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1、西洋菜中叶绿素提取工艺研究目 录目录3摘要4第一章 前言.51.1 概述.51.2 研究意义和研究内容.6第二章 西洋菜中叶绿素提取的预备试验.72.1 确定取样量及稀释度.72.1.1 试验材料、仪器、试剂和方法.72.1.2 结果与分析.72.2 提取溶剂的选择.82.3 西洋菜中不同部位叶绿素含量测定.102.4 在不同预处理中叶绿素含量的变化.11第三章 西洋菜中叶绿素提取的单因素试验133.1 试验材料、试剂和仪器.133.2试验方法133.3试验结果与分析13 3.3.1 最佳提取时间的选择13 3.3.2 最佳提取温度的确定14 3.3.3 提取次数的确定.153.3.4 最佳料
2、液比的确定163.3.5 不同干燥时间对叶绿素含量的影响173.4 结论.18第四章 西洋菜中叶绿素提取的正交试验194.1 试验材料、试剂和仪器.194.2 试验方法.194.3 试验结果与分析.19第五章 超声波辅助提取叶绿素工艺研究225.1 超声波处理时间的确实.22 5.1.1 试验材料、试剂和仪器22 5.1.2 试验步骤22 5.1.3 结果与分析225.2 超声前后叶绿素的差异.23第六章 总结25参考文献.26致谢.27摘要本研究针西洋菜进行叶绿素提取的试验，采用乙醇提取法提取叶绿素，通过单因素试验和正交试验，获得最佳的提取次数、提取时间、料液比等。经研究得出西洋菜中叶绿素提
3、取最优工艺为：提取次数为3次、每次提取时间为40min、提取的料液比为1:5。最后做了超声波辅助提取试验，结果是它不能提高叶绿素的提取率。（之前是30min，现在40min到底多少呢？）关键词：西洋菜；叶绿素；单因素试验；正交试验；超声波。第一章 前言1.1 概述叶绿素（Chlorophyll）是高等植物进行光合作用的重要物质，结构为一个镁和四个吡咯环上的氮结合以卟啉为骨架的绿色色素的总称。早在1818年，Berzelius 就开始了对叶绿素的研究。1933 年美国以有机溶剂法为基础，开始工业生产叶绿素，此方法延用至今。目前，叶绿素及其各种衍生物的定性定量分析已经应用于各个领域，植物学中用来研
4、究叶绿素的种类和结构进行植物分类，海洋学中用来分析海洋中浮游植物的细胞丰度从而对海洋赤潮的发生规律进行监测，园艺学中用来研究各种瓜果的成熟机理以及保存方法，农学中用来研究光合作用机理，食品行业中用来分析叶绿素衍生物添加剂的含量以及食品的色泽。绿色食品近年来受到了人们广泛关注，而存在于绿色植物中的一种独特而重要的营养物质叶绿素，它的一些生理功能也开始备受重视。叶绿素的结构和血红素极相似，易于被人体吸收，有赋活细胞的作用，在医药、食品和日化工业中有广泛用途，由于叶绿素为天然品，无毒副作用，长期食用安全、可靠，因此，FAO/WHO对叶绿素每人日允许摄入量未作规定。目前，叶绿素已广泛应用于口香糖、硬糖
5、、果汁、琼脂、糕点等食品（但不能用于酸性或含钙食品，否则，易产生沉淀），日本已将其作为绿色色素用在食品添加剂中。医药工业上叶绿素具有改善便秘、降低胆固醇、抗衰老、排毒消炎、脱臭、抗癌抗突变、抗贫血、保肝等功能，对皮肤组织有再生作用，可用于治疗烫伤，慢性溃疡，能抑制葡萄球菌和链球菌生长，对齿龈炎、口臭、中耳炎等有一定疗效。另外，叶绿素可以防治感冒，感冒患者可将叶绿素溶液内服涂口唇或含漱，每日数次，1-2d 后症状可减轻。以叶绿素为原料研制治疗缺铁性贫血的叶绿素铁钠盐，提高白血球水平的叶绿素钴钠盐，增强智力和记忆力的叶绿素锌钠盐具有重要价值，由叶绿素制得的叶绿素铜钠盐更是生产治疗肝炎、胃病及十二脂
