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1、,消毒灭菌与病原微生物实验室生物安全,第一节 消毒灭菌的常用术语,消毒(disinfection) 利用理化因素杀死物体或环境中病原微生物的措施。并不一定能杀死含芽胞的细菌或非病原微生物 灭菌(sterilization) 利用理化因素杀死物体上所有微生物的过程，包括芽胞。,防腐(antisepsis)：体外防止或抑制细菌生长繁殖的方法 清洁（cleaning）：是指通过除去尘埃和一切污 秽以减少微生物数量的过程。 无菌(asepsis) 不存在任何活菌 无菌操作（aseptic technique)：防止细菌进入人体或其他物品的操作技术,第一节 消毒灭菌的方法,一、物理消毒灭菌法 常用的有:
2、热力、紫外线、辐射、超声波、滤过 干燥 低温 最重要的是热力 二、化学消毒灭菌法,热力灭菌法,（一）干热灭菌,焚烧、烧灼、 红外线 干烤（160170/2h）,（二）湿热灭菌,巴氏消毒法pasteurization 煮沸法 30分钟 流动蒸气灭菌法 间歇蒸气灭菌法 高压蒸气灭菌法 121,15个大气压,20分钟,同一温度下,湿热比干热效果好,用较低温度杀灭液体中的病原菌或特定微生物，而仍保持物品中所需的不耐热成分不被破坏的消毒方法。 6230min 或72 30sec,2.影响湿热灭菌的因素(了解),(1)微生物因素: (2)温度与作用时间: (3)pH值的影响: (4)介质的性质:,辐射杀菌
3、法 1、电离辐射 X、射线 原理:通过产生OH-、O2等活性游离基进行杀菌；通过破坏DNA的结构导致菌体死亡 2、非电离辐射 （1）紫外线 200300nm 杀菌原理：导致DNA分子构型改变，导致DNA复制出现差错 用途与缺陷 只用于空气和物品表面的消毒，用时注意防护 （2）日光 能杀死大部分的微生物 （3）微波 常用于对非金属器械的消毒,滤过除菌法,1、贝克菲滤器 2、蔡氏滤器 3、玻璃滤器 4、膜滤器 孔径 0.22um-0.45um除菌25-100nm可去除病毒 空气过滤器:无菌棉花、活性炭及细玻璃纤维等 可对空气进行过滤除菌,2007-5-26,9,超声波消毒法 原理：空穴效应,干燥与
4、低温抑菌法,抑菌和灭菌 常用冷冻法贮藏菌种 要注意: 迅速冷冻 加入冷冻保护剂 一般-20-70度,冷冻真空干燥保存菌种,滤器和层流室,化学消毒灭菌法(外用),常用消毒剂的杀菌机制 使菌体蛋白变性或凝固 干扰微生物酶系统和影响其代谢 损伤细胞壁、细胞膜,二、化学消毒灭菌法,（一）高效消毒剂 （high-level disinfectants） 1.含氯消毒剂；2.过氧化物消毒剂； 3.醛类消毒剂；4.环氧乙烷 （二）中效消毒剂 （intermediate-level disinfectants） 1.含碘消毒剂；2.醇类消毒剂 （三）低效消毒剂 （low-level disinfectants
5、） 1.季铵盐类；2.氯已定；3.高锰酸钾,固体二氧化氯消毒剂,消毒剂的主要类型及应用,重金属盐类 1%硝酸银 氧化剂 0.1% 高锰酸钾、3%过氧化氢 酚 石炭酸 醇类 70-75%的乙醇 醛类 37%-40%福尔马林 卤素类 0.2ppm-0.5ppm氯,2.0%-2.5%碘酒 酸碱类 15%-25%生石灰、50%醋酸蒸发 表面活性剂 0.1%新洁尔灭 染料菌 2%-4%龙胆紫 烷化剂 50mg/L环氧乙烷,医学上常用消毒剂类型作用机制及种类,p40,第三节 消毒灭菌的运用,（一）高危器械物品 用时需进入无菌组织 的物品。所有这些物品都应该灭菌。 （二）中危器械物品 用时不进入无菌组织 但
6、接触黏膜的器械。采用消毒即可。 （三）低危器械物品 只接触未损伤皮肤但 不进入无菌组织和不接触黏膜的物品。 一般用后清洗、消毒即可。 （四）快速周转的医疗器械,一、医疗器械物品的消毒灭菌,（二）室内空气消毒灭菌 1.物理消毒法 紫外线照射（1.5W/m3，1h）最常用；滤过除菌：空气通过孔径小于0.2 m的高效过滤装置以除去细菌和带菌尘埃 2化学消毒法 包括化学消毒剂喷雾和熏蒸：过氧乙酸喷雾、熏蒸；过氧化氢喷雾；二氧化氯溶液喷洒；中草药点燃烟熏 （三）手和皮肤的消毒 用肥皂和流动水经常并正确洗手 病原微生物污染时应用消毒剂消毒。,（四）黏膜的消毒 （五）病人排泄物与分泌物的消毒灭菌 （六）病人
