《2019-2020学年高二生物人教版选修一讲义：专题二 课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 Word版含答案.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《2019-2020学年高二生物人教版选修一讲义：专题二 课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 Word版含答案.pdf（16页珍藏版）》请在三一文库上搜索。
1、 一、研究思路一、研究思路 1筛选菌株筛选菌株 (1)原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、包括营养、温度、pH 等等)，同时抑制或，同时抑制或 阻止其他微生物的生长。阻止其他微生物的生长。 (2)选择培养基：允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的选择培养基：允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的 培养基。培养基。 2统计菌落数目统计菌落数目 (1)常用方法 ： 稀释涂布平板法。 当样品的稀释度足够高时， 培养基表面生长的一个菌落，常用方法 ： 稀释涂布平板法。 当样品的稀释度足够高时， 培养基
2、表面生长的一个菌落， 来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有 多少活菌。多少活菌。 (2)测定微生物数量的常用方法还有显微镜直接计数法。测定微生物数量的常用方法还有显微镜直接计数法。 3设置对照：排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。设置对照：排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。 二、实验设计二、实验设计 土土壤壤取取样样样样品品的的稀稀释释微微生生物物的的培培养养与与观观察察 1 土壤取样一般要铲去表层土， 因为绝大多数细菌分
3、布于距地表约 土壤取样一般要铲去表层土， 因为绝大多数细菌分布于距地表约 38_cm的土壤层。的土壤层。 2样品的稀释：不同的微生物需要稀释的倍数不同。样品的稀释：不同的微生物需要稀释的倍数不同。(填表填表) 微生物微生物细菌细菌放线菌放线菌真菌真菌 稀释倍数稀释倍数104、105、106103、104、105102、103、104 3.微生物的培养与观察微生物的培养与观察 (1)培养：不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间。培养：不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间。 (2)观察：每隔观察：每隔 24_h 统计一次菌落数目，最后选取菌落数目稳定时的记录作为结果。统计
4、一次菌落数目，最后选取菌落数目稳定时的记录作为结果。 三、操作提示三、操作提示 1无菌操作：取土样用的小铁铲和盛土样的信封都要进行灭菌；称取土样要在火焰旁无菌操作：取土样用的小铁铲和盛土样的信封都要进行灭菌；称取土样要在火焰旁 进行，稀释样品要在火焰旁操作。进行，稀释样品要在火焰旁操作。 2做标记：对平板和试管进行标记，尤其进行系列稀释时要按照稀释度递增的顺序将做标记：对平板和试管进行标记，尤其进行系列稀释时要按照稀释度递增的顺序将 课课题题2 土土壤壤中中分分解解尿尿素素的的细细菌菌的的分分离离与与计计数数 试管排列成行。试管排列成行。 3制定计划：对于耗时较长的生物实验，要事先规划时间，以
5、便提高工作效率。制定计划：对于耗时较长的生物实验，要事先规划时间，以便提高工作效率。 四、菌种鉴定四、菌种鉴定 1原理：分解尿素的细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，使培养基的碱性增强。原理：分解尿素的细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，使培养基的碱性增强。 2方法：在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变红，方法：在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变红， 可确定该种细菌能够分解尿素。可确定该种细菌能够分解尿素。 探究点一探究点一筛选微生物的研究思路筛选微生物的研究思路 共研探究共研探究 1筛选菌株筛选菌株 分析下表所示培养基的配方，回答下列问题：分析下表所
