漯河4 6 2 0 0 0 ) 摘要：血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳是医学院校乍物化学实验中的重要实验，传统巴比妥缓冲液具有毒性且 不经济，该文旨在研究硼酸缓冲液的效果。采用D Y l 型电泳仪配套水平电泳槽进行醋酸纤维薄膜电泳，控 制电流时间和室内温度
2、。显示硼酸缓冲液电泳町以分离出5 条清晰的蛋白区带，并且电泳1 0 次后仍然效果良 好。由此得出离子强度为0 0 8 的硼酸缓冲液完全可以替代巴比妥，无毒且经济，值得推广应用。 关键词：血清蛋白电泳；硼酸缓冲液；巴比妥缓冲液；离子强度 中图分类号：R 一3 3 1文献标识码：Bd o i ：1 0 3 9 6 9 j i s s n 1 6 7 2 4 3 0 5 2 0 1 0 0 2 0 5 6 S t u d yo nt h ee f f e c to ft h ea p p l i c a t i o no fb o r a t es a l i n e b u f f e ri nt
3、 h es e r u mp r o t e i ne l e c t r o p h o r e s i se x p e r i m e n t Y I NL i ，W A N GY o n g - h e ，H EH o n g s h u i ( L u o h eM e d i c a lC o l l e g e ，L u o h e4 6 2 0 0 0 ，C h i n a ) A b s t r a c t ：T h es e r u mp r o t e i ne l e c t r o p h o r e s i sonc e l l u l o s ea c e t a
4、 t em e m b r a n ei sa ni m p o r t a n te x p e r i m e n t i nm e d i c a lc o l l e g e T r a d i t i o n a lb a r b i t u r a t eb u f f e ri sp o i s o n o u sa n de x p e n s i v e T h i ss t u d ya i m st ot e s t t h ee f f e c to fb o r a t es a l i n eb u f f e r D Y - Ie l e c t r o p h
5、o r e s i sw i t hh o r i z o n t a le l e c t r o p h o r e s i st a n ki su s e di n c e l l u l o s ea c e t a t em e m b r a n ee l e c t r o p h o r e s i st oc o n t r o lc u r r e n ti n t e n s i t ya n dr o o mt e m p e r a t u r e I tc a nb e s e p e r a t e df i v ec l e a rb a n d si nb
6、o r a t es a l i n eb u f f e ra n dg o o de f f e c t sC a l lb es t i l lo b t a i n e da f t e r10t i m e se l e c t r o p h o r e s i s B a r b i t u r a t eb u f f e rc a nb er e p l a c e db yb o r a t es a l i n eb u f f e r ( I = 0 0 8 ) c o m p l e t e l y A n d i ti sn o n - p o i s o n o
7、u sa n de c o n o m i c a l T h em e t h o di sf e a s i b l ef o rw i d ea p p l i c a t i o n K e yw o r d s ：s e r u mp r o t e i ne l e c t r o p h o r e s i s ；b o r a t es a l i n eb u f f e r ；b a r b i t u r a t eb u f f e r ；i o n i cs t r e n g t h 生物化学是医学院校的专业基础课，而实验是 验证理论知识的莺要环节。其中一项基本的实
8、 验技术就是电泳。电泳中尤以醋酸纤维薄膜电泳 ( 以下简称电泳) 简便、直观，实用旧。4J ，所以此实验 开出率很高。实验中，传统的缓冲液为p H8 6 的巴 比妥及巴比妥钠，其离子强度为0 0 6 。然而巴比妥 有毒性，容易引起药物滥用，长期接触会产生毒性， 加之巴比妥价格较高，学生大量使用，费用较贵。寻 找一种效果良好、价格低廉、相对无毒的缓冲液替代 品十分必要J 。通过长期的反复实验，认为硼酸缓 冲液符合上述要求。 基金项目：漯河医学高等专科学校科研项目( 项目编号： 2 0 0 9 - L M C - S 1 5 ) 。 1 材料与方法 1 1 仪器材料 ( 1 ) D Y l 型电泳
9、仪配套水平电泳槽；2 6 P 离 心机。 ( 2 ) 试剂材料及缓冲液：硼酸一磷酸二氢钾 ( p H 8 6 ，离子强度分别为0 0 8 和0 1 1 ) ；染色液： 氨基黑1 0 B 。浸出液：0 4m o l L 氢氧化钠；透明液： 冰醋酸：无水乙醇( 体积比l ：4 ) 6 - 7 ；醋酸纤维薄膜 2 x 8 c m ；正常人血清。 1 2 方法 分别用离子强度为0 0 8 和0 1 l 的硼酸缓冲液 实验。操作步骤如下。 ( 1 ) 浸泡：将醋酸纤维薄膜不重叠浸泡在缓冲 万方数据 尹丽，等：硼酸缓冲液应用于电泳实验的效果分析 1 5 5 液中3 0 m i n ，薄膜无白斑； ( 2
