《GB-T 4789.13-2003.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《GB-T 4789.13-2003.pdf（5页珍藏版）》请在三一文库上搜索。
1、G B / T 4 7 8 9 . 1 3 -2 0 0 3 前言 本标准对G B / T 4 7 8 9 . 1 3 -1 9 9 4 ( 食品卫生微生物学检验 产气英膜梭菌检验 进行修订。 本标准与G B / T 4 7 8 9 . 1 3 -1 9 9 4 相比主要修改如下: 按照G B / T 1 . 1 -2 0 0 0 对标准文本的格式和文字进行修改。 修改并规范原标准中的“ 设备和材料” 。 本标准自 实施之日 起， G B / T 4 7 8 9 . 1 3 -1 9 9 4 同时废止。 本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。 本标准起草单位: 卫生部兰州生物制品研究所、 中
2、国疾病预防控制中心营养与食品安全所。 本标准主要起草人: 王成怀、 冉陆、 付萍、 姚景会。 本标准于1 9 8 4 年首次发布， 1 9 9 4 年第一次修订， 本次为第二次修订。 G B / T 4 7 8 9 . 1 3 -2 0 0 3 食品卫生微生物学检验 产气英膜梭菌检验 范 围 本标准规定了产气荚膜梭菌的检验方法。 本标准适用于各类食品和食物中毒样品中产气荚膜梭菌的检验。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日 期的引用文件， 其随后所有 的修改单( 不包括勘误的内容) 或修订版均不适用于本标准， 然而， 鼓励根据本标准达成协议的各方研究
3、 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日 期的引用文件， 其最新版本适用于本标准。 G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3 食品卫生微生物学检验 染色法、 培养基和试剂 3 设备和材料 3 . 1 冰箱: 0 0C-4 0C。 3 . 2 恒温培养箱: 3 6 士l *C。 3 . 3 恒温水浴锅: 4 6 士1 0C。 3 . 4 显微镜: l o x一l o o X。 3 . 5 均质器或灭菌乳钵。 3 . 6 厌氧培养装置: 常温催化除氧式或碱性焦性没石子酸除氧式。 3 . 7 灭菌吸管: 1 ml ( 具 0 . 0 1 ml , 刻度) , 1 0 mL (
4、具 0 . 1 mL刻度) 。 3 . 8 灭菌试管: 1 6 mm X1 6 0 m m. 3 . 9 灭菌平皿: 直径 9 0 m m, 3 . 1 0 灭菌锥形瓶 : 5 0 0 mL . 4 培养基和试剂 4 . 1 厄肉培养基: G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3中4 . 6 7 . 4 . 2 亚硫酸盐一 多粘菌素一 磺胺啼吮琼脂( S P S ) : G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3 中4 . 6 9 , 4 . 3 液体硫乙醇酸盐培养基( F T ) : G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3 中4 .
5、 7 0 . 4 . 4 动力一 硝酸盐培养基: G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3 中4 . 7 2 . 4 . 5 含铁牛奶培养基: G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3中4 . 7 1 . 4 . 6 卵黄琼脂培养基: G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3中4 . 6 8 . 4 . 7 0 . 1 %蛋白陈水: G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3 中4 . 8 5 . 4 . 8 硝酸盐还原试剂; G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3 中3 . 1 7 . 4 .
6、 9 革兰氏染色液: G B / T 4 7 8 9 . 2 8 -2 0 0 3中2 . 2 . 5 检验程序 产气英膜梭菌检验程序见图 1 G B / T 4 7 8 9 . 1 3 -2 0 0 3 检样 2 5 g ( . L ) 检样+ 2 2 5 m L 0 . 1 7 6 蛋白 膝水荆 均质、离心、稀释 1 0 - e A M A 稀 10 .O W N 1 0 . 稀释液 + 厌氧培养，5Z士1 C . 2 4 h ,黑色翻落计数 任挑黑色菌落1 0 个，分别接种F T培养基 确证试验 镜检形态硝酸盐还原牛奶发碑卵琪脂分解 菌盆计算 圈 1 6 操作步骤 6 . 1 活菌计数培
7、养 6 . 1 . 1 按无菌操作称取食品检样 2 5 g ( m L ) 放人均质器中， 加 。 . 1 %蛋白膝水 2 2 5 m L ， 低速搅动 1 m i n -2 m i n ， 使之均质化， 作为1 : 1 0 稀释液。 6 . 1 . 2 以上述 1 ， 1 0 稀释的均质液按 1 m L加。 . 1 %蛋白脉水9 m L做成1 0 - z - 1 0 - 1 的系列稀释液 6 . 1 . 3 吸取各稀释液 1 m L分别放人两个灭菌平皿内。每个平皿浇注约 5 0 的S P S琼脂 1 5 m L - 2 0 m L ， 仔细转动平皿， 使稀释液和琼脂充分混匀。 6 . 1 .
8、 4 上述琼脂平板凝固后， 倒置于厌氧培养装置内， 于3 6 士1 培养2 4 h . 6 . 1 . 5 选取长有3 0 个一3 0 0 个黑色菌落的平板， 计数黑色菌落数。 9 2 G B / T 4 7 8 9 . 1 3 -2 0 0 3 6 . 2 确证试验 6 . 2 . 1 由平板上任取 1 0 个黑色菌落， 分别按种F T培养基， 于3 6 士1 1C 培养1 8 h -2 4 h . 6 . 2 . 2 用上述培养液涂片， 革兰氏染色镜检。产气英膜梭菌为革兰氏阳性粗大杆菌， 其耐热株可能形 成卵形芽抱， 位于菌体中央或近端， 其宽度一般不大于菌体。 6 . 2 . 3 用接种
9、环( 针) 穿刺接种动力一 硝酸盐培养基， 于 3 6 士1 0C培养 2 4 h ， 观察接种线的生长情况， 判断有无动力。然后， 滴加甲 蔡胺液和对氨基苯磺酸液各。5 m L ， 观察硝酸盐是否被还原。 产气英膜 梭菌无动力， 能将硝酸盐还原为亚硝酸盐。 6 . 2 . 4 取生长旺盛的F T培养液1 m L接种于含铁牛乳培养基， 在4 6 水浴中培养2 h 后观察有无“ 暴 烈发酵” 现象， 5 h内不发酵者为阴性。产气荚膜梭菌发酵乳糖， 凝固酪蛋白 并大量产气， 呈“ 暴烈发酵” 现象， 但培养基不变黑。 6 . 2 . 5 用接种环取F T培养液点种于卵黄琼脂平板( 每张平板至少可接
10、种1 0 点) ， 于3 6 士1 厌氧培 养2 4 h ， 观察接种点的变化。产气荚膜梭菌产生卵磷脂酶， 分解卵黄中的卵磷脂， 接种点的底部及周围 形成乳白色的混浊带。 6 . 3 菌数计算 根据黑色菌落的计数( 6 . 1 . 5 ) 和确证试验的结果( 6 . 2 ) ， 计算每克( 毫升) 食品检样的含菌数。 例如: 1 0 ，稀释液的平板长有黑色菌落 1 0 0 个， 而供做确证试验的1 0 个菌落中有 7 个被确证为产 气荚膜梭菌， 则每克( 毫升) 食品检样所含产气英膜梭菌数为: 1 0 0 X0 . 7 X1 0 = 7 X1 0 *草庐一苇草庐一苇*提供优质文档， 如果 你下
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