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1、1 2 4 中国临 床康复 第 9 春 第 ) 8 期 2 0 0 5 - 0 5 - 1 4 出版 C h i n e s e J o u m 些f C li竺a l R e h a b i li ta t io n , M a y 1 4 2 旦 0 5 V o l.二N o 卫 8 盖础研究 移 植 神 经 生 长因 子 和 脑 衍 生 神 经 生 长因 子 基因 修 饰 的 嗅 鞘 细 胞 对 脊 髓 损 伤后细胞凋亡的 影响* 布 林 ， 郑鸿 ， 姜汉国 ， 袁即山 中图分类号: R 3 4 9 . 8 收稿日期: 2 0 0 4 一1 2 文献标识码: 文t编号: 1 6 7 1
2、 一 5 9 2 6 ( 2 0 0 5 ) 1 8 一 0 1 2 4 一 0 2 - 0 7 修回日 期: 2 0 0 5 - 0 1 - 2 9 ( 0 3 / G W/ Y H ) T r a n s p l a n t a t i o n o f n e r v e g r o w t h f a c t o r a n d s h e a t h i n g c e l l s m o d i f i e d b y b r a i n - d e r i v e d n e r v e g e n e i n c e l l a p o p t o s i s f o l l o
3、 w i n g s p i n a l c o r d坷u r y o l f a c t o r y e n - g r o w t h f a c t o r B u L in , Z h e n g H o n g , J ia n g H a n - g u o 2 , Y u a n J i- s h a n , D e p a rt m e n t o f O rt h o p a e d i c s , A f G l i a t e d H o s p i t a l o f G u a n g d o n g M e d i c a l C o l l e g e , Z
4、h a n j i a n g 5 2 4 0 0 1 , G u a n g - d o n g P r o v i n c e , C h i n a ;Z D e p a rt m e n t o f P a t h o l o g y ,G u a n g d o n g M e d i c a l C o l - le g e , Bu rn s Z h a n j i a n g 5 2 4 0 0 1 , G u a n g d o n g P r o v i n c e , C h i n a ; D e p a r t m e n t o f F i r s t A f f
5、i l ia t e d H o s p i t a l o f S u n Y a t - s e n U n i v e r s i ty , G u a n g z h o u 5 1 0 0 6 0 . G u a n g d o n g P r o v i n c e , C h i n a C o r r e s p o n d e n c e t o : 15 1. 1 L m育， Ma s t e r , A s s o c i a t e p r o c e s s o r , A s s o c i a t e c ore p h y s i c i a n , D e p
6、 a r t m e n t o f O rt h o p a e d i c s , A f f il i a t e d H o s p i t a l o f G u a n g d o n g M e d i c a l C o l l e g e , Z h a n j i a n g 5 2 4 0 0 1 , G u a n g d o n g P r o v i n c e , C h i n a k h a n 2 9 9 3 2 0 0 3 1 6 3 . c o m S u p p o r t e d b y : t h e S c i e n t i f i c R e
7、 s e a r c h F o u n d a t i o n o f G u a n g d o n g P ro v i n c i a l H e a l t h D e p a rt m e n t , N o . A 2 0 0 3 5 5 2 R e c e i v e d : 2 0 0 4 一1 2一 0 7 A c c e p t e d : 2 0 0 5 一 0 1 一 2 9 Ab s t r a c t A I M: T o s t u d y t h e e f f e c t o f i n t r a - c o r d t r a n s p l a n t
8、 a t i o n o f n e r v e g r o w t h f a c t o r ( N G F ) a n d b r a i n - d e r i v e d n e u r o t r o p h i c f a c t o r ( B D N F ) g e n e s m o d i fi e d o l f a c - t o ry e n s h e a t h i n g c e l l s ( O E C s ) o n a p o p t o s i s a f t e r s p i n a l c o r d i n j u ry ( S C I )
9、a n d i n i m p r o v i n g r e c o v e ry o f n e r v e f u n c t i o n . ME T H O D S : T h e e x p e r i m e n t w a s c o n d u c t e d i n t h e C e n t e r f o r E x p e r i m e n t a l 摘要 目的:探讨大鼠脊髓损伤后神经生长因子和脑衍生神经生长因子基因 修饰的嗅神经鞘细胞移植对脊髓损伤后细胞凋亡及促进神经功能恢复 的作用。 方法: 实验于2 0 0 3 一 0 9 / 2 0 0 4 一 0 4 在
10、广东医学院实验动物中心完成， S D 大鼠4 8 只， 雌雄不限， 体质量2 4 0 一 2 6 0 g 。 随机分为3 组: 基因 修饰组， 嗅鞘细胞移植组， 脊髓损伤组， 每组 1 6 只。均首先行大鼠脊髓损伤造 模。 基因修饰组和嗅鞘细胞移植组分别移植神经生长因子、 脑衍生神经 生长因子修饰的嗅鞘细胞和单纯嗅鞘细胞， 脊髓损伤组不做治疗。 移植 后1 2 周， 采用免疫组织化学法和原位末端标记法对损伤区的脊髓组织 切片进行细胞凋亡的检测， 主要观察 b c l - 2 ( 细胞凋亡抑制基因) ， b a x 和 f a s ( 细胞凋亡诱导基因) 阳 性表达的情况评估经基因 修饰和未经基