6、示培养基的配方，回答下列问题： 成分成分含量含量成分成分含量含量 KH2PO41.4 g葡萄糖葡萄糖10.0 g Na2HPO42.1 g尿素尿素1.0 g MgSO47H2O0.2 g琼脂琼脂15.0 g 将上述物质溶解后，用自来水定容到将上述物质溶解后，用自来水定容到 1 000 mL (1)在该培养基的配方中，为微生物提供碳源的物质是葡萄糖，提供氮源的物质是尿素。在该培养基的配方中，为微生物提供碳源的物质是葡萄糖，提供氮源的物质是尿素。 (2)该培养基是否具有选择作用，为什么？该培养基是否具有选择作用，为什么？ 提示：是。绝大多数微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成脲酶的微生物才能分解
7、尿素， 本培养基以尿素为唯一氮源， 可以分离得到产生脲酶的微生物 提示：是。绝大多数微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成脲酶的微生物才能分解 尿素， 本培养基以尿素为唯一氮源， 可以分离得到产生脲酶的微生物(即分解尿素的微生物即分解尿素的微生物)。 2统计菌落数目统计菌落数目 1尿素能被尿素分解菌分解的原因是什么？尿素能被尿素分解菌分解的原因是什么？ 2 筛选菌落和统计菌落数目的方法及对照实验的设计方法 是什么？ 筛选菌落和统计菌落数目的方法及对照实验的设计方法 是什么？ 3如何利用选择培养基分离细菌？如何利用选择培养基分离细菌？ 4样品如何进行稀释？如何测定分解尿素的细菌数量？样品如何进行稀
8、释？如何测定分解尿素的细菌数量？ 5脲酶的检测方法是什么？脲酶的检测方法是什么？ (1)为了保证结果准确，一般选择菌落数在为了保证结果准确，一般选择菌落数在 30300 的平板进行计数。的平板进行计数。 (2)要设置对照实验，且一定要涂布至少 个平板作为重复组，才能增强实验的说服力与要设置对照实验，且一定要涂布至少 个平板作为重复组，才能增强实验的说服力与3 准确性。准确性。 (3)用此种方法统计的菌落数目往往比活菌的实际数目。这是因为当两个或多个细胞用此种方法统计的菌落数目往往比活菌的实际数目。这是因为当两个或多个细胞低低 连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因此，统计结果一般用菌落数而
9、不是用活菌连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因此，统计结果一般用菌落数而不是用活菌 数来表示。数来表示。 (4)活菌数的计算方法活菌数的计算方法(公式公式)：每克样品中的菌株数：每克样品中的菌株数(CV)M。C 表示某一稀释度下 平板上生长的平均菌落数； 表示某一稀释度下 平板上生长的平均菌落数；V 表示涂布平板时所用的稀释液的体积；表示涂布平板时所用的稀释液的体积；M 表示稀释倍数。表示稀释倍数。 3设置对照设置对照 教材教材 P2223 提供的案例中提供的案例中 A 同学的结果与其他同学不同，可能的解释有两种。一是 由于土样不同，二是由于培养基污染或操作失误。如何设置对照实验来确定原
10、因？ 同学的结果与其他同学不同，可能的解释有两种。一是 由于土样不同，二是由于培养基污染或操作失误。如何设置对照实验来确定原因？ 提示：方案一：其他同学用与提示：方案一：其他同学用与 A 同学一样的土样进行实验，如果结果与同学一样的土样进行实验，如果结果与 A 同学一致， 则证明 同学一致， 则证明 A 同学操作无误；如果结果不同，则证明同学操作无误；如果结果不同，则证明 A 同学存在操作失误或培养基的配制有问 题。 同学存在操作失误或培养基的配制有问 题。 方案二：将方案二：将 A 同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证 明培养基是否受到污染。 同学配制的培养基在不加
11、土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证 明培养基是否受到污染。 总结升华总结升华 1微生物的筛选微生物的筛选 (1)选择培养微生物的两种方法选择培养微生物的两种方法 可利用该分离对象对某种营养物质有“嗜好”的原理，专门在培养基中加入该营养 物质，并且使该营养物质成为培养基中某类基本营养物质的唯一供给者。如筛选能分解尿 素的细菌，就可将尿素作为培养基中的唯一氮源。 可利用该分离对象对某种营养物质有“嗜好”的原理，专门在培养基中加入该营养 物质，并且使该营养物质成为培养基中某类基本营养物质的唯一供给者。如筛选能分解尿 素的细菌，就可将尿素作为培养基中的唯一氮源。 可利用该分离对象对某种抑菌物质的
