离体大鼠肾脏灌流技术在发现和评价促尿酸排泄药物中的初步应用.pdf

《离体大鼠肾脏灌流技术在发现和评价促尿酸排泄药物中的初步应用.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《离体大鼠肾脏灌流技术在发现和评价促尿酸排泄药物中的初步应用.pdf（5页珍藏版）》请在三一文库上搜索。

1、1 4 5 2中国药理学通报 C h i n e s e P h a n n a c o l o g i c a l B u l l e t i n 2 0 0 6 D e c ; 2 2 ( 1 2 ) : 1 4 5 2 一 6 离体大鼠肾脏灌流技术在发现和评价 促尿酸排泄药物中的初步应用 朱深银 ， ， 周远大 ， ， 刘庆山 ,3 ， 杜冠华 ( 1 . 中国医学科学院药物研究所， 北京1 0 0 0 5 0 ; 2 . 重庆医 科大学附一院临床药 理研究室 重庆 中 国图书分类号: R - 3 2 2 ; R 3 2 2 . 6 1 R 9 6 5 . 1 4 0 0 0 1 6 ;

2、 3 . 中国药科大学药学院， 江苏南京 2 1 0 0 0 9 ) ;R 4 5 2 ; R 5 8 9 . 7 ; 文献标识码: A 文章编号: 1 0 0 1 一 1 9 7 8 ( 2 0 0 6 ) 1 2 一 1 4 5 2 一 0 5 摘要: 目的 为建立发现和评价促尿酸排泄药物作用的离体 模型， 采用离体大鼠肾脏灌流技术， 观察尿酸在离体肾脏中 排泄特点和丙磺舒对尿酸排泄影响。方法制备离体大鼠 肾 脏灌流模型， 随机分为对照组和丙磺舒处理组， 以含复方 氨基酸和6 5 g “ L - 牛血清白蛋白的K - H灌流液循环灌流 9 0 m i n ， 定时收集导尿管流出液和灌流液，

3、 测定其中菊粉、 钠、 葡萄糖及尿酸含量， 计算肾功能参数和尿酸排泄情况。 结果离体灌流肾脏的肾小球滤过率， 尿量， 肾小管重吸收 水、 钠、 葡萄糖百分率等肾功能参数在灌流的9 0 m in 期间处 于稳定的生理范围内; 对照组灌流肾脏尿酸排泄分数、 尿酸 清除率及9 0 m i n内总尿酸排泄量分别为3 0 %, 0 . 3 0 m l L 一 和巧h ,m o l ， 与 对照 组比 较， 丙磺舒 使离 体肾 脏尿酸排泄 分别提高3 6 %, 5 4 %和9 9 %。结论 离体大鼠肾脏灌流技 术可用于发现和评价促尿酸排泄药物作用。 关键词: 离体肾脏灌流; 尿酸排泄; 大鼠 离体肾 脏灌

4、流( i s o l a t e d p e r f u s e d ,k i d n e y , I P K ) 技 术是应用比 较早的离体器官实验方法， 最早被用来 研究肾脏的生理和生化功能， 现在成为药物处置研 究的常用方法， 主要用于研究药物肾脏排泄机制、 药 物肾脏代谢、 排泄及药物的相互作用和肾功能等方 面， 对发现和评价药物肾脏排泄及其相互作用具有 特 别的 价 值 一 。 尿酸为嗓吟代谢产物， 生理浓度下可发挥抗氧 化作用， 但另一方面又表现为有害的作用。人们最 早了解的尿酸病理作用是尿酸在体液中析出， 形成 尿 酸 盐晶 体， 引起痛风。 但近 来研究发现， 血液 收 稿日