6、肠溃疡药物的重要原料。叶绿素铜钠盐还是“肝宝”胶囊剂、“胃肝绿”片、“升血宝”、“胃康U”等药物的重要有效成分。日化工业中用作制造香皂、香水、护肤霜、香波及牙膏等产品。因此，叶绿素的市场前景非常广阔，而降低生产成本、简化提取工艺、加强对叶绿素活性的一系列研究将对果蔬产业化应用、食品科学、医药保健等领域产生深远影响。1.2研究意义和研究内容本研究对西洋菜中叶绿素提取进行研究，采用乙醇提取法提取叶绿素，通过单因素试验、正交试验设计进行工艺优化，获得最佳提取工艺条件，以期为应用提供基础。第二章 西洋菜中叶绿素提取的预备试验2.1 确定取样量及稀释度2.1.1 试验材料、仪器、试剂和方法（1） 材料新
7、鲜的西洋菜（广州市海珠区中道轻工中道菜市场）。（2） 仪器和试剂S22pc型可见分光光度计、电子天平、研钵、容量瓶、小漏斗、玻璃棒、移液管、剪刀、定量滤纸、吸水纸、擦镜纸。无水乙醇，分析纯。（3） 试验方法西洋菜用自来水冲洗干净，分别收集茎和叶，用水冲洗， 晾干，按叶子25%，茎75%称取一定量的样品于烧杯中，粉碎。称样，加溶剂提取，静置，过滤，定容，稀释，测定，记录数据，计算结果。2.1.2 结果与分析（1）试验1：称取100g样品，用剪刀剪碎之后放到研钵中研磨，然后分别称10g到2个烧杯中用无水乙醇进行提取至样品呈白色（提取液基本无色），收集滤液，定容至100mL，用可见分光光度计分别测定
8、波长645nm和663nm处的吸光度。表1 试验1样品的叶绿素含量表样品编号12样品质量10.0210.03A6451.6751.678A6634.1764.180叶绿素总含量（mg/g）1.68561.6863（2）试验2：由试验1的吸光度值算出其稀释倍数为5倍，才能控制吸光度基本在0.20.8的范围内。移取试验1的样品处理液20mL至100mL的容量瓶中，用无水乙醇定容，摇匀后，用可见分光光度计分别测定波长645nm和663nm处的吸光度是否在0.20.8的范围内，然后确定取样量。表2 试验1样品稀释5倍的吸光度值样品编号1-12-1A6450.3350.337A6630.8350.858
9、由表2可见，经过稀释5倍之后，样液的吸光度值大概在0.20.8的范围内，所以为了节省溶剂，节省提取时间以及提取成本。我们确定了取样量为1g经过提取收集滤液后定容至50mL。但这样还是可能偏高（在波长663nm处的吸光度大于0.8），所以我们决定把取样量定为0.8g样品经处理，提取之后，定容至50mL。但由于取样量太少，可能存在取样不均匀的情况，所以我们确定了把取样量放大5倍，然后再把样液稀释5倍，以尽量减少取样不均的现象。即取4g样品，用溶剂提取之后定容至50mL，摇匀后，再从中吸取2mL样液至10mL容量瓶定容。2.2 提取溶剂的选择根据前人对叶绿素提取的经验表明，用丙酮、乙醇、乙酸乙酯、石
10、油醚等有机溶剂作为提取剂，叶绿素提取效果较好。本试验对相关影响因素进行研究。表3 不同溶剂对叶绿素提取的影响溶剂乙酸乙酯无水乙醇石油醚丙酮样品质量（g）4.054.034.024.04A6450.1760.2590.0280.295A6630.4000.7020.0700.682叶绿素含量（mg/g）0.43880.67610.07030.7097图1 溶剂与叶绿素含量之间的关系由表3和图1可以看出，丙酮的提取率是最大的；但是由于丙酮对中枢神经系统的抑制、麻醉作用，属于轻微中枢神经抑制剂。丙酮在有氧及无氧状态下均会迅速生物分解，但丙酮高浓度下对微生物有毒。高浓度接触对个别人可能出现肝、肾和胰腺
11、的损害。正是因为丙酮的危害性与丙酮的价钱都比乙醇相对要高，所以从比较安全的角度和经济实惠的角度上来说，要使用在大规模的生产中和应用在食品加工中，乙醇都是属于比较安全合适的溶剂。通过上述试验，确定了取样量、稀释倍数以及所用的提取溶剂。具体是操作步骤如下：1、 清洗：将市场上买回来的新鲜西洋菜，用自来水冲洗掉表面的泥沙后（尽量保持菜身的完整），放在吸水纸上，以吸去菜身表面吸附的多余水分，分别收集茎和叶。2、 研磨：将西洋菜（按茎：叶=3:1）用剪刀剪碎放到研钵中，小心研磨至变成泥状3、 称样：用0.01感量的电子天平，称取4g样品于小烧杯中4、 提取：加810mL无水乙醇（以能没过样品为准）于样品