12、抗性，在混合培养物中加入该抑菌物质，经培 养后，其他微生物生长受到抑制，而该分离对象却可乘机大量增殖，在数量上占据优势。 可利用该分离对象对某种抑菌物质的抗性，在混合培养物中加入该抑菌物质，经培 养后，其他微生物生长受到抑制，而该分离对象却可乘机大量增殖，在数量上占据优势。 (2)常见的选择培养基常见的选择培养基 将培养基放在高温环境中培养，分离耐高温的微生物。将培养基放在高温环境中培养，分离耐高温的微生物。 以石油为唯一碳源的培养基，可以分离能消除石油污染的微生物。以石油为唯一碳源的培养基，可以分离能消除石油污染的微生物。 不含有机碳源的培养基可以分离自养型微生物。不含有机碳源的培养基可以分
13、离自养型微生物。 无氮源培养基可以分离固氮微生物。无氮源培养基可以分离固氮微生物。 加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌。加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌。 加入高浓度的食盐可得到金黄色葡萄球菌。加入高浓度的食盐可得到金黄色葡萄球菌。 2统计菌落数目的方法统计菌落数目的方法 微生物生长量的测定有计数法、重量法、生理指标法等方法，但是一般使用计数法，微生物生长量的测定有计数法、重量法、生理指标法等方法，但是一般使用计数法， 计数法可分为直接计数法和间接计数法。二者的比较如表所示：计数法可分为直接计数法和间接计数法。二者的比较如表所示： 项目项目直接计数法直接计数法间接计数法间接计数法 原理原理 利用
14、特定血细胞计数板，在显微镜下 计算一定容积的样品中微生物的数量 利用特定血细胞计数板，在显微镜下 计算一定容积的样品中微生物的数量 当样品的稀释度足够高时，培养基表 面生长的一个菌落，来源于样品稀释 液中的一个活菌。通过统计平板上的 菌落数，就能推测出样品中大约含有 多少活菌 当样品的稀释度足够高时，培养基表 面生长的一个菌落，来源于样品稀释 液中的一个活菌。通过统计平板上的 菌落数，就能推测出样品中大约含有 多少活菌 主要用具主要用具显微镜、血细胞计数板显微镜、血细胞计数板培养基培养基 计数依据计数依据菌体本身菌体本身培养基上菌落数培养基上菌落数 优点优点计数方便、操作简单计数方便、操作简单
15、计数的是活菌计数的是活菌 缺点缺点死菌、活菌都计算在内死菌、活菌都计算在内操作较复杂，有一定误差操作较复杂，有一定误差 计算公式计算公式 每毫升原液含菌数每毫升原液含菌数400104每小 格平均菌体数稀释倍数 每小 格平均菌体数稀释倍数 每毫升原液含菌数培养基上平均菌 落数 每毫升原液含菌数培养基上平均菌 落数涂布液体积稀释倍数涂布液体积稀释倍数 注： 注：400、104是常数。是常数。 3实验设计原则实验设计原则 (1)单一变量原则。 对照实验中除测试因素单一变量原则。 对照实验中除测试因素(自变量自变量)不同外， 其他因素要保证和实验组相 同。 不同外， 其他因素要保证和实验组相 同。 (
16、2)平行重复原则。任一稀释度至少涂布平行重复原则。任一稀释度至少涂布 3 个平板，以增强实验结果的可信度与准确性。个平板，以增强实验结果的可信度与准确性。 (3)对照原则。对照原则。 判断培养基是否有杂菌污染，需要将未接种的相同培养基在相同条件下同时进行培 养。 判断培养基是否有杂菌污染，需要将未接种的相同培养基在相同条件下同时进行培 养。 判断培养基是否起到了筛选的作用，需要同时设立牛肉膏蛋白胨培养基进行同样接 种后培养，观察两种培养基上的菌落数目是否有显著差异。 判断培养基是否起到了筛选的作用，需要同时设立牛肉膏蛋白胨培养基进行同样接 种后培养，观察两种培养基上的菌落数目是否有显著差异。
17、对点演练对点演练 1下列关于统计菌落数目方法的叙述，错误的是下列关于统计菌落数目方法的叙述，错误的是( ) A当样品的稀释度足够高时，一个活菌会形成一个菌落当样品的稀释度足够高时，一个活菌会形成一个菌落 B为了保证结果准确，一般采用菌落密度较大的平板进行计数为了保证结果准确，一般采用菌落密度较大的平板进行计数 C采用稀释涂布平板法计数获得的菌落数往往少于实际的活菌数采用稀释涂布平板法计数获得的菌落数往往少于实际的活菌数 D在某一浓度下涂布三个平板，若三个平板统计的菌落数差别不大，则应以它们的平 均值作为统计结果 在某一浓度下涂布三个平板，若三个平板统计的菌落数差别不大，则应以它们的平 均值作为