5、期: 2 0 0 6 - 0 7 - 3 0 ， 修回日 期: 2 0 0 6 - 0 9 - 1 6 基金项目: 国家高新技术研究发展计划( 8 6 3 计划) 重大专项基金资 助项目( N o 2 0 0 4 A A 2 7 3 7 8 2 ) 作 者 简介: 朱深 银( 1 9 7 1 一 ) ， 男， 博士生， 讲师， T e l : 0 1 0 -6 3 1 3 1 5 7 1 , E - m a i l : z h u s h e n y i n 0 4 8 6 s i n a . c o m; 杜冠 华( 1 9 5 6 一 ) ， 男， 教授， 博士生导师， 研究方向: 新药

6、发 现 和 评价， 通 讯 作者， T e l - 0 1 0 - 6 3 1 6 5 1 8 4 , E - m a il : d u g h . i m m . ac. cn 中可溶性尿酸诱导血管内皮功能障碍、 促进血管平 滑肌增殖， 参与高血压、 血管和肾脏疾病的发生发 展， 可能是这些疾病的一个重要和独立的危险因 素4 - 7 1 。 因 此 研究 抑 制尿 酸 生 成或 促 进尿酸 排泄的 药物又引起了制药企业的兴趣。 体内 尿酸2 / 3 - 3 / 4 由 肾 脏经尿排出体外， 这使 得用肾脏灌流方法来发现和评价促尿酸排泄药成为 可能。但尿酸在离体肾脏的排泄特点及用离体肾脏 灌流

7、模型评价化合物对尿酸排泄影响鲜有文献报 道。本文建立离体肾脏灌流模型， 观察尿酸排泄特 点及丙磺舒对尿酸排泄影响， 旨在为发现和评价促 尿酸排泄药物作用提供一种有用手段。 1 材料 1 . 1 动物W i s t a r 大鼠， 1 4 只， a ， 体重( 3 4 0 1 2 0 ) 9 ， 由中国协和医科大学实验动物中心提供。在 2 1 恒温、 1 2 h / 1 2 h 光照周期条件下饲养适应1 w k 后使用。 1 . 2 药物和试剂丙磺舒、 菊粉、 尿酸为S i g m a 公 司产品， 牛血清白 蛋白组分V为北京益利精细化学 品公司产品， 复方氨基酸注射液( 1 7 A A , 7

8、 . 6 5 %) 为 北京费森尤斯卡比医药有限公司产品， 葱酮为国药 集团化学试剂有限公司产品， 尿酸试剂盒为上海名 典生物工程有限公司产品， 葡萄糖试剂盒为中生北 控生物科技股份有限公司产品， 钠选择性离子测试 试剂盒为罗氏公司产品。其他为国 产分析纯试剂。 1 . 3 灌流液组成 灌流液以K - H液( m m o l “ L - , N a C l 1 1 8 . 0 ， K C l 4 . 7 ， N a H C 0 3 2 5 ， K H 2 P 0 4 1 . 2 ， M g - S 0 4 2 . 3 4 , C a C l 2 1 . 2 8 , g l u c o s e

9、5 . 5 5 ) 为 基础， 另加6 5 g L - 牛 血清白 蛋白 组分V 和0 . 1 5 3 %复 方氨基酸 注射液( 1 7 A A ， 临用前加人) 。配制后滤膜过滤 ( 0 . 4 5 L m 孔径) ， 调p H 7 . 4 。 使用 前1 h 和 灌流过 程中 持续充人9 5 % O Z + 5 % C O , 混合气体。 1 . 4 实 验 装 置 参 考T a f t 1 和L e p s y 3 1 文 献 报道 离 体肾脏灌流装置。用生物信号采集分析系统( B L - 4 2 0 E + ， 泰 盟科技有限公司) 进行压力监测， 用蠕动 泵( B T O 1 ， 天