12、中，用玻璃棒搅拌均匀后放到暗处静置510min，取出后过滤到50mL容量瓶中，多次浸提、过滤至样品组织呈白色（或浸泡液基本无色）；用无水乙醇定容，摇匀。5、 稀释：移取2mL的样品提取液至10mL容量瓶中，用无水乙醇定容，摇匀，静置，尽快用可见光分光光度计测定。6、 测定：将样品稀释液用1cm比色皿分别在波长645nm和663nm处测吸光度，记录读数。7、 分析数据，计算叶绿素含量叶绿素总含量（mg/g）=式中 A645样品稀释液在波长645nm时的吸光度； A663样品稀释液在波长663nm时的吸光度； n 稀释倍数； V 样品溶液体积，mL； m 样品质量，g.2.3 西洋菜中不同部位叶绿
13、素含量测定 （1） 试验仪器与试剂S22pc型可见分光光度计、电子天平、 研钵、容量瓶、小漏斗、玻璃棒、移液管、剪刀、 定量滤纸、吸水纸、擦镜纸、无水乙醇。（2） 试验步骤 将西洋菜洗净擦干，茎叶分离，整体按茎：叶=3:1的比例取样，叶称取0.8g，茎和整体都称取4g，用剪刀剪碎放到研钵中，小心研磨至变成泥状。加8mL无水乙醇提取，放入暗处10min，取出过滤到50mL容量瓶中。重复提取，至样品组织变白。用无水乙醇定容到50mL。移取2mL样液到10mL容量瓶中，用无水乙醇定容。将样品稀释液用1cm比色皿分别在波长645nm和663nm处测吸光度，记录读数。表4 西洋菜中不同部位的叶绿素含量表
14、茎叶整体样品质量（g）4.000.84.00A6450.0510.6070.220A6630.1051.5380.547叶绿素含量（mg/g）0.11747.71300.5539图2 西洋菜中不同部位的叶绿素含量由表4和图2可知，只取西洋菜的茎做试验时，叶绿素含量太低，取样量较大，只取叶做试验时，叶绿素含量太高，取样量较少，两者都不适合做试验，当取整体（即茎：叶=3:1）时，最适合做试验。2.4 在不同预处理中叶绿素含量的变化 （1） 试验仪器与试剂S22pc型可见分光光度计、电炉、电子天平、 研钵、容量瓶、小漏斗、玻璃棒、移液管、剪刀、 定量滤纸、吸水纸、擦镜纸、无水乙醇、碳酸钙。（2） 试
15、验步骤预处理：称4份未研磨的西洋菜各4g。一份空白对照，直接研磨；一份用人水烫2min后研磨；一份用碱水烫2min后研磨；一份加碱研磨。加8mL无水乙醇提取，放入暗处10min，取出过滤到50mL容量瓶中。重复提取，至样品组织变白。用无水乙醇定容到50mL。移取2mL样液到10mL容量瓶中，用无水乙醇定容。将样品稀释液用1cm比色皿分别在波长645nm和663nm处测吸光度，记录读数。表5不同预处理与叶绿素含量的关系表处理方法空白样品热汤2min加碱热汤2min加CaCO3研磨样品质量（g）4.084.084.094.05A6450.2200.2510.1810.233A6630.5470.6
16、430.4670.597叶绿素含量（mg/g）0.53710.63500.45860.5821图3 不同预处理中叶绿素含量的变化由表5和图3可知，经过热烫2min处理后的样品所提取的叶绿素含量是最高的，其次是加CaCO3研磨、空白样品，最低是加碱热烫2min的。所以在生产和加工工艺中，可以先把样品热烫一下，这样提取叶绿素的效果会更好。第三章 西洋菜中叶绿素提取的单因素试验3.1试验材料、试剂和仪器新鲜的西洋菜（广州市海珠区中道轻工中道菜市场）；无水乙醇；可见分光光度计S22pc、电子天平、 研钵、容量瓶、小漏斗、玻璃棒、移液管、剪刀、定量滤纸、吸水纸、擦镜纸。3.2 试验方法将西洋菜洗净擦干，
17、茎叶分离，按茎：叶=3:1的比例取样，称40g样品，用剪刀剪碎放到研钵中，小心研磨至变成泥状，待用。按各种不同方法处理样品，过滤到50mL容量瓶中，用无水乙醇定容到50mL。移取5mL样液到25mL容量瓶中，用无水乙醇定容。将样品稀释液用1cm比色皿分别在波长645nm和663nm处测吸光度，记录读数。3.3试验结果与分析3.3.1 最佳提取时间的选择称取7份待用样品于小烧杯中，每份的质量为4g。各加30mL无水乙醇一次提取，放入暗处，时间分别是0 min、5 min、10 min、20 min、30 min、45 min、60min。过滤，稀释，上机检测，记录数据。表6提取时间与叶绿素含量的
