2019_2020学年高中生物专题2课题1微生物的实验室培养教学案含解析新人教版选修.pdf

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1、微生物的实验室培养微生物的实验室培养 一、培养基 1概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的营养基质。 2种类：(按物理性质分) 3营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐，此外还要满足微生物生 长对 pH、特殊营养物质以及氧气的要求。 二、无菌技术 1获取纯净培养物的方法 获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，具体操作如下： (1)对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。 (2)将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。 (3)为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。 (4)实验操作时应避免已经灭菌处理的

2、材料用具与周围的物品相接触。 2消毒和灭菌 (1)概念：填表 比较项目理化因素的作用强度消灭微生物的数量 芽孢和孢子 能否被消灭 消毒较为温和物体表面或内部的部分微生物不能 灭菌强烈物体内外所有的微生物能 (2)常用方法：连线 1.培养基中需含有碳源、氮源、水和无机盐等营养物质。 2消毒的目的是杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物，灭菌则是 杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。 3实验室常用煮沸消毒法、巴氏消毒法和使用紫外线或化学药剂进行消毒， 常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌等。 4固体培养基的配制过程为：计算称量溶化灭菌倒平板。 5微生物接种最常用的方法是平板划

3、线法和稀释涂布平板法。 6长期保存菌种可以采用甘油管藏法。 三、大肠杆菌的纯化培养 1制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 (1)操作步骤： 计算称量溶化灭菌倒平板 (2)倒平板的方法及注意事项： 请用文字和箭头写出正确的倒平板操作流程：丙乙甲丁。 甲、乙、丙中的灭菌方法是灼烧灭菌。 丁中的操作需要等待平板冷却凝固才能进行。 2纯化大肠杆菌 (1)纯化原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落，这个菌 落就是一个纯化的细菌菌落。 (2)接种方法： 平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步 稀释分散到培养基的表面。 稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯

4、度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布 到琼脂固体培养基的表面，进行培养。 (3)培养 ： 将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37_恒温箱中， 培养12 h和24 h 后，分别观察、记录。 四、菌种的保存连线 1不同培养基的具体配方不同，但一般都含( ) A碳源、磷酸盐和维生素 B氮源和维生素 C水、碳源、氮源和无机盐 D碳元素、氧元素、氢元素、氮元素 解析：选 C 培养基中一般都含有水、碳源、氮源和无机盐，此外还应考虑 pH、特殊营 养物质及 O2等条件。 2获得纯净培养物的关键是( ) A将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌 B接种纯种细菌 C.适宜环境条件下培养 D

5、防止外来杂菌的入侵 解析：选 D 获得纯净培养物的关键是防止外来微生物的污染。 3下列关于消毒和灭菌方法的选择，对应错误的是( ) A培养基高压蒸汽灭菌 B牛奶煮沸消毒 C接种环灼烧灭菌 D实验者双手化学消毒 解析：选 B 对牛奶应采用巴氏消毒法进行消毒。 4下列叙述错误的是( ) A右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞，为避免污染需放在酒精灯火焰附近 B倒平板整个过程应在酒精灯火焰旁进行 C打开培养皿的皿盖，右手将锥形瓶中的培养基倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿 盖 D为避免水滴滴入培养基，平板应倒过来放置 解析：选 C C 项应是用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，而不

6、是 完全打开，以防杂菌污染。 5下列有关稀释涂布平板法的叙述，错误的是( ) A首先将菌悬液进行一系列的梯度稀释 B然后将不同稀释度的菌悬液分别涂布到琼脂固体培养基的表面 C在适宜条件下培养 D结果都可在培养基表面形成单个的菌落 解析：选 D 稀释涂布平板法是将菌悬液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌 悬液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，在适宜条件下培养。只有在稀释度足够高的菌悬液 里，聚集在一起的微生物才能被分散成单个细胞，从而在培养基表面形成单个的菌落。 Error!核心要点一培养基及无菌技术 1培养基配制的原则 (1)目的要明确：不同的微生物需求不同，根据培养目的进行配制。 (2

7、)营养要协调：营养物质的浓度和比例要适宜。营养物质浓度过低不能满足微生物营养 需要，过高对微生物的生长有抑制作用。 (3)pH 要适宜：各种微生物适宜生长的 pH 范围不同，如细菌的适宜 pH 约为 6.57.5、 放线菌的适宜 pH 约为 7.58.5、真菌的适宜 pH 约为 5.06.0。为维持 pH 的相对恒定，可 在培养基中加入缓冲剂，常用的缓冲剂是磷酸氢二钾磷酸二氢钾。 2培养基的成分 营养物质定义作用主要来源 碳源 凡能提供碳元素的物 质 构成生物体细胞的物质 和一些代谢产物，有些也 是异养生物的能源物质 无机碳源 ： CO2、 NaHCO3 等；有机碳源：糖类、 脂肪酸、花生粉饼