10、津协达伟业有限公司) 进行灌流液循 环， 用恒温浴槽使灌流液维持3 7 9 0 。 中国药理学通报 C h in e s e P h a r m a c o l o g ic a l B u l l e t i n 2 0 0 6 D e e ; 2 2 ( 1 2 ) 1 4 5 3 2 方法 2 . 1 离体大鼠肾脏灌流模型制备6 性W i s t a r 大 鼠， 戊巴比妥钠( 4 5 m g “ k g - 1 , i p ) 麻醉， 参照 W a n g 2 和L e p s y 3 报道方法制备I P K 模型。 简言 之， 背位固定大鼠， 切开腹壁， 分离肠系膜动脉， 左肾 动脉

11、、 腹主动脉、 左肾静脉及输尿管， 从阴茎静脉推 注1 M I 肝素钠( 5 0 0 U k g - ) 和甘露醇( 1 g 参数无统计学差异， 说明两组的肾功能相似。 从图 中看出， 肾 小球滤过率、 尿量、 肾小管重吸收水及葡 萄糖百分率随灌注时间延长均缓慢下降， 而肾小管 重吸收钠百分率下降不明显， 提示肾功能随灌注时 间延长逐渐减退， 但功能仍满足模型要求。 - . C o n t r o l - O- P r o b e n e c i d k g 一 ) ， 使 全 身 肝 素 化和 渗 透 利尿。 1 0 m in 后 进 行 输 尿管插管， 然后沿肠系膜动脉将导管插人肾动脉，

12、结 1 . 2 1 . 0 UJ斗 : 0八U 目日。一日论白 一泊日二日由口 扎固定导管， 立即开启蠕动泵， 用预温至3 7 灌流 液原位灌流， 游离灌流肾及输尿管， 置入3 7 生理 盐水清洗残血， 然后悬于盛有灌流液的3 7 恒温浴 槽里持续灌流。实时监测灌流压， 调节灌流量使灌 流压稳定于( 1 6 . 0 1 2 . 7 ) k P a ， 灌流量约为 1 0 m l m i n 一 ， 取尿流 量大于0 . 0 4 m l m i n 一 灌流肾 进行实 验。 2 . 2 实验设计和样品收集实验分为对照组和丙 磺 舒 组。 灌流 液中 加人0 . 2 g L - 菊粉， 用来测定

13、肾 小 球 滤 过 率。 灌流 液 尿 酸 浓 度为2 4 0 R m o l L 一 ( 相当于正常人血液尿酸浓度) ， 丙磺舒浓度为 1 m m o l L - 1 。离体大鼠肾脏先用灌流液平衡 2 0 m i n ， 取尿量大于0 . 0 4 m l m i n - 灌流肾 进行实验。 灌流程序依次为: 灌流液( 6 0 m l ) 平衡2 0 m i n *含丙 磺舒灌流液( 6 0 m l ) 作用2 0 m i n 、含尿酸和丙磺舒 灌流液( 8 0 m l ) 作用9 0 m i n ， 灌流液循环使用， 对照 组灌流液不加丙磺舒。于各观察点前 1 0 m i n 收集 尿液并测

14、量体积， 在尿液收集时段的中点进行灌流 液取样， 损失的 体积用等量灌流液补充 2 ,3 1 0 2 . 3 分析方法 菊粉 含量测定为葱酮比 色法 8 1 葡萄糖含量测定为葡萄糖氧化酶法; N a + 含量测定 为钠离子选择性电极法; 尿酸含量测定为尿酸氧化 0 2 F i g 1 0 . 2 2 0 . 2 0 0 . 1 8 0 . 1 6 0 . 1 4 0 . 1 2 0 . 1 0 0 . 0 8 0 . 0 6 0 . 0 4 B a l a n c e D r u g 3 0 T i me / mi n 6 0 9 0 C h a n g e s i n g l o m e r

15、 u l a r f il t r a t i o n r a t e ( G F R) f o r t h e is o l a t e d p e r f u s e d r a t k id n e y s ( x 1 s , n 二 7 ) 一 . 一Co n t r o l 代) -P r o b e n e c i d B a l a n c e F i g 2 C h a n g e s D r u g 3 0 Ti me / mi n 6 0 9 0 i n u r i n e fl o w r a t e ( U F R ) f o r t h e 酶法。 2 . 4 葡萄糖