18、统计结果 解析 ： 选解析 ： 选 B 当样品的稀释度足够高时，一个活菌会形成一个菌落 ； 为了保证结果准确， 一般选取菌落数在 当样品的稀释度足够高时，一个活菌会形成一个菌落 ； 为了保证结果准确， 一般选取菌落数在 30300 之间的平板进行计数；采用稀释涂布平板法计数获得的菌落有 可能是由多个细菌形成的，所以往往少于实际的活菌数；在某一浓度下涂布三个平板，若 之间的平板进行计数；采用稀释涂布平板法计数获得的菌落有 可能是由多个细菌形成的，所以往往少于实际的活菌数；在某一浓度下涂布三个平板，若 三个平板统计的菌落数差别不大，则应以它们的平均值作为统计结果以减小实验误差。三个平板统计的菌落数
19、差别不大，则应以它们的平均值作为统计结果以减小实验误差。 2(2017全国卷全国卷)某些土壤细菌可将尿素分解成某些土壤细菌可将尿素分解成 CO2和和 NH3，供植物吸收和利用。回 答下列问题： ，供植物吸收和利用。回 答下列问题： (1)有些细菌能分解尿素，有些细菌则不能，原因是前者能产生有些细菌能分解尿素，有些细菌则不能，原因是前者能产生_。能分解尿 素的细菌不能以尿素的分解产物 。能分解尿 素的细菌不能以尿素的分解产物 CO2作为碳源，原因是作为碳源，原因是_。但可用葡萄 糖作为碳源， 进入细菌体内的葡萄糖的主要作用是 。但可用葡萄 糖作为碳源， 进入细菌体内的葡萄糖的主要作用是_(答出两
20、点即可答出两点即可)。 (2)为了筛选可分解尿素的细菌， 在配制培养基时， 应选择为了筛选可分解尿素的细菌， 在配制培养基时， 应选择_(填 “尿素”填 “尿素” “NH4NO3” 或 “尿 素 或 “尿 素 NH4NO3”)作 为 氮 源 ， 不 选 择 其 他 两 组 的 原 因 是作 为 氮 源 ， 不 选 择 其 他 两 组 的 原 因 是 _。 (3)用 来 筛 选 分 解 尿 素 细 菌 的 培 养 基 含 有用 来 筛 选 分 解 尿 素 细 菌 的 培 养 基 含 有 KH2PO4和和 Na2HPO4， 其 作 用 有， 其 作 用 有 _(答出两点即可答出两点即可)。 解析：
21、解析：(1)土壤中的某些细菌之所以能够分解尿素，是因为它们能产生脲酶。尿素分解 菌是异养生物，不能利用 土壤中的某些细菌之所以能够分解尿素，是因为它们能产生脲酶。尿素分解 菌是异养生物，不能利用 CO2来合成有机物，必须利用现成的有机物来合成有机物，必须利用现成的有机物(如葡萄糖如葡萄糖)作为碳源； 葡萄糖通过呼吸作用被分解时，能为细胞生命活动提供能量，同时，葡萄糖还可以转化成 脂肪、 某些氨基酸等物质， 所以进入细菌体内的葡萄糖能为其他有机物的合成提供原料。 作为碳源； 葡萄糖通过呼吸作用被分解时，能为细胞生命活动提供能量，同时，葡萄糖还可以转化成 脂肪、 某些氨基酸等物质， 所以进入细菌体
22、内的葡萄糖能为其他有机物的合成提供原料。 (2) 选择培养基只是允许特定种类的微生物选择培养基只是允许特定种类的微生物(目的微生物目的微生物)生长， 同时抑制或阻止其他种类微生物 生长的培养基。本实验的目的菌是可分解尿素的细菌，因此配制的培养基应只允许尿素分 解菌生长， 生长， 同时抑制或阻止其他种类微生物 生长的培养基。本实验的目的菌是可分解尿素的细菌，因此配制的培养基应只允许尿素分 解菌生长，NH4NO3可以作为所有细菌的氮源，培养基中如含有可以作为所有细菌的氮源，培养基中如含有 NH4NO3，将不能起到筛选 作用。 ，将不能起到筛选 作用。(3)KH2PO4和和 Na2HPO4能为细菌生
23、长提供钾盐、钠盐和磷酸盐，而能为细菌生长提供钾盐、钠盐和磷酸盐，而 H2PO4 /HPO42 可作为缓冲剂，使培养基中可作为缓冲剂，使培养基中 pH 保持相对稳定。保持相对稳定。 答案：答案：(1)脲酶 分解尿素的细菌是异养生物，不能利用脲酶 分解尿素的细菌是异养生物，不能利用 CO2来合成有机物 为细胞生 命活动提供能量，为其他有机物的合成提供原料 来合成有机物 为细胞生 命活动提供能量，为其他有机物的合成提供原料 (2)尿素 其他两组都含有尿素 其他两组都含有 NH4NO3，能 分解尿素的细菌和不能分解尿素的细菌都能利用 ，能 分解尿素的细菌和不能分解尿素的细菌都能利用 NH4NO3，不能
