《miRNA研究思路.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《miRNA研究思路.pdf（4页珍藏版）》请在三一文库上搜索。
1、经销商： 联系人： 订货电话： Promega Technology miRNA/siRNA 靶标靶标研究工具研究工具 萤光素酶报告基因： 检测蛋白：检测蛋白：miRNA 与靶标 mRNA 结合后，mRNA 可能不被降解，但蛋白翻译受 抑制，用 PCR 法检测 mRNA 无变化，但萤光素酶报告基因检测萤光素酶蛋白的 产生，更加准确反映 miRNA 作用机制 细胞无内源性萤光素酶活性：细胞无内源性萤光素酶活性：无细胞内源性酶活性干扰 灵敏灵敏：最低检测至 10-20 mole or 6000 个萤光素酶分子 线性范围宽线性范围宽：108 个数量级 操作简便操作简便：5 分钟完成细胞裂解、样品制备
2、和检测，同一样品中可检测萤火虫和 海肾萤光素酶双报告基因 结果量化：结果量化：化学发光法检测，发光仪读数直接得到量化结果 双报告基因载体： Cat.# 载体载体 骨架骨架 靶标报告基因靶标报告基因 内参内参报告报告基因基因 转染方式转染方式 萤光素酶萤光素酶 启动子启动子 萤光素酶萤光素酶 启动子启动子 C8021 psiCHECK-2 pGL3 hRluc (海肾) SV40 hluc+ (萤火虫) TK 瞬时转染 E1330 pmirGLO pGL4 Luc2 (萤火虫) PGK hRluc (海肾) SV40 瞬时转染或 稳定转染 单报告基因载体：（需共转染萤火虫萤光素酶载体 E1741
3、 或 E6681 做内参） Cat.# 载体载体 靶标报告基因靶标报告基因 启动子启动子 转染方式转染方式 C8011 psiCHECK-1 hRluc (海肾萤光素酶) SV40 瞬时转染 经销商： 联系人： 订货电话： 研究研究思路思路 一一：（明确（明确 miRNA 结合位点，研究细胞内源性结合位点，研究细胞内源性 miRNA 活性）活性） miRNA 研究举例研究举例 一一 经销商： 联系人： 订货电话： miRNA 研究举例研究举例 二二 miRNA 研究举例研究举例 三三 经销商： 联系人： 订货电话： 研究思路研究思路 二二:（高通量筛选有效（高通量筛选有效的的 siRNA） m
4、iRNA 研究文献（更多研究文献可用 psiCHECK 或 pmirGlo 为关键词在 Highware 检索得到）： 1. BRCA1 regulates microRNA biogenesis via the DROSHA microprocessor complex. Shinji Kawai et al, 2012, J. Cell Biol volume 197: 201 2. Sperm-borne microRNA-34c is required for the first cleavage division in mouse. Wei-Min Liu et al., 2012,
5、 PNAS, volume 109: 490 siRNA/dsRNA 应用文献： 1. Loss of human Greatwall results in G2 arrest and multiple mitotic defects due to deregulation of the cyclin B-Cdc2/PP2A balance. Andrew Burgess, et al., 2010, PNAS, 107, 1256412569 2. The SoxC protein SEM-2 opposes differentiation factors to promote a prol
6、iferative blast cell fate in the postembryonic mesoderm. Chenxi Tian, et al., 2011, Development 138, 1033-1043 shRNA 应用文献： 1. RIAM Regulates the Cytoskeletal Distribution and Activation of PLC-1 in T Cells. Nikolaos Patsoukis et al, 2009, Sci. Signal., volume 2: ra79 2. AS160 Modulates Aldosterone-stimulated Epithelial Sodium Channel Forward Trafficking. Xiubin Liang et al, 2010, Mol. Biol. Cell., volume 21: 2024 相关产品：