11、因修 饰的单纯嗅鞘细胞对脊髓神经凋亡的抑制及诱导作用。 结果: 4 8 只大鼠均进入结果分析。原位末端标记法检测结果: 基因修 饰组细胞凋亡数低于嗅鞘细胞移植组， 脊髓损伤组最高。 免疫组织化 学结果:B c l - 2 蛋白表达的顺序为基因修饰组 嗅鞘细胞移植组 脊 髓 损伤 组( 2 0 . 7 9 土 6 . 4 0 , 1 3 . 5 4 士 3 . 6 6 , 9 . 3 4 士 2 . 1 2 , P嗅鞘细胞移植组基因修饰组 ( 2 4 . 9 8 士 4 . 3 2 , 4 0 . 4 8 土 2 . 0 5 ) , ( 1 8 . 9 2 士 4 . 7 4 , 2 5 . 5
12、 4 土 3 . 8 2 ) , ( 1 1 . 7 8 士 3 . 8 1 , 1 6 . 8 7 土 3 . 3 0 ) , ( P嗅鞘细胞移植 组 脊髓损伤组 ; F a s , B a x 蛋 白表达的顺序均为脊髓 损伤组 嗅鞘细胞移植组 基因修饰组 。目前的研 究 已证 实 B c l - 2产物不是加速细胞分裂 ，而是抑制细 胞凋亡 ， 延长细胞寿命 ， 促进细胞生存 ， 且这种作用与 细胞的增殖周期无关 “ ， 。F a s 基因作为一种跨膜糖蛋 白分子 ， 当与抗 F a s 抗体或 F a ， 配体结合时， 可使表达 F a s 阳性的细胞发生凋亡 川。 B a x 作用基本
13、上与 F a s 相 同。神经生长因子和脑衍生神经生长因子基因修饰的 嗅鞘细胞移植对脊髓损伤后神经细胞凋亡的抑制作用 为临床上运用转基因的嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤提 供了实验依据 。 4参 考 文 献 1 C h a r r i a u t - M a r l a n g u e C , M a r g a i l l 1 , R e p r e s s A , b l e f o c a l i s c h e mi a :a n i n s i t u DNA e t a l . A p o p t o s i s a n d n e c ro s i s f r a g m e n t
14、a t i o n a n a l y s i s . J C e r e b M e t a b 1 9 9 6 ; 1 6 ( 2 ) : a f t e r r e v e r s i B l o o d F l o w L e e 1 T, G ree n 1 8 6一9 4 B A , A d v a n c e s n从, r t h A m 2 0 0 2 i n t h e m a n a g e m e n t o f a c u t e s p i n a l c o r d i n - ， j r y . O n h o p C h J阴屯 二 明 ，夕 砚去 上 2 5
15、， ; 3 3 ( 2 ) : 3 1 1 一 5 王洪美. 嗅鞘细胞移植改善多发性硬化患者的脊髓神经功 能 1 例 报 告 J . 中 国 临 床 康 复， 2 0 0 4 , 8 ( 3 匀: 8 1 1 2 4布林， 钟环， 姜汉国， 等 . N G F , B D N F基因修饰 O E C s 移植大鼠脊髓损伤后 功能恢复 J 中国矫形外科杂志， 2 0 0 3 , 1 8 ( 1 2 ) : 1 2 7 7 杨浩， 游思维， 王春婷， 等 . 科学进展， 2 0 0 2 , 8 : 1 0 1 一 5 冯世庆， 郭世缓， 陈君长， 等 人雪旺细胞的实验研究 J ) 嗅鞘细胞的培养纯
16、化及形态学特征【 J 1 . 解剖 神经生长因子和脑源性神经营养因子基因转 中华骨科杂志， 2 0 0 0 , 2 0 ( 8 ) : 4 8 8 一 9 2 B r u n e l l o N , R e y n o l d s M , W r a t h a l l J R , re c e p t o r m R N A i n c o n t u s e d r a t s p i n a l c o r d K o l i a t s o s V E , S h e l t o n D L , M o b l e y W C , fa cto r re c e p to r-im m
17、 u n o re ac tiv e : n e u ron s inco rd . B ra in R es 1 9 9 1 ; 5 4 1 (1 ) : 1 2 1 - 8 e t a l . I n c r e a s e d n e r v e g ro w t h N e u r o s c i L e t t 1 9 9 0 ; 1 1 8 ( 2 )fa c to r2 3 8 - a l . A n o v e l g r o u p o f n e r v e g ro w t h v e n t r a l h o rn o f t h e l u m b a r s p
18、i n a l M a rt i n S J , G re e n D R , C o t t e r T G . D i c i n g w i t h t h e a p o p t o s i s m a c h i n e ry. T r e n d s B i o c h e m S c i H o c k e n b e r v D , N u n e z G , Mi l l i m a n C , e t d e a t h : d i s s e c t i 1 9 9 4 ; 1 9 ( 1 ) : n g t h e c o m p o n e n t s o f 2 6
19、一3 0 a l . B c l - 2 i s a n i n n e r mi t o c h o n d r i a l m e m b r a n e p r o t e i n t h a t 3 3 4一6 V a l l b o C , B e r g e n h e i m b l o c k s p ro g r a m m e d c e l l d e a t h . N a t u r e 1 9 9 0 ; 3 4 8 ( 6 2 9 9 ) : T , B e r g h A , e t a l . a n t i m i t o t i c d r u g e s t r a m u s t i n e i n m a l i g n a n t b r a i n - s u g g e s t i n g a n a p o p t o t i c c e l l d e a t h . B r Jb u t7 1 ( i n d u c e d n o t i n 4 ) : 7 1 7 b y th en o r m a l