8、、 石油等 氮源 凡能提供氮元素的物 质 合成蛋白质、核酸以及含 氮的代谢产物 无机氮源：N2、NH3、 铵盐、硝酸盐等；有 机氮源：尿素、牛肉 膏、蛋白胨等 生长因子 生长必不可少的微量 有机物 是酶和核酸的组成成分 维生素、氨基酸、碱 基等 水 不仅是优良的溶剂，而且 可维持生物大分子结构 的稳定 培养基、空气、代谢 产物 无机盐 为微生物提供除碳、 氮以外的各种重要元 素，包括大量元素和 微量元素 是细胞的组成成分、生理 调节物质、某些化能自养 菌的能源，酶的激活剂等 无机化合物 名师点拨 几种微生物的营养和能量来源 微生物碳源氮源能源 蓝藻CO2NH 、NO等 4 3 光能 硝化细菌C

9、O2NH3NH3的氧化 根瘤菌糖类等有机物N2有机物 大肠杆菌糖类、蛋白质等有机物蛋白质等有机物 3几种常用灭菌和消毒方法的比较 灭菌和消毒 种类 主要方法应用范围 灼烧灭菌酒精灯火焰灼烧 微生物接种工具，如接种环、接种 针或其他金属用具等， 接种过程中 的试管口或瓶口等 干热灭菌干热灭菌箱 160170 加热 12 h 玻璃器皿(如吸管、培养皿等)、金 属用具等凡不适宜用其他方法灭 菌而又能耐高温的物品 高压蒸汽灭 菌 100 kPa、121 维持 1530 min培养基及多种器材、物品 煮沸消毒法100 煮沸 56 min家庭餐具等生活用品的消毒 巴氏消毒法7075 煮 30 min 或

10、80 煮 15 min 牛奶、啤酒、果酒和酱油等不宜进 行高温灭菌的液体 紫外线消毒30 W 紫外灯照射 30 min接种室、接种箱、超净工作台 化学药物消 毒 用体积分数为 70%75%的酒精、碘酒涂 抹，来苏尔喷洒等 用于皮肤、伤口、动植物组织表面 消毒和空气、手术器械、塑料或玻 璃器皿等的消毒 题组冲关 1下列对灭菌和消毒的理解，错误的是( ) A灭菌是指杀灭环境中的一切微生物的细胞、芽孢和孢子 B消毒和灭菌实质上是完全相同的 C接种环用灼烧法灭菌 D常用灭菌方法有灼烧灭菌法、干热灭菌法、高压蒸汽灭菌法 解析：选 B 消毒是使用较为温和的物理或化学方法，仅杀死物体表面或内部一部分微生 物

11、，不包括芽孢和孢子。灭菌则是使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽 孢和孢子。 2下表是某微生物培养基的配方。请分析回答下列问题： 编号 成分(NH4)2SO4KH2PO4FeSO4CaCl2H2O 含量0.4 g4.0 g0.5 g0.5 g100 mL (1)从培养基的营养成分看，此培养基可用来培养的微生物其同化作用类型是 _。利用该培养基培养微生物时，微生物所需要的碳源来自_。 (2)此表中含有的微生物的营养成分包括_。 (3)若除去该培养基中的后再加入不含氮元素的有机物，则此培养基可培养的微生物种 类是_。 (4)培养基若加入氨基酸，则它可充当的营养成分是_。 (5)若要观

12、察微生物的菌落特点，培养基中还应添加的成分是_。 解析：(1)从培养基的成分看，该培养基无有机物，因此可以培养自养型微生物，微生物 所需的碳源只能由空气中的 CO2提供。(2)培养基中的成分包括微生物需要的氮源、无机盐和 H2O。(3)培养基中的是该培养基中唯一的氮源，去掉后则成为无氮培养基，可用于培养自生 固氮微生物， 因为自生固氮微生物可以利用大气中的 N2作为氮源。 (4)在培养基中加入氨基酸， 可以为微生物提供碳源、氮源和特殊营养。(5)微生物的菌落需要在固体培养基的表面生长， 因此培养基中需要添加凝固剂(琼脂)，使液体培养基凝固成固体培养基。 答案 ： (1)自养型 空气中的 CO2

13、 (2)H2O、 无机盐、 氮源 (3)自生固氮微生物 (4)碳源、 氮源和特殊营养 (5)凝固剂(琼脂) Error!核心要点二制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 1操作步骤 2倒平板操作的注意事项 (1)培养基要冷却到 50 左右时开始倒平板。温度过高会烫手，过低培养基又会凝固。 (2)要使锥形瓶的瓶口通过酒精灯火焰。通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 (3)倒平板时，要用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，不要完全打 开，以免杂菌污染培养基。 (4)平板冷凝后，要将平板倒置。因为平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，培养基表面的温 度也较高，平板倒置后，既可使培养基表面的水分更好地