16、、 N a 、 尿酸测定参照说明书。 i s o l a t e d p e r f u s e d r a t k i d n e y s ( x 1 s , n 二 7 ) 参数计算和统计分析肾功能参数和尿酸排 J乏。口牟JO酬1 泄 参 数 计算参照文献 。肾 脏清除率= 尿液浓度 x 尿量/ 灌流液浓度; 肾小管重吸收 / % = ( 1 一 清除 率 / 肾 小球滤过率) x 1 0 0 %， 肾 小管水重吸收 / %计 算以 尿量取代清除率; 尿酸排泄分数/ %二 ( 尿液尿 酸浓度/ 灌流液尿酸浓度) / ( 尿液菊粉浓度/ 灌流液 菊粉浓度)x 1 0 0 %。 数 据以 均

17、数x 士 ; 表示， 统 计 分析采用非配 对t 检验。 3 结果 3 . 1 肾 功能 变 化 反映 离体灌流大鼠肾 脏功能的 参数: 肾 小 球滤过 率、 尿 量、 肾 小 管 重吸 收 水、 葡 萄糖 及钠百分率结果见F i g 1 一 s 。对照组和丙磺舒组各 一 . C o n t r o l -0 - P r o b e n e c i d B a l a n c e D r u g 3 0 T i me / mi n 6 0 9 0 F i g 3 C h a n g e s i n p e r ce n t a g e t u b u l a r r e a b s o r p

18、 t i o n ( %T R ) o f w a t e r f o r t h e i s o l a t e d p e r f u s e d r a t k i d n e y s ( x 士 s , n 二 7 ) 1 4 5 4 中国药理学通报C h i n e s e P h a r n t c i c o l o g i c a l B u l l e t i n 2 0 0 6 D e c ; 2 2 ( 1 2 ) - o - C o n t r o l - 0 - P r o b e n e c i d B a l a n c e D r u g 3 0 6 0 T i

19、 me / mi n 开发效果好、 安全性高的促尿酸排泄药对防治高尿 酸血症、 痛风及其并发症有重要意义。 离体肾脏灌流是研究体内 异源性物质及一些内 源性物质经肾脏排泄常用模型。保持良好的肾脏功 能是模型成败的关键， 模拟生理条件的灌流量及灌 注压对离体肾脏进行灌注是保持正常肾脏功能的基 本要求。 本文灌注压维持在1 3 . 3 一 1 8 . 7 k P a ， 此压 力与肾动脉压相近。在此灌流压下， 灌流量为1 0 m l m i n 一 左右， 该流量相当于肾 脏血流量的两倍。 灌 流量增加是由于本灌流液为无细胞灌流液， 粘度低 于血液， 阻力变小， 为维持正常肾功能所需的灌流压 芝。

20、50。nl切J。国LL F i g 4 C h a n g e s i n p e r c e n t a g e t u b u l a r r e a b s o r p ti o n ( %T R ) o f g l u c o s e f o r t h e i s o l a t e d p e r f u s e d r a t k i d n e y s ( x 士 s , n = 7 )叫 . 一C o n t r o l ， 仁 卜P r o b e n e c i d 八UCUC目nUn曰八目 了n气月，j，工 夕史。曰Jn国山 - 0 - C o n t r o l 代卜

21、 P r o b e n e c i d ntl口6U 90西00 芝日二石osJO州卜 2 0 3 0 4 05 0 6 0 7 0 8 0 9 0 1 0 0 T i me / mi n B a l a n c e D r u g 3 0 T i me / mi n F i g 5 C h a n g e s i n p e r c e n t a g e t u b u l a r r e a b s o r p ti o n ( %T R ) o f s o d i u m f o r t h e i s o l a t e d p e r f u s e d r a t k i d