10、) 点样：用镊子取出薄膜，用滤纸吸去缓冲 液，粗糙面朝上，平放在桌面上。用点样器蘸取血 清，在距端线约1 5 处点样，保证点成一条均匀 直线； ( 3 ) 电泳：粗糙面朝下，点样端置于负极，平衡 搭在纱布桥上，盖上电泳槽盖，平衡1 0 r a i n 。通电， 电压1 6 0 V ，电流0 6 m A c m 薄膜，时间4 5 m i n ； ( 4 ) 染色：用镊子将薄膜取出，浸入染色液5 m i n 左右，持续缓慢摇动染色肌，保证薄膜间无重叠； ( 5 ) 漂洗：从染色液中取出薄膜，漂洗至背景 发白； ( 6 ) 透明：薄膜自然干燥后，放人透明液中 2 m i n ，取出，贴在洁净的载玻片
11、上，保证无气泡。干 燥即可J 。 2 结果 两种离子强度下硼酸缓冲液的电泳图见下：图 1 ( a ) 为离子强度0 0 8 ，图l ( b ) 为离子强度0 1 l 。 点样点位置相同。 ( a )( b ) l ：0 0 8I = 0 1 l 图I 两种离子强度下电泳图 3 讨论 从实验结果看，两种离子强度( O 0 8 和0 1 1 ) 下，均可分离出五条区带，但后者分离效果过于紧 凑，仅一1 球蛋白很模糊，主要原因由于离子强度偏 大，电泳偏移率低，造成五种蛋白分离不清J 。图 ( a ) 则能明显看出五条蛋白区带。 总体来说，硼酸缓冲液的效果优于巴比妥。离 子强度为0 0 8 的硼酸缓冲
12、液分离出的五条带清晰 可见，分离良好。 研究证实，随着电泳次数的增加，巴比妥缓冲液 的p H 发生变化，且阳极变化明显，导致电流强度、 蛋白迁移率、蛋向区带均变小。故巴比妥缓冲液实 验6 次左右就应更换，否则会发生明显拖尾现 象Jo I 。而硼酸缓冲液实验1 0 次之后蛋白仍然分离 清晰，相当于延长了缓冲液的寿命，降低了成本。 4结论 传统巴比妥缓冲液有毒性，实验中迫切需要找 出一种无毒替代品。从实验看，离子强度为O 0 8 的 硼酸缓冲液无疑是一种很好的选择，效果和传统的 巴比妥缓冲液无异。在保证醋酸纤维薄膜实验教学 质量的前提下，无毒且经济，完伞可以使用。对于加 强牛物化学实验教学和教学经
13、费紧张这对矛盾有一 定的缓解。经过我校大范围学生对比实验( 一半学 生用传统巴比妥缓冲液，一半学生用硼酸缓冲液实 验) ，证明效果良好。 参考文献( R e f e r e n c e s ) ： I 周丽哑，高静，吴兆亮，等血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验的 改进J 1 生物学杂志2 0 0 8 。2 5 ( 2 ) ：6 7 6 7 2 M M S a t w e k a r R e u s eo fc e l l u l o s ea c e t a t em e m b r a n es t r i p sf o r p r o t e i na n dh a e m o g l o b
14、i ne l e c t m p h o r e t i ea n a l y s i s J I n d i a nJM e d S e i ，1 9 9 7 。5 1 ( 4 ) ：1 1 3 - 1 1 4 3 R y o k oM a e h i i ，R y oK u b o t a ，N o b u oH i r a t 8 u k a U r i n a r yp r o t e i n f r a c t i o ni nh e a l t h ys u b j e c t su s i n gc e l l u l o s ea c e t a t em e m b l a
15、l l ee l e c t r o p h o r e s i sf o l l o w e db yc o l l o i d a l s i l v e rs t a i n i n g J J o u r n a lo f C l i n i c a lL a b o r a t o r yA n a I y f i s ，2 0 0 4 ，1 8 ( 4 ) ：2 3 1 - 2 3 6 4 董彩霞，黄建华，祝勇醋酸纤维索薄膜电泳分离禽卵蛋白质 J 光谱实验室。2 0 0 7 ，2 4 ( 5 ) ：8 0 0 - 8 0 2 5 J e f f m yA m b l e r ，M
16、a r t i nR o d g c m T w oN e wN o n - B a r b i t u r a t eB u f f - e l Bf o rE l e c t m p h o m s i so fS e r u mP r o t e i n sO nC e l l u l o s eA c e t a t e M e m b r a n e s J C l i n i c a lC h e m i s t r y ，1 9 8 0 。2 6 ( 8 ) ：1 2 2 1 6 杨艳梅，杨萍g t t l f , , l 做好血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验 J 一I U t -
17、：职业教育2 0 0 7 ，2 5 ( 9 ) ：1 1 9 7 芦晓虹，裴秀英。孙毛宁，等W i s m r 大鼠皿清蛋白醋酸纤维素 薄膜电泳的研究 J 宁夏医学杂志，2 0 0 2 ，2 4 ( 2 ) 8 3 8 陆克琼“I I L 清蛋白醋酸纤维薄膜电泳”实验须注意的几个环 节 J 卫生职业教育。2 0 0 5 ，2 3 ( 1 7 ) ：1 0 8 9 袁会荚浅谈缓冲液离子强度对电泳迁移率的影响 J 卫生 职业教育，2 0 0 4 ，2 2 ( 1 8 ) ：1 5 7 1 0 伊德林，江岩，李咏醋纤蛋白电泳法巴比妥缓冲液使用时效 的分析 J 沈阳医学院学报，2 0 0 5 ，7 ( 2 ) ：1 2 5 收稿日期：2 0 0 9 一1 2 0 3 修稿日期：2 0 1 0 0 4 0 2 作者简介：尹晤( 1 9 8 0 一) 。女，山东聊城人，硕士，讲师，主要 研究方向为生物化学与分子生物学。 万方数据