14、挥发，又可防止皿盖上的水珠落入 培养基，造成污染。 (5)在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，那么这个平板 不能用来培养微生物，因为空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。 (6)整个操作过程要在酒精灯火焰旁进行，避免杂菌污染。 题组冲关 3下列关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述，错误的是( ) A操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌 B将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯 C加热溶化琼脂时应不断用玻璃棒搅拌 D待培养基冷却至 50 左右时倒平板 解析：选 A 制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板， 其顺序不能颠倒。牛肉膏容

15、易吸潮，所以称好后需将称量纸一同放入烧杯，当牛肉膏溶化并 与称量纸分离后，用玻璃棒取出称量纸。在溶化时，加入琼脂后应不断用玻璃棒搅拌，防止 琼脂糊底而导致烧杯破裂。待培养基冷却至 50 左右，并且培养基处于溶化状态时开始倒平 板。 4下列有关倒平板操作的叙述，错误的是( ) A将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上 B使打开的锥形瓶瓶口迅速通过火焰 C将培养皿打开，培养皿盖倒放在桌面上 D等待平板冷却凝固后需要倒过来放置 解析 ： 选 C 整个倒平板过程要防止外来杂菌的入侵， 因此灭过菌的培养皿应放在火焰旁， 打开的锥形瓶瓶口应迅速通过火焰，培养皿应打开一条稍大于瓶口的缝隙，而不能将培养皿 盖完全

16、打开，等待平板冷却凝固后需要倒过来放置。 Error!核心要点三纯化大肠杆菌 1平板划线法 (1)操作步骤 (2)注意事项 第一次划线及每次划线之前都需灼烧接种环灭菌，划线操作结束仍需灼烧接种环。 灼烧接种环之后，要等其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。 在做第二次以及其后的划线操作时，总是从上一次划线的末端开始划线，这样才能使 细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 划线时最后一区域不要与第一区域相连。 划线用力要大小适当，防止用力过大将培养基划破。 (3)平板划线操作中几次灼烧接种环的目的 项目第一次划线前灼烧每次划线前灼烧划线结束灼烧 目的 避

17、免接种环上可能存在的 微生物污染培养物 杀死上次划线结束后接种 环上残留的菌种，使下次 划线的菌种均来自上次划 线的末端 杀死接种环上残留的菌 种，避免细菌污染环境和 感染操作者 2稀释涂布平板法 (1)操作步骤 系列稀释操作： a将分别盛有 9 mL 水的 6 支试管灭菌，并按 101106的顺序编号。 b用移液管吸取 1 mL 培养的菌液，注入 101倍稀释的试管中。用手指轻压移液管上的橡 皮头，吹吸 3 次，使菌液与水充分混匀。 c从 101倍稀释的试管中吸取 1 mL 稀释液，注入 102倍稀释的试管中，重复 b 步的混匀 操作。依次类推，直到完成最后一支试管的稀释。 涂布平板操作：

18、(2)注意事项 每支试管及其中的 9 mL 水、移液管等均需灭菌；操作时，试管口和移液管应在离酒精 灯火焰 12 cm 处。 涂布器用体积分数为 70%的酒精消毒，取出时，让多余的酒精在烧杯中滴尽，然后将沾 有少量酒精的涂布器在酒精灯火焰上引燃。 不要将过热的涂布器放在盛放酒精的烧杯中，以免引燃其中的酒精。 酒精灯与培养皿距离要合适，移液管管头不要接触任何物体。 名师点拨 平板划线法和稀释涂布平板法的比较 (1)单细胞菌落的获得：利用平板划线法接种时，单细胞菌落从后划线的区域挑取；利用 稀释涂布平板法接种时，只有合适的稀释度才能得到单细胞菌落。 (2)两种接种方法的应用：两种方法都能将微生物分

19、散到固体培养基表面，以获得单细 胞菌落，达到分离纯化微生物的目的；稀释涂布平板法还能对微生物进行计数，而平板划线 法不能用于微生物的计数。 3实验结果分析与评价 (1)未接种的培养基表面若有菌落生长，说明培养基被污染；若无，则说明未被污染。 (2)在接种大肠杆菌的培养基上可观察到独立的菌落。有光滑型菌落，菌落边缘整齐，表 面有光泽，湿润、光滑、呈灰色；也有粗糙型菌落，菌落扁平，干涩、边缘不整齐；还有黏 液型菌落，为含荚膜菌的菌落。 (3)培养 12 h 和 24 h，菌落大小不同，培养 24 h，菌落大，灰色深，光泽度强。 (4)若在培养基中观察到不同形态的菌落，原因可能是菌液不纯、混入其他杂

