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1、I C S 月 4 4 6 5 . 0 2 0 . 3 0 暑昌 中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 G B / T 1 4 9 2 6 . 5 0 一1 4 9 2 6 . 5 5 -2 0 0 1 实验动物微生物学检测方法( 3 L a b o r a t o r y a n i ma l -Mi c r o b i o l o g i c a l e x a mi n a t i o n me t h o d s 2 0 0 1 一 0 8 一 2 9发 布2 0 0 2 一 0 5 一 0 1实施 中华人民共和匡 国 家 质 量 监 督 检 验 检 疫 总 周 GB/ T 1
2、4 9 2 6 . 5 01 4 9 2 6 . 5 5 -2 0 0 1 目录 G B / T 1 4 9 2 6 . 5 0 -2 0 0 1 实验动物酶联免疫吸附试验 1 G B / T 1 4 9 2 6 . 5 1 -2 0 0 1 实验动物免疫酶试验. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5 G B / T 1 4 9 2 6 . 5 2 -2 0 0 1 实验动物
3、免疫荧光试验. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9 G B / T 1 4 9 2 6 . 5 3 -2 0 0 1 实验动物 血凝试验 二 二 ” 二 二 二 . . 1 2 G B / T 1 4 9 2 6 . 5 4 -2 0 0 1 实验动物血凝抑制试验 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
4、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 5 G B / T 1 4 9 2 6 . 5 5 -2 0 0 1 实验动物免疫酶组织化学法 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 9 GB/ T 1 4 9 2 6 . 5 2 -2 0 0 1 前言 本标准修订了G B / T 1 4 9 2 6 . 1 8 -1 9 9 4 实验动物淋巴细胞脉络
5、丛脑膜炎病毒检测方法 中的 免 疫荧光试验方法， 将其作为一个独立标准列出。 本标准由中华人民共和国科学技术部提出并归口。 本标准起草单位: 中国实验动物学会。 本标准主要起草人: 贺争鸣。 中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 实 验动 物免 疫 荧光试 验 G B / T 1 4 9 2 6 . 5 2 -2 0 0 1 La b o r a t o r y a n i ma l -I mmu n o f l u o r e s c e n c e a s s a y UF A) 范围 本标准规定了免疫荧光试验( I F A) 所用试剂、 器材和操作步骤等。 本标准适用于实验动物病毒
6、抗体的检测。 原理 含有病毒抗原的细胞( 组织培养细胞或动物组织细胞) 固定于玻片上， 遇相应抗体形成抗原抗体复 合物。 此抗原抗体复合物仍保持其抗原活性， 可与相应的第二抗体荧光素结合物结合。 荧光素在紫外光 或蓝紫光的照射下， 可激发出可见的荧光。因此 ， 在荧光显微镜下以荧光的有无和强弱判定结果。 主要试 剂与器材 3 . 1试剂 3 . 1 . 1 抗原片的制备 将病毒接种于敏感细胞上( 见表 1 ) ， 待细胞出现病变或确知细胞内含有丰富的病毒抗原后， 用胰酶 消化下细胞， P B S洗涤三次， 用适量 P B S悬浮细胞， 将细胞悬液滴于玻片孔中。同时消化未感染病毒的 同批细胞，
7、滴加同一玻片另一孔内， 作为正常细胞对照。 孔内滴加的细胞以细胞铺开、 不重叠为宜。 室温 干燥后， 冷丙酮( 4 C) 固定 1 0 mi n e P B S漂洗后， 充分干燥， 置于一2 0 备用。在一2 0 C 条件下可保存一 年。 3 . 1 . 2 羊或兔抗小鼠、 大鼠、 地鼠、 豚鼠、 兔、 犬或猴I g G异硫氰酸 荧光素结合物， 使用时用含。 . 0 1 %- 0 . 0 2 写伊文思蓝 P B S 稀释至适当浓度。 3 . 1 . 3 阳性血清 用病毒抗原免疫清洁或 S P F小鼠、 大鼠、 豚鼠、 地鼠或普通级兔、 犬、 猴所获得的抗血清; 或自然感 染恢复后的犬、 猴血清
8、。 3 . 1 . 4 阴性血清 清洁或S P F 小鼠、 大鼠、 豚鼠、 地鼠 血清; 或确认无相应病毒感染的兔、 犬、 猴血清。 3 . 1 . 5 P B S ( 0 . 0 1 m o l / L , p H7 . 4 ) 氯化钠8 9 氯化钾。 . 2 9 磷酸二氢钾。 . 2 9 磷酸氢二钠( N a , H P O , 1 2 H O) 2 . 8 3 g 蒸馏水加至1 0 0 0 m L 3 . 1 . 6 5 0 %甘油 P B S 甘油5 mL P B S ( 0 . 0 1 m o l / L, P H7 . 4 ) 5 mL 中华人民共和国国家质f监督检验检疫总局2 0
9、 0 1 一 0 8 - 2 9 批准2 0 0 2 - 0 5 - 0 1 实施 1 0 G B I T 1 4 9 2 6 . 5 2 -2 0 0 1 3 . 2器材 3 . 2 . 1 荧光显微镜。 3 . 2 . 2 超净工作台。 3 . 2 . 3 低温冰箱。 3 . 2 . 4 3 7 C 培养箱。 3 . 2 . 5 恒温水浴箱。 3 . 2 . 6 印有 1 0 4 0 个小孔的玻片。 3 . 2 . 7 微量加样器， 容量 5 5 0 k L , 4操作步骤 4 . ， 取出抗原片， 室温干燥后， 将适当稀释的待检血清和阴性、 阳性血清分别滴于抗原片上， 每份血清 加两个病
10、毒细胞孔和一个正常细胞孔， 置湿盒内， 3 7 C 3 0 - 4 5 m i n , 4 . 2 P B S洗三次， 每次 5 mi n , 室温干燥。 4 . 3 取适当稀释的荧光抗体， 滴加于抗原片上， 置湿盒内， 3 7 C 3 0 - 4 5 mi n , 4 . 4 P B S洗三次， 每次 5 mi n . 4 . 5 5 0 %甘油P B S封片， 荧光显微镜下观察。 5 结果判 定 在阴性、 阳性对照血清成立的条件下， 即阴性血清与正常细胞和病毒感染细胞反应均无荧光; 阳性 血清与正常细胞反应无荧光， 与病毒感染细 胞反应有荧光反应， 即可判定结果。 5 . 1 待检血清与正
11、常细胞和病毒感染细胞均无荧光反应， 判为阴性。 5 . 2 待检血清与正常细胞反应无荧光， 与感染细胞有荧光反应， 判为阳性。 根据荧光反应的强弱可判定 为十一+。 表 1 I F A细胞抗原片的 制备 *草庐一苇草庐一苇*提供优质文档， 如果 你下载的文档有缺页、 模糊等现象或 者遇到找不到的稀缺文件， 请发站内 信和我联系！我一定帮你解决！ 提供优质文档， 如果 你下载的文档有缺页、 模糊等现象或 者遇到找不到的稀缺文件， 请发站内 信和我联系！我一定帮你解决！ 本人有各种国内外标准 20 余万个， 包括全系 列 GB 国标国标及国内行业行业及部门标准部门标准，全系列 BSI EN DIN JIS NF AS NZS GOST ASTM ISO ASME SSPC ANSI IEC IEEE ANSI UL AASHTO ABS ACI AREMA AWS ML NACE GM FAA TBR RCC 各国船级 社 船级 社 等大量其他国际标准。豆丁下载网址：豆丁下载网址： http:/