24、起到筛选作用 ，不能起到筛选作用 (3)为细菌 生长提供无机营养，作为缓冲剂保持细胞生长过程中 为细菌 生长提供无机营养，作为缓冲剂保持细胞生长过程中 pH 稳定稳定 探究点二探究点二实验设计与操作实验设计与操作 共研探究共研探究 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数操作流程分析土壤中分解尿素的细菌的分离与计数操作流程分析(填图填图) 下面是土壤中分解尿素的细菌的分离与计数的实验流程示意图，请结合教材提供的资 料分析： 下面是土壤中分解尿素的细菌的分离与计数的实验流程示意图，请结合教材提供的资 料分析： 总结升华总结升华 1选择培养基与鉴别培养基选择培养基与鉴别培养基 项目项目选择培养基选择培养基
25、鉴别培养基鉴别培养基 特殊 成分 特殊 成分 加入某种化学物质加入某种化学物质加入某种指示剂或化学药品加入某种指示剂或化学药品 目的目的 抑制其他微生物生长，促进目的微生物 生长 抑制其他微生物生长，促进目的微生物 生长 与微生物的代谢产物或培养基中的成分 发生特定反应 与微生物的代谢产物或培养基中的成分 发生特定反应 用途用途培养、分离出特定微生物培养、分离出特定微生物鉴别不同的微生物鉴别不同的微生物 举例举例培养酵母菌和霉菌，可在培养基中加入培养酵母菌和霉菌，可在培养基中加入可用伊红美蓝培养基鉴定饮用水或乳制可用伊红美蓝培养基鉴定饮用水或乳制 青霉素，抑制细菌生长；用以尿素作唯 一氮源的培
26、养基来培养尿素分解菌 青霉素，抑制细菌生长；用以尿素作唯 一氮源的培养基来培养尿素分解菌 品中是否有大肠杆菌品中是否有大肠杆菌(若有，菌落呈黑色若有，菌落呈黑色) 2.结果分析与评价结果分析与评价 内容内容结论分析结论分析 是否有杂菌污染是否有杂菌污染 空白对照组培养基上无菌落生长未被杂菌污染；空白对照组培养 基上有菌落生长被杂菌污染；实验组选择培养基上菌落形态多样， 菌落数偏高培养基上可能混入其他氮源 空白对照组培养基上无菌落生长未被杂菌污染；空白对照组培养 基上有菌落生长被杂菌污染；实验组选择培养基上菌落形态多样， 菌落数偏高培养基上可能混入其他氮源 选择培养基是否 具有筛选作用 选择培养
27、基是否 具有筛选作用 牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数目明显多于选择培养基上的菌落数目 选择培养基具有筛选作用 牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数目明显多于选择培养基上的菌落数目 选择培养基具有筛选作用 样品的稀释操作样品的稀释操作如果得到了如果得到了 2 个或个或 2 个以上菌落数在个以上菌落数在 30300 的平板操作成功的平板操作成功 重复组的结果重复组的结果若选取的是同一种土样，统计的结果应该接近若选取的是同一种土样，统计的结果应该接近 对点演练对点演练 3用来判断选择培养基是否起到了选择作用，需要设置的对照是用来判断选择培养基是否起到了选择作用，需要设置的对照是( ) A未接种的选择培养基未接
28、种的选择培养基 B未接种的牛肉膏蛋白胨培养基未接种的牛肉膏蛋白胨培养基 C接种了的牛肉膏蛋白胨培养基接种了的牛肉膏蛋白胨培养基 D接种了的选择培养基接种了的选择培养基 解析：选解析：选 C 将菌液稀释相同的倍数并接种，牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数目应明 显多于选择培养基上的菌落数目，因此，应选择接种菌种的牛肉膏蛋白胨培养基作为对照。 对照实验遵循的原则是单一变量原则。 将菌液稀释相同的倍数并接种，牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数目应明 显多于选择培养基上的菌落数目，因此，应选择接种菌种的牛肉膏蛋白胨培养基作为对照。 对照实验遵循的原则是单一变量原则。 4如图为“土壤中分解尿素的细菌的分离和计数”实
29、验中样品稀释示意图。据图分析 正确的是 如图为“土壤中分解尿素的细菌的分离和计数”实验中样品稀释示意图。据图分析 正确的是( ) A3 号试管中的菌落稀释倍数为号试管中的菌落稀释倍数为 103倍倍 B4 号试管中稀释液进行平板培养得到的菌落平均数可能是号试管中稀释液进行平板培养得到的菌落平均数可能是 5 号的号的 10 倍倍 C5 号试管的结果表明每克土壤中的菌株数为号试管的结果表明每克土壤中的菌株数为 1.7109个个 D该实验方法统计得到的结果往往会比实际活菌数目要高该实验方法统计得到的结果往往会比实际活菌数目要高 解析：选解析：选 B 3 号试管稀释倍数是号试管稀释倍数是 104倍；倍；