7、污染物品的消毒 （七）饮水的消毒 （八）环境的消毒,影响消毒灭菌效果的因素,消毒剂的性质、浓度与作用时间 微生物的种类与数量 温度 酸碱度 有机物,第四节 影响消毒灭菌效果的因素,一、微生物的种类 二、微生物的物理状态 三、微生物的数量 四、消毒剂性质、浓度与作用时间 五、温度 六、酸碱度 七、有机物,第四节 病原微生物实验室生物安全,生物安全（biosafety）是生物技术安全（safety of biotechnology）的简称 狭义地指现代生物技术的研究、开发、应用及转基因生物可能对生物多样性、生态环境和人类健康产生潜在的危害。 广义地指与生物有关的各种因素对社会、经济、人类健康及生态
8、环境所产生的危害或潜在风险。,病原微生物所致的安全问题，如病原微生物实验室的安全隐患、生物武器、生物恐怖、重大传染病的暴发流行等，也是人类社会所面临的最现实的生物安全问题 病原微生物实验室生物安全的核心是防扩散和防感染 关于病原微生物实验室生物安全，我国法令包括对病原微生物的分类管理，对实验室的分级管理，实验室感染的控制以及监督和法律责任等,一、病原微生物的分类,根据传染性、感染后对个体或者群体的危害程度，病原微生物分为四类： 第一类是指能够引起人类或者动物非常严重疾病的微生物，以及我国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物。 第二类是指能够引起人类或者动物严重疾病，比较容易直接或者间接在人与人、动
9、物与人、动物与动物间传播的微生物。,第三类是指能够引起人或动物疾病，但一般情况下对人、动物或环境不构成严重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严重疾病，并且具备有效治疗和预防措施的微生物。 第四类是指在通常情况下不会引起人或动物疾病的微生物。如小鼠白血病病毒等。 第一类、第二类统称为高致病性病原微生物。,二、病原微生物实验室的分级,一、二级实验室不得从事高致病性病原微生物实验活动。三级、四级实验室从事高致病性病原微生物实验活动。 从事高致病性病原微生物相关实验活动应当有名以上的工作人员共同进行。在同一个实验室的同一个独立安全区域内，只能同时从事一种高致病性病原微生物的相关实验活动。应有健全
10、安全保卫制度 。,实验室工作人员应掌握实验室技术规范、操作规程、生物安全防护知识和实际操作技能。应有符合要求的防护用品，应建立健康档案；进行预防接种。 实验室应有科学、严格的管理制度，定期对实验室设施设备、材料等进行检查、维护和更新，应对废水、废气以及其他废物进行合理处置，防止环境污染。,生物安全,三、实验室感染的控制以及监督和法律责任,实验室感染控制工作包括定期检查实验室的生物安全防护、病原微生物菌（毒）种和样本保存与使用、安全操作、实验室排放的废水和废气以及其他废物处置等实施情况。 实验室发生高致病性病原微生物泄漏时，预防、控制措施包括：封闭被病原微生物污染的实验室或可能造成病原微生物扩散
11、的场所；开展流行病学调查；对病人进行隔离治疗，对相关人员进行医学检查；对密切接触者进行医学观察；进行现场消毒；对染疫或者疑似染疫的动物采取隔离、扑杀等措施。,监督的主要内容是监督病原微生物实验室执行国家有关法律、行政法规、国家标准和要求的记录、档案及报告的情况 法律责任的核心是承担造成传染病传播、流行或者其他严重后果的法律责任,习题 1.杀灭芽胞最常用和最有效的方法是：_。 a.紫外线照射 b.煮沸5min c.巴氏消毒法d.流通蒸气灭菌法 e.高压蒸气灭菌法 2.灭菌方法错误的是_。 a.手术室空气-紫外线 c.饮水-氯气 b.排泄物-漂白粉 d.含血清培养基-高压蒸气灭菌 e.温度计-75
12、%酒精 3.下述不可能杀灭细菌芽胞的方法是： _。 a.煮沸法 b.巴氏消毒法 c.间歇灭菌法 d.干热灭菌法 e.高压蒸气灭菌法,4.关于紫外线，说法错误的是_。 a.其杀菌作用与波长有关 c.265-266nm杀菌作用最强 b.可损坏细菌的DNA构型 d.其穿透力弱，故对人体无损害 e.紫外线适用空气和物体表面的消毒 5.常用于空气或物体表面的消毒_。 a.高压蒸气灭菌法 b.紫外线照射法 c.滤过除菌法 d.巴氏消毒法 e.干烤法 6.常用于基础培养基灭菌_。 a.高压蒸气灭菌法 b.紫外线照射法 c.滤过除菌法 d.巴氏消毒法 e.干烤法,7.常用于手术器械的灭菌_。 a.高压蒸气灭菌法 b.紫外线照射法 c.滤过除菌法 d.巴氏消毒法 e.干烤法 8.常用于血清的除菌_。 a.高压蒸气灭菌法 b. 滤过除菌法 c. 紫外线照射法 d.巴氏消毒法 e.干烤法 9.将牛奶加热6230分钟的目的是_。 a.使牛奶中的蛋白质变性，易于吸收 b.杀灭牛奶中的所有微生物 c.杀死牛奶中的病原菌 d.使牛奶不含活菌 e.防止或抑制微生物在牛奶中生长和繁殖 10.乙醇消毒剂常用的浓度是： _。 a.100 b.95 c.75d.50e.30,