18、关系表提取时间（min）051020304560样品质量（g）4.054.064.054.004.004.084.02A6450.700.1770.1770.2050.2160.1920.180A6630.1770.4620.4720.5370.5730.4800.472叶绿素含量（mg/g）0.17550.44990.45590.52980.56110.47390.4737图4 提取时间与叶绿素含量的关系由表6和图4可知，随着提取时间的增加，叶绿素含量呈上升趋势，在30min处达到最高点，然后呈下降趋势，所以最佳的提取时间是30min。3.3.2 最佳提取温度的确定称取5份待用样品于小烧杯中
19、，每份的质量为4g。各加30mL无水乙醇一次提取，提30min。温度分别是室温、30、40、50、60。过滤，稀释，上机检测，记录数据。表7在不同温度下叶绿素含量的变化表提取温度（）室温30405060样品质量（g）4.044.054.024.084.01A6450.2100.1940.1620.1590.162A6630.4660.4670.3990.3720.394叶绿素含量（mg/g）0.49550.47470.40390.38090.4024图5 提取温度与叶绿素含量的关系由表7和图5可知，在室温环境下，所提取的叶绿素含量是最高的，随着温度升高，叶绿素含量愈来愈低，50时达到最低点，虽
20、然60时有上升趋势，但温度越高，耗能越大，而且会破坏西洋菜中的叶绿素，因此，最佳的提取温度是室温。3.3.3 提取次数的确定称取4g待用样品于小烧杯中。每次加16mL无水乙醇提取，提取三次，每次提30min。三次的滤液分别过滤到3个50mL容量瓶中，用无水乙醇定容到50mL。稀释，上机检测，记录数据。表8 提取次数与叶绿素含量的关系表提取次数（次）123样品质量（g）两个平行样的质量都是4.04gA6450.5360.5430.2110.2720.0600.0660.5400.2420.063A6451.0041.0020.5240.7060.1550.1811.0030.6150.168叶绿
21、素含量（mg/g）0.23540.12200.0325图6 提取次数与叶绿素含量的关系三次提取完后，西洋菜的组织已经变白，那么该样品中的叶绿素已完全或基本完全被提取出来，由表8和图6可知，（0.2354+0.1220）/（0.2354+0.1220+0.0325）100=91.7。即第一次和第二次提取出来的叶绿素占三次所提取的叶绿素总含量的91.7，所以，提取次数就确定为2次。3.3.4 最佳料液比的确定称取4份样品于小烧杯中，每份的质量为4g。分别按照西洋菜：溶剂=1:2、1:3、1:4、1:5，在室温下提取两次，每次30min。过滤，稀释，上机检测，记录数据。表9 料液比与叶绿素含量的关系
22、料液比1 : 21 : 31 : 41 : 5样品质量（g）4.014.014.024.00A6450.1470.1250.1550.142A6630.3770.3310.4120.384叶绿素含量（mg/g）0.37490.32400.40160.3730图7 料液比与叶绿素含量的关系由表9和图7可知，当料液比为1:2时，所提取的叶绿素含量是0.3749，1:3时是0.3240，1:4时是0.4016，1:5时是0.3730，由此可见，当料液比为1:4时，所提取的叶绿素含量最高，所以最佳的料液比是1:4。3.3.5 不同干燥时间对叶绿素提取的影响将西洋菜洗净擦干，茎叶分离，按茎：叶=3:1的