30、4 号试管中稀释液进行平板培养，稀释倍数 比 号试管中稀释液进行平板培养，稀释倍数 比 5 号的低号的低 10 倍，如果稀释倍数适当，得到的菌落平均数可能是倍，如果稀释倍数适当，得到的菌落平均数可能是 5 号的号的 10 倍；倍；5 号试管进 行稀释涂布平板法计数的结果表明每克土壤中的菌株数为 号试管进 行稀释涂布平板法计数的结果表明每克土壤中的菌株数为(168175167)31061010 1.7108(个个)；稀释涂布平板得到的菌落可能存在两个或多个细胞长成一个菌落的情况，；稀释涂布平板得到的菌落可能存在两个或多个细胞长成一个菌落的情况， 故该实验方法统计得到的结果往往会比实际活菌数目要低
31、。故该实验方法统计得到的结果往往会比实际活菌数目要低。 1(2018大同月考大同月考)分离土壤中分解尿素的细菌，对培养基的要求是分离土壤中分解尿素的细菌，对培养基的要求是( ) 选项选项尿素尿素琼脂琼脂葡萄糖葡萄糖硝酸盐硝酸盐 A B C D 注：“”表示加入，“”表示不加。注：“”表示加入，“”表示不加。 解析：选解析：选 C 分离土壤中分解尿素的细菌，培养基中要有碳源，且以尿素作为唯一的 氮源，故不能添加硝酸盐。 分离土壤中分解尿素的细菌，培养基中要有碳源，且以尿素作为唯一的 氮源，故不能添加硝酸盐。 2关于土壤中细菌的分离，下列正确的操作步骤是关于土壤中细菌的分离，下列正确的操作步骤是(
32、 ) 土壤取样 称取土壤取样 称取 10 g 土壤，加入盛有土壤，加入盛有 90 mL 无菌水的锥形瓶中 吸取无菌水的锥形瓶中 吸取 0.1 mL 进行平板涂布 依次稀释至进行平板涂布 依次稀释至 101、102、103、104、105、106、107倍倍 A B C D 解析：选解析：选 C 在分离土壤中某种细菌时，应先选取土样 在分离土壤中某种细菌时，应先选取土样(10 g)，然后加无菌水获得土壤 浸出液，并进行不同倍数稀释，最后将稀释液涂布到培养基表面进行培养，并分离和计数。 ，然后加无菌水获得土壤 浸出液，并进行不同倍数稀释，最后将稀释液涂布到培养基表面进行培养，并分离和计数。 3下列
33、是关于检测土壤中细菌总数实验操作的叙述，其中错误的是下列是关于检测土壤中细菌总数实验操作的叙述，其中错误的是( ) A用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板 B取取 104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各倍的土壤稀释液和无菌水各 0.1 mL，分别涂布于各组平板上，分别涂布于各组平板上 C将实验组和对照组平板倒置，将实验组和对照组平板倒置，37 恒温培养恒温培养 2448 h D确定对照组无菌后，选择菌落数在确定对照组无菌后，选择菌落数在 300 以上的实验组平板进行计数以上的实验组平板进行计数 解析：选解析：选
34、 D 对土壤微生物计数，使用的培养基应该是标准培养基，并要经过高压蒸 汽灭菌处理；涂布时要对样本的水溶液进行稀释，一般选取 对土壤微生物计数，使用的培养基应该是标准培养基，并要经过高压蒸 汽灭菌处理；涂布时要对样本的水溶液进行稀释，一般选取 104、105、106倍的土壤稀释液 各取 倍的土壤稀释液 各取 0.1 mL 进行涂布，为了检查平板培养基是否制备合格，要同时把一培养基接种等量无 菌水，以作空白对照；培养一段时间后，如果某一稀释倍数的平板上菌落个数在 进行涂布，为了检查平板培养基是否制备合格，要同时把一培养基接种等量无 菌水，以作空白对照；培养一段时间后，如果某一稀释倍数的平板上菌落个
35、数在 30300 之间，即可把该组所有平板的菌落计数，然后取其平均值，计算出土壤细菌的总数。之间，即可把该组所有平板的菌落计数，然后取其平均值，计算出土壤细菌的总数。 4下表为培养某种微生物的培养基配方，请回答有关问题：下表为培养某种微生物的培养基配方，请回答有关问题： KH2PO4Na2HPO4MgSO47H2O葡萄糖葡萄糖尿素尿素蒸馏水蒸馏水 1.4 g2.1 g0.2 g10.0 g1.0 g定容至定容至 1 000 mL (1)该培养基只允许分解尿素的细菌生长，这种培养基称为该培养基只允许分解尿素的细菌生长，这种培养基称为_培养基。培养基。 (2)若要通过统计培养基中菌落数来估计样品中