22、n e y s ( x 士 ， ， n = 7 ) 甲月日.一遥爸口闷. LCU 212 八UO 3 . 2 尿酸排泄反映尿酸排泄情况的尿酸排泄分 数， 尿酸清除率， 9 0 m i n 总尿酸排泄量结果见F i g 6 一 8 。丙磺舒组尿酸排泄分数， 尿酸清除率， 9 0 m i n 总尿酸排泄量高于对照组( P 0 . 0 5 或0 . 0 1 ) ， 说明 离体大鼠肾脏灌流模型能用来评价影响尿酸排泄药 物的作用。 4 讨论 人们很早就知道血尿酸含量升高超过其饱和浓 度时， 即可在组织内 形成尿酸盐结晶沉积， 导致痛风 性关节炎和痛风性肾 病发生。 但最近一些临床和实 验资料显示， 血液

23、中可溶性的尿酸具有促炎和促增 殖作用， 损伤血管内 皮细胞， 与高血压、 心血管疾病、 肾 脏疾病有关 9 - 11 。而肾脏尿酸低排泄情况在高 血压、 心血管疾病、 原发性高尿酸血症普遍存在， 且 与 这 些疾病的 预后有密 切关系 ， ， 。 现在临 床应 用的 促尿酸 排泄药主 要有丙磺舒、 苯嗅马隆， 品 种很 少。 可苯嗅马隆 在欧 洲市场有不少爆发性肝炎病例 的 报道， 现已 从部分欧 洲市场撤出 14 。因 此研究和 F i g 6 E ff e c t o f p ro b e n e c i d o n f r a c ti o n e x c r e ti o n o f

24、o r a t e ( F E u r a t e ) f o r t h e i s o l a t e d p e r f u s e d r a t k i d n e y s ( x 士 s , n = 7 ) I s o l a t e d r a t k i d n e y s w e r e p e r f u s e d w i t h p e r f u s a t e w i t h o r w i t h o u t 1 m m o l L 一 1 p r o b e n e c i d f o r 9 0 m i n . U r a t e i n u r i n e

25、a n d p e r fu s a t e w a s a s - s a y e d , t h e n F E o r a t e w a s c a l c u l a t e d a c c o r d i n g t o e q u a t i o n . P 0 . 0 5 , * “ P 0 . 0 1 ”c o n t ro l g r o u p i n t h e s a m e t i m e in t e r v a l 0 . 8 07 0 . 6 0 . 5 0 . 4 0 . 3 3 0 4 0 5 0 6 0 7 0 T i me / mi n 8 0 9 0

26、 1 0 0 F i g 7 E ff e c t o f p r o b e n e c i d o n ren a l c l e a r a n c e f o r o r a t e ( C L u r a t e ) f o r t h e i s o l a t e d p e r f u s e d r a t k id n e y s ( x 1 s , n = 7 ) I s o l a t e d r a t k i d n e y s w e r e p e r f u s e d w i t h p e r f u s a t e w i t h o r w i t h

27、 o u t m m o l L 一 I p r o b e n e c i d f o r 9 0 m i n . U r a t e i n u r in e a n d p e r f u s a t e w a s a s - s a y e d , t h e n C L u r a t e w a s c a l c u l a t e d a c c o r d i n g t o e q u a t i o n .* P 0 . 0 5 , * * P 0 . 0 1 v s c o n t r o l g r o u p i n t h e s a m e t i m e i

28、 n t e r v a l 中国药理学通报C h i n e s e P h a n n a c o l o g i c a l B u l l e t i n2 0 0 6 D e c ; 2 2 ( 1 2 ) 1 4 5 5 nUC目 4丹、 一。日昌、口。1君哭。亡曰口己二公钻， Co n t r o l P r o b e n e c i d F S g 8 E ff e c t o f p r o b e n e c i d o n t o t a l o r a t e u r i n a ry d u r i n g 9 0 m i n f o r t h e i s o l