23、比例取样。称取5份没经研磨的样品于小烧杯中，每份的质量为4g，放入60恒温烘箱里，分别烘0 h、1 h 、3 h 、5 h 、7 h。取出，在室温下提取两次，每次30min。过滤，稀释，上机检测，记录数据。表10 不同干燥时间与叶绿素含量的关系干燥时间（h）01357样品质量（g）4.014.064.034.074.03A6450.2750.2100.2110.2040.203A6630.6780.5390.5420.5380.540叶绿素含量（mg/g）0.68770.52920.53590.51990.5248图8 干燥时间与叶绿素含量的关系由表10和图8可知，干燥时间为0min的样品测出
24、的叶绿素含量最高，（0.68770.5359）/0.5359=0.28，比5h的多了28，比1h、3h、7h的就多更多了，所以没经过干燥的样品最适合用于提取叶绿素。3.4 结论由以上单因素试验结果可知，各因素最佳的水平分别是：提取时间为30min，提取温度为室温，提取次数为2次，料液比为1:4，干燥时间为0min。第四章 西洋菜中叶绿素提取的正交试验4.1 试验材料、试剂和仪器新鲜的西洋菜（广州市海珠区中道轻工中道菜市场）；无水乙醇；可见分光光度计S22pc、电子天平、 研钵、容量瓶、小漏斗、玻璃棒、移液管、剪刀、定量滤纸、吸水纸、擦镜纸。4.2 试验方法将西洋菜洗净擦干，茎叶分离，按茎：叶=
25、3:1的比例取样，称40g样品，用剪刀剪碎放到研钵中，小心研磨至变成泥状，待用。称9份待用样品，各4g。按正交表的因素水平的要求处理样品，过滤到50mL容量瓶中，用无水乙醇定容到50mL。（第7号试验用100mL容量瓶）移取5mL样液到25mL容量瓶中，用无水乙醇定容。将样品稀释液用1cm比色皿分别在波长645nm和663nm处测吸光度，记录读数。4.3 试验结果与分析（1） 制定试验的因数水平表表11叶绿素提取的因数水平表水 平因 数提取次数A（次）提取时间B（min）料液比C11201 : 322301 : 433401 : 5（2） 西洋菜中叶绿素提取的正交试验表表12 西洋菜中叶绿素提
26、取正交试验结果L(33)试验编号提取次数A（次）提取时间B（min）料液比C叶绿素含量（mg/g）11110.334621220.362531330.387342120.496552230.508862310.501873130.572383210.511393320.5505K11.08441.40341.3477总和4.2256K21.50711.38261.4095K31.63411.43961.4684K10.36150.46780.4493平均值之和1.4086K20.50240.46090.4698K30.54470.47990.4895R0.18320.01900.0197优化水
27、平A3B3C3根据叶绿素含量，结果见表12，对叶绿素含量结果进行极差分析，由极差（R）可知，影响因素的主次为：提取次数料液比提取时间。对表12的结果进行分析，得到最优组合为：A3 B3 C3 ，即提取次数3次、提取时间40min、料液比1:5。（你组中有同学做的是30min，？）（3） 画出因素与指标间的关系示意图图9 提取次数、提取时间、料液比与叶绿素含量的关系示意图（4） 最优配方验证试验表13 最优配方验证试验平行样12样品质量（g）4.044.04A6450.2430.223A6630.6430.598叶绿素含量（mg/g）0.62500.5775叶绿素平均含量（mg/g）0.6013
28、第五章 超声波辅助提取叶绿素工艺研究5.1 超声波处理时间的确实5.1.1 试验材料、试剂和仪器新鲜的西洋菜（广州市海珠区中道轻工中道菜市场）；无水乙醇；可见分光光度计S22pc、超声波清洗机HS6150、紫外可见分光光度计UV-2450、电子天平、 研钵、容量瓶、小漏斗、玻璃棒、移液管、剪刀、 定量滤纸、吸水纸、擦镜纸。5.1.2 试验步骤将西洋菜洗净擦干，茎叶分离，按茎：叶=3:1的比例取样，称40g样品，用剪刀剪碎放到研钵中，小心研磨至变成泥状。称取4份样品于小烧杯中，每份的质量为4g。各加20mL无水乙醇，放入超声波清洗机里超声，超声时间分别为0 min 、5 min 、10 min、