36、的细菌数，上述培养基中还需要添加的 成分是 若要通过统计培养基中菌落数来估计样品中的细菌数，上述培养基中还需要添加的 成分是_，接种时应采用，接种时应采用_法，利用该方法接种培养得到的菌落，不可 能是图中的 法，利用该方法接种培养得到的菌落，不可 能是图中的_。 (3)在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板培养基先行培养了一段时间，这样做的目 的是 在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板培养基先行培养了一段时间，这样做的目 的是_。然后，将。然后，将 1 mL 土壤溶液分别稀释土壤溶液分别稀释 10 倍和倍和 100 倍， 各在 倍， 各在 3 个平板上分别接入每种稀释度的稀释液个平板上分别接入每
37、种稀释度的稀释液 0.1 mL，经适当培养后，经适当培养后，6 个平板上的菌落 个数分别为 个平板上的菌落 个数分别为 59、57、58、2、7 和和 5，据此可得出每升土壤溶液中的活菌数为，据此可得出每升土壤溶液中的活菌数为_个。个。 (4)从土壤中分离出分解尿素的细菌后，要对其做进一步的鉴定，即在上述培养基中加 入 从土壤中分离出分解尿素的细菌后，要对其做进一步的鉴定，即在上述培养基中加 入_指示剂，培养该菌后，如果指示剂变指示剂，培养该菌后，如果指示剂变_，可初步鉴定该种细菌能够分解 尿素。 ，可初步鉴定该种细菌能够分解 尿素。 解析：解析：(1)该培养基以尿素为唯一氮源，只允许分解尿素
38、的细菌生长，故这种培养基称 为选择培养基。 该培养基以尿素为唯一氮源，只允许分解尿素的细菌生长，故这种培养基称 为选择培养基。(2)若要通过统计培养基中菌落数来估计样品中的细菌数，需用固体培养基， 故上述培养基中还需要添加的成分是琼脂，接种时应采用稀释涂布平板法，利用该法接种 培养得到的菌落，不可能是图中的 若要通过统计培养基中菌落数来估计样品中的细菌数，需用固体培养基， 故上述培养基中还需要添加的成分是琼脂，接种时应采用稀释涂布平板法，利用该法接种 培养得到的菌落，不可能是图中的 D，因图，因图 D 利用的是平板划线法。利用的是平板划线法。(3)在接种前，随机取 若干灭菌后的空白平板培养基先
39、行培养一段时间，观察培养基上有无菌落形成，目的是检 测培养基灭菌是否合格。统计时应选取菌落个数在 在接种前，随机取 若干灭菌后的空白平板培养基先行培养一段时间，观察培养基上有无菌落形成，目的是检 测培养基灭菌是否合格。统计时应选取菌落个数在 30300 的平板，故每升土壤溶液中的 活菌数为 的平板，故每升土壤溶液中的 活菌数为(595758)3100.11 0005.8106(个个)。(4)由于细菌分解尿素的过程中产 生了氨，氨能使培养基的 由于细菌分解尿素的过程中产 生了氨，氨能使培养基的 pH 升高，故从土壤中分离出分解尿素的细菌后，要对其做进一步 的鉴定，即在培养基中加入酚红指示剂，培养
40、该菌后，如果指示剂变红，可初步鉴定该种 细菌能够分解尿素。 升高，故从土壤中分离出分解尿素的细菌后，要对其做进一步 的鉴定，即在培养基中加入酚红指示剂，培养该菌后，如果指示剂变红，可初步鉴定该种 细菌能够分解尿素。 答案：答案：(1)选择 选择 (2)琼脂 稀释涂布平板 琼脂 稀释涂布平板 D (3)检测培养基灭菌是否合格 检测培养基灭菌是否合格 5.8106 (4)酚红 红酚红 红 【基础题组】【基础题组】 1产生标准形态菌落的细菌的最初数目和培养基分别是产生标准形态菌落的细菌的最初数目和培养基分别是( ) A一个细菌、液体培养基一个细菌、液体培养基 B许多细菌、液体培养基许多细菌、液体培养
41、基 C一个细菌、固体培养基一个细菌、固体培养基 D许多细菌、固体培养基许多细菌、固体培养基 解析：选解析：选 C 在液体培养基中生活的细菌，无论是一个还是许多，肉眼都看不见。当 固体培养基上有许多细菌并且集中在较小范围内时，肉眼可见。而菌落是一个细菌或几个 细菌的子细胞群体，形成于固体培养基上，有一定的形态结构，所以肉眼可见。同种细菌 形成的菌落，形态结构是相同的。许多细菌形成的菌落，不可能有比较标准的形态，因为 许多细菌不可能是同一种细菌，也不可能在培养基的同一个点上。 在液体培养基中生活的细菌，无论是一个还是许多，肉眼都看不见。当 固体培养基上有许多细菌并且集中在较小范围内时，肉眼可见。而