29、 a t e d p e r f u s e d r a t k i d n e y s ( x 士 、 ， n = 7 ) I s o l a t e d r a t k i d n e y s w e r e p e r f u s e d w it h p e r f u s a t e w i t h o r w i t h o u t 1 m m o l L 一 1 p ro b e n e c i d f o r 9 0 m i n . U r a t e i n u r in e w a s a s s a y e d , t h e n t o - t a l o r a t

30、e u r i n a ry e x c r e t i o n d u r i n g 9 0 m i n w a s c a l c u l a t e d a c c o r d in g t o e - q u a t io n .* * P G 0 . 0 1 v s c o n t r o l g r o u p 力， 灌 流量相应增加 。 W a n g 等2 报道肾 脏灌流 流量达到3 6 m l m i n 一 ， 但本实验中发现， 此灌流量 下灌注压明显超出肾脏的生理灌注压力; 该文献中 以中分子量的右旋糖昔代替一部分灌流液中牛血清 白 蛋白， 来改善灌流肾脏的功能， 但我

31、们在预试验中 发现， 右旋糖昔在灌流液中易析出， 故实验中 全部用 牛血清白 蛋白 作为渗透剂。 肾小球滤过率是评价灌流肾 脏肾小球功能重要 参数之一。 本文灌流初期滤过率维持在0 . 9 m l m i n 一 左右， 与文献报道相一致 1 ,2 ， 此滤过率接近 大鼠 体内的肾小球滤过率。随时间延长， 滤过率缓 慢 下 降， 但 实 验 期间 滤 过 率 仍 维 持 在0 . 5 m l m in 一 以 上， 可以 满 足肾 脏活 性 要 求川。 滤过 率 逐渐降 低 除了肾小球功能降低外， 还有因灌注阻力增加而灌 流量轻微减少有关。 肾小管重吸收葡萄糖、 钠及水百分率反映肾小 管功能参

32、数。 本实验葡萄糖、 钠及水重吸收百分率 分别为9 5 %, 8 5 %, 8 0 %左右， 说明近曲和远曲肾小 管功能良 好。尿量是肾 小球滤过及肾小管浓缩功能 的 综 合反映， 本文尿 量 基 本维持 在0 . 1 m l m i n 一 以 上 ， 提 示 肾 功 能 良 好 周 。 尿酸为小分子， 能被肾小球自由滤过， 其肾脏排 泄的经典模型认为由肾小球滤过、 肾小管重吸收、 肾 小 管 分 泌 及 分 泌 后 重 吸 收4 个连 续的 环 节组 成 ” 1 。 尿酸在肾脏的排泄具有种属差异性， 人尿酸排泄分 数低于1 0 %， 大鼠 排泄分数明显高于人 “ 。 实验 发现 灌流大鼠肾

33、脏尿酸排泄分数、 尿酸清除率、 9 0 m i n 总 尿酸 排泄量分别约为3 0 %, 0 . 3 0 m l m i n 一 和1 5 R m o l ， 而丙磺舒处理的离体肾脏尿酸排泄参 数比 对照组分别提高约3 6 %, 5 4 %, 9 9 %， 说明 离体 大鼠肾 脏能较好排泄尿酸， 并对促尿酸排泄药丙磺 舒具有良 好反应， 提示离体大鼠肾脏灌流模型能用 来评价促尿酸排泄药物的作用。 尿酸肾 脏排泄具有种属差异， 小鼠、 大鼠 及人的 尿酸肾脏排泄呈现净吸收。现已证明鼠及人的尿酸 在肾小管重吸收的分子机制是尿酸通过尿酸盐转运 体 转运， 其中 尿酸盐转运体1 ( u r a t e