29、 20 min，取出放置40min，过滤到100mL容量瓶中，再进行第二次和第三次提取，分别加20mL，最后用无水乙醇定容到100mL。移取5mL样液到25mL容量瓶中，用无水乙醇定容。将样品稀释液用1cm比色皿分别在波长645nm和663nm处测吸光度，记录读数。5.1.3 结果与分析表14 超声波辅助提取叶绿素的研究超声时间（min）051020样品质量（g）4.034.014.024.03A6450.2400.1900.2010.214A6630.6050.4910.5160.541叶绿素含量（mg/g）0.60380.48650.51160.5392图10 超声波辅助提取时间与叶绿素含
30、量的关系由表14和图10可知，没经过超声处理的样品叶绿素含量是0.6038，经过超声处理的叶绿素含量分别为0.4865、0.5116和0.5392，很明显，没经过超声处理的叶绿素提取率更高，可能超声后叶绿素部分被破坏了，含量减少了，所以超声对叶绿素提取无效果。5.2 超声前后叶绿素的差异用紫外分光光度计扫描上述4个样品，它们的综合谱图见图11。图11 叶绿素综合谱图在图11中，最高的峰是叶绿素a的峰，红色的线代表超声处理时间为0min的样品，浅蓝色的线代表超声处理时间为5min的样品，浅紫色的线代表超声处理时间为10min的样品，浅绿色的线代表超声处理时间为20min的样品。它们的出峰位置都一
31、样，没有偏移，所以超声前后叶绿素本质没有差异，只是叶绿素的含量不一样而已。第六章 总结经过十多天的努力，终于完成了整个毕业论文涉及的所有试验。本次试验研究的是西洋菜中叶绿素的提取工艺。我们做了预备试验，确定了一个提取叶绿素的方案。西洋菜经过热水漂烫2min预处理后，提取叶绿素的效果会更佳，我们本次用于提取叶绿素的溶剂是无水乙醇，为什么选择它呢，从试验中可以看出，丙酮的提取效果比无水乙醇好，但是，它有一定的危害性，正是因为丙酮的危害性与丙酮的价钱都比乙醇相对要高，因此，从比较安全的角度和经济实惠的角度上来说，乙醇都是属于比较安全合适的溶剂。然后做单因素试验，确定了各因素的最佳水平，提取时间为30
32、min，提取温度为室温，提取次数为2次，料液比为1:4，干燥时间为0min。接着选择提取时间、次数和料液比作因素水平表。最后做正交试验，得出的最优配方是提取次数为3次，提取时间为40min，提取的料液比为1:5。做干燥时间的研究时，我们发现，没经过干燥的样品，所提取出来的叶绿素含量比经过干燥的都高。干燥时间达到5小时的样品，研磨后已成粉末状，毫无水分，非常干燥，以后有机会可以进行干燥后处理的研究。西洋菜中叶绿素提取的最优工艺条件确定后，我们还做了超声波辅助提取叶绿素工艺研究。结果是没经超声的样品提取出来的叶绿素比经过超声的含量都高，用紫外分光光度计扫描这两种样品发现，没有进行超声辅助的样品比进
33、行了超声辅助的样品的峰更高，即叶绿素含量更多，这说明超声波辅助提取没什么作用。参考文献1 张海英，雷佳红，黄海波，朱佳玉荷叶叶绿素的提取及稳定性研究J中国酿造2010，（9）：105-108.2 于艳杰，刘岩，刘春梅，张立新，胡文贺凤梨叶中叶绿素提取工艺的研究J江苏农业科学2010，(6)：446-447.3 贾长英，唐丽华，张晓娟，等青草叶绿素提取工艺的研究J杭州化工2008，38(2)：16-17.4 张鸿发，励建荣，童军华从海带中提取叶绿素的研究J武汉工业学院学报2000，（3）：9-11.5 张霞菠菜叶中叶绿素提取工艺研究J中国食物与营养2008，（5）：40-43.6 潘慧娟不同溶剂对蚕沙中叶绿素提取效果的影响J杭州师范学院学报（自然科学版）2006,5（1）：50-52.7 陈小全，田坤新，邵辉莹，翟虎菠菜叶绿素的提取及叶绿素铜钠盐的制备J泰山医学院学报2010,31（4）：259-261.24