42、菌落是一个细菌或几个 细菌的子细胞群体，形成于固体培养基上，有一定的形态结构，所以肉眼可见。同种细菌 形成的菌落，形态结构是相同的。许多细菌形成的菌落，不可能有比较标准的形态，因为 许多细菌不可能是同一种细菌，也不可能在培养基的同一个点上。 2下列属于菌落特征的是下列属于菌落特征的是( ) 菌落的形状 菌落的大小 菌落的多少 隆起程度 颜色 有无荚膜菌落的形状 菌落的大小 菌落的多少 隆起程度 颜色 有无荚膜 A B C D 解析：选解析：选 B 不同种类的细菌所形成的菌落大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明 度等具有一定特征，所以每种细菌在一定条件下所形成的菌落，可以作为菌种鉴定的重要 依据
43、。单个细菌用肉眼是看不见的，故细菌的个体特征 不同种类的细菌所形成的菌落大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明 度等具有一定特征，所以每种细菌在一定条件下所形成的菌落，可以作为菌种鉴定的重要 依据。单个细菌用肉眼是看不见的，故细菌的个体特征有无荚膜不能作为菌种鉴定的 依据。 有无荚膜不能作为菌种鉴定的 依据。 3测定土壤中细菌数量一般选用测定土壤中细菌数量一般选用 104、105和和 106倍的稀释液进行平板培养，而测定真 菌的数量一般选用 倍的稀释液进行平板培养，而测定真 菌的数量一般选用 102、103和和 104倍稀释液，其原因是倍稀释液，其原因是( ) A细菌个体小，真菌个体大细菌个体小
44、，真菌个体大 B细菌易稀释，真菌不易稀释细菌易稀释，真菌不易稀释 C细菌在土壤中数量比真菌多细菌在土壤中数量比真菌多 D随机的，没有原因随机的，没有原因 解析：选解析：选 C 土壤中的微生物大约 土壤中的微生物大约 70%90%是细菌，真菌的数量要比细菌少。样品 的稀释度越高，在平板上生长的菌落数目就越少。在实际操作中，通常选用一定稀释范围 的样品液进行培养，以保证获得菌落数在 是细菌，真菌的数量要比细菌少。样品 的稀释度越高，在平板上生长的菌落数目就越少。在实际操作中，通常选用一定稀释范围 的样品液进行培养，以保证获得菌落数在 30300 之间，适于平板计数，所以细菌的稀释 倍数要高于真菌的
45、稀释倍数。 之间，适于平板计数，所以细菌的稀释 倍数要高于真菌的稀释倍数。 4想要对土壤中分解尿素的细菌进行分离与计数，下列操作需要在酒精灯火焰旁进行 的有 想要对土壤中分解尿素的细菌进行分离与计数，下列操作需要在酒精灯火焰旁进行 的有( ) 土壤取样 称取土壤 稀释土壤溶液 涂布平板 微生物的培养土壤取样 称取土壤 稀释土壤溶液 涂布平板 微生物的培养 A B C D 解析：选解析：选 D 对土壤中分解尿素的细菌进行分离与计数时，称取土壤、稀释土壤溶液 和涂布平板都在火焰旁进行；土壤取样在野外进行；微生物的培养在恒温箱中进行。 对土壤中分解尿素的细菌进行分离与计数时，称取土壤、稀释土壤溶液
46、和涂布平板都在火焰旁进行；土壤取样在野外进行；微生物的培养在恒温箱中进行。 5在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂的目的是在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂的目的是( ) A对分离的菌种作进一步的鉴定对分离的菌种作进一步的鉴定 B筛选出能分解尿素的细菌筛选出能分解尿素的细菌 C培养基中还缺乏酚红指示剂作细菌的营养物质培养基中还缺乏酚红指示剂作细菌的营养物质 D如指示剂变蓝就能准确地认定该菌能分解尿素如指示剂变蓝就能准确地认定该菌能分解尿素 解析：选解析：选 A 加入酚红指示剂的目的是对分离的菌种作进一步的鉴定；用以尿素为唯 一氮源的培养基筛选出能分解尿素的细菌不是加入酚红指示剂的
47、目的；酚红指示剂不能作 为细菌的营养物质；如指示剂变红就能准确地认定该菌能分解尿素。 加入酚红指示剂的目的是对分离的菌种作进一步的鉴定；用以尿素为唯 一氮源的培养基筛选出能分解尿素的细菌不是加入酚红指示剂的目的；酚红指示剂不能作 为细菌的营养物质；如指示剂变红就能准确地认定该菌能分解尿素。 6用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为 106的培养基 中，得到以下几种统计结果，正确的是 的培养基 中，得到以下几种统计结果，正确的是( ) A涂布了一个平板，统计的菌落数是涂布了一个平板，统计的菌落数是 230 B涂布了两个平板，统计的菌落数是涂布了两个平板，统计的菌落数是 215 和和 260，取平均值，取平均值 238 C涂布了三个平板，统计的菌落数分别是涂布了三个平板，统计的菌落数分别是 21、212 和和 256，取平均值，取平均值 163 D涂布了三个平板