34、 t r a n s p o r te r 1 , U R A T 1 ) 起主要作用， 参与管腔膜尿酸重吸收 17 0 人和小鼠U R A T I 已被克隆， 其分子特征、 功能和肾 小管中分布已 被鉴定， 转U R A T I 基因的细胞模型已 被用来研究尿酸摄取。在转人和小鼠U R A T I 的爪 蟾卵母细胞模型中， 丙磺舒组尿酸摄取率分别为对 照 组的1 9 %和3 2 % i “ 一 8 ， 提 示丙磺 舒体内 促尿酸 排泄作用的分子机制可能是通过抑制近曲小管上 U R A T 1 对 尿酸的 摄取。 G r a e s s l e : 等 19 也证实人尿 酸低排泄及高尿酸血症和

35、人U R A T 1 基因多态型有 关。U R A T I 主要分布于肾近曲小管的管腔侧， 因此 近曲小管的功能对肾脏尿酸排泄非常关键。 葡萄糖 主要在近曲小管被重吸收， 葡萄糖重吸收百分率反 映近曲小管功能。本模型中葡萄糖重吸收百分率维 持在9 5 %以上， 能保证尿酸在近曲小管良 好吸收。 用离体大鼠肾脏灌流模型发现和评价促尿酸排 泄药物作用， 条件易于控制， 能排除在体情况下体内 尿酸滤过负荷不同所造成的差异， 同时与尿酸转运 的细胞模型相比， 更接近尿酸体内肾 脏排泄过程， 能 架起促尿酸排泄药的体外发现和体内 评价桥梁， 可 以 成为促尿酸排泄候选药物发现和开发的一个有用 工具。 参

36、考文献: 1 T a f t D R . T h e i s o l a t e d p e r f u s e d r a t k i d n e y m o d e l : a u s e f u l t o o l f o r d r u g d i s c o v e ry a n d d e v e l o p m e n t 仁 J . C u r r D r u g D is c o s T e c h n o l , 2 0 0 4 , 1 ( 1 ) : 9 7一 1 1 1 . 2 W a n g J , N a t i o n R L , E v a n s A M ,

37、e t a l . I s o l a t e d r a t k i d n e y p e r - f u s e d w i t h d e x t r a n a n d b o v i n e s e r u m a l b u m i n : a s t a b l e m o d e l f o r i n v e s t i g a t i n g re n a l d r u g h a n d l i n g J . J P h a r m a c o l T o x ic o l M e t h - o d s , 2 0 0 4 , 4 9 ( 2 ) : 1 0 5

38、一1 3 . 3 L e p s y C S , G u t te n d o r f R J , K u g l e r A R , e t a l . E ff e c t s o f o r g a n i c a n i o n , o r g a n i c c a t i o n , a n d d i p e p t i d e t r a n s p o rt i n h i b i t o r s o n c e f d i - n i r i n t h e i s o l a t e d p e r f u s e d r a t k i d n e y J . A n

39、t i m i c r o b A g e n t s C h e - mot h e r , 2 0 0 3 , 4 7 ( 2 ) : 6 8 9 一 9 6 4 J o h n s o n R J , K a n g D H , F e i g D , e t a l . I s t h e r e a p a t h o g e n e t i c r o l e f o r u r i c a c i d i n h y p e rt e n s i o n a n d c a r d i o v a s c u l a r a n d r e n a l d i s e a s e

40、 J ? H 力 )e x t e n s i o n , 2 0 0 3 , 4 1 ( 6 ) : 1 1 8 3 一 9 0 . 仁 5 S c h a c h t e r M . U r i c a c i d a n d h y p e rt e n s io n J . C u r r P h a r m D e s , 1 4 5 6中国药理学通报C h i n e s e P h a r m a c o l o g i c a l B u l l e t i n 2 0 0 6 D e c ; 2 2 ( 1 2 ) 2 0 0 5 , 1 1 ( 3 2 ) : 4 1 3

41、9 一 4 3 . 6 K a t o M , H i s a t o m e 1 , T o m i k u m Y , e t a l . S t a t u s o f e n d o t h e l i a l d e - p e n d e n t v a s o d il a ti o n i n p a tie n t s w ith h y p e r u r i c e m ia J A m J C a r d io l , 2 0 0 5 , 9 6 ( 1 1 ) : 1 5 7 6 一 8 . 7 K a n g D “ H , N a k a g a w a T ,

42、F e n g L , e t a l . A ro l e f o r u r i c a c i d i n t h e p r o g r e s s i o n o f r e n a l d is e a s e J .J A m S o c N e p h r o l , 2 0 0 2 , 1 3 ( 1 2 ) : 2 8 8 8 一 9 7 . 8 P o o l a N R , B h u i y a n D , O rt i z S , e t a l . A n o v e l H P L C as s a y f o r p e n t a m i d i n e ;

43、 c o m p a r a t i v e e ff e c t s o f c re a t i n i n e a n d in u l in o n G F R e s t i m a t i o n a n d p e n t a m i d i n e re n a l e x c r e t i o n i n t h e i s o l a t e d p e r f u s e d r a t k i d n e y J . J P h a r m P h a r m S c i , 2 0 0 2 , 5 ( 2 ) : 1 3 5 一 4 5 . 9 K a n e l

44、l is J , K a n g D H . U r i c a c i d as a m e d i a t o r o f e n d o t h e l i a l d y s - f u n c t i o n , i n fl a m m a t i o n , a n d v as c u l a r d i s e as e J . S e m in N e p h r o l , 2 0 0 5 , 2 5 ( 1 ) : 3 9 一 4 2 1 0 S a n c h e z - L o z a d a L G , N a k a g a w a T , K a n g D

45、H , e t a l . H o r m o n a l a n d c y t o k i n e e ff e c t s o f u r i c a c i d J . C u r r O p i n N e p h r o l 场 rp e r t e n s , 2 0 0 6 , 1 5 ( 1 ) : 3 0 一 3 . 1 1 K h o s l a U M , Z h a r i k o v S , F i n c h J L , e t a l . H y p e r u r i c e m i a i n d u c e s e n d o t h e l i a l

46、d y s f u n c t i o n J . K id n e y I n t , 2 0 0 5 , 6 7 ( 5 ) : 1 7 3 9 一 4 2 . 1 2 C a m p o C , R u i l o p e L M , S e g u r a J , e t a l . H y p e r u r i c e m i a , l o w u - r i n e u r a t e e x c r e t i o n a n d t a r g e t o r g a n d a m a g e i n a rt e r i a l h y p e rt e n - s i

47、 o n J . B l o o d P r e s s , 2 0 0 3 , 1 2 ( 5 一 6 ) : 2 7 7 一 8 3 . 1 3 P e r e z R F , C a l a b o z o M , E r a u s k in G G , e t a l . R e n a l u n d e r e x c r e - t i o n o f u r i c a c i d i s p r e s e n t i n p a t ie n t s w i t h a p p a r e n t h i 沙u r i n a ry u - r i c a c i d o

48、 u t p u t J . A r t h r i t is R h e u m , 2 0 0 2 , 4 7 ( 6 ) : 6 1 0 一 3 . 1 4 J a n s e n T L , R e in d e r s M K , R o o n E N , e t a l . B e n z b r o m a r o n e w i t h d r a w n f r o m t h e E u r o p e a n m a r k e t ; a n o t h e r c a s e o f ” a b s e n c e o f e v i d e n c e i s e v i d e n c e o f a b s e n c e “ J ? C l i n E x p R h e u m a t o l , 2 0 0 4 ， 2 2 ( 5 ) : 6 5 1 一 8 . 1 5 E n o m o t o A , E n d o u H . R o l e s o f o r g a n i c a n i o n t r a n s p o rt e r s ( O A T S ) a n d a u r a t e t r a n s p o