20、菌或在实验 操作过程中被杂菌污染。 题组冲关 5下列关于平板划线操作的叙述，正确的是( ) A使用已灭菌的接种环、培养皿，在操作过程中不需要再灭菌 B打开含菌种的试管，需通过酒精灯火焰灭菌，取出菌种后需马上塞上棉塞 C将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线即可 D最后将平板倒置，放在培养箱中培养 解析：选 D 在平板划线时，已灭过菌的接种环在每次划线后，必须用灼烧灭菌法灭菌， 以杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种；盛有菌种的试管在打开或重新塞棉塞前，都需 将试管口通过酒精灯火焰灼烧灭菌；在平板内划三至五条平行线后应盖上皿盖，并灼烧接种 环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第

21、二区域划线，并按此操作继续往三、四、 五区域划线；接种完成后，需将平板倒置放入培养箱，以防培养皿皿盖上的水珠落入培养基， 造成污染。 6(全国卷)某同学用新鲜的泡菜滤液为实验材料分离纯化乳酸菌。分离纯化所用固体 培养基中因含有碳酸钙而不透明， 乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙。 回答下列问题 ： (1)分离纯化乳酸菌时，首先需要用_对泡菜滤液进行梯度稀释，进行梯度稀释的 理由是_ _。 (2)推测在分离纯化所用的培养基中加入碳酸钙的作用有_和 _。 分离纯化时应挑选出_的菌落作为候选菌。 (3)乳酸菌在20 长期保存时，菌液中常需要加入一定量的_(填“蒸馏 水”“甘油”或“碳酸钙”)。

22、解析：(1)分离纯化乳酸菌时，首先需要用无菌水对泡菜滤液进行梯度稀释，这样既可避 免杂菌污染，又可将乳酸菌分散成单个细胞，以便在培养基表面形成单个菌落。(2)乳酸的积 累影响乳酸菌的增殖，加入碳酸钙可以中和乳酸菌代谢(无氧呼吸)过程中产生的乳酸，另外， 乳酸和碳酸钙反应，进而导致碳酸钙分解形成透明圈，有利于乳酸菌的鉴别和分离。(3)对于 需要长期保存的菌种， 可以采用甘油管藏的方法。 在 3 mL 的甘油瓶中， 装入 1 mL 甘油后灭菌。 将 1 mL 培养的菌液转移到甘油瓶中，与甘油充分混匀后，放在20 的冷冻箱中保存。 答案：(1)无菌水 泡菜滤液中菌的浓度高，直接培养很难分离得到单菌落

23、 (2)鉴别乳 酸菌 中和产生的乳酸(或酸) 具有透明圈 (3)甘油 随堂基础巩固 1下列关于培养基的说法，正确的是( ) A任何培养基都必须含有碳源、氮源、矿质元素、水及生长因子 B培养基只有两类：液体培养基和固体培养基 C固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基 D配制培养基时要注意各种养分的浓度和比例 解析：选 D 不同微生物对营养物质的需求不同，如自养微生物的培养基不需要加碳源， 自生固氮菌的培养基不需要加氮源。按不同的分类标准，培养基可有不同的种类和作用，其 中固体培养基是在液体培养基里加入琼脂等凝固剂配制而成的。配制培养基时要注意各种养 分的浓度和比例。 2下列操作与消毒灭菌无关的

24、是( ) A接种前用酒精灯火焰灼烧接种环 B接种前用酒精擦拭双手 C将平板倒置，放入培养箱中培养 D接种在酒精灯的火焰旁完成 解析 ： 选 C 接种用具、器皿、空气中都存在大量微生物，必须严格地消毒灭菌。A、B、D 三项都是实验操作过程中消毒或灭菌的措施。将平板倒置，放入培养箱中培养与灭菌无关。 3采用干热灭菌、灼烧灭菌、高压蒸汽灭菌、紫外线照射等几种方法，可分别杀死哪些 部位的杂菌( ) A接种环、吸管、培养基、接种室 B吸管、接种环、培养基、接种箱 C培养基、吸管、接种环、接种箱 D培养皿、吸管、培养基、双手 解析 ： 选 B 干热灭菌是将灭菌物品放入干热灭菌箱内，在 160170 下加热

25、 12 h， 适 用于耐高温且需要保持干燥的物品，如玻璃器皿(吸管、培养皿)和金属用具等；灼烧灭菌是 利用酒精灯火焰的充分燃烧层灭菌，如接种针、接种环等；高压蒸汽灭菌用高压蒸汽灭菌锅， 一般在压力为 100 kPa，温度为 121 的条件下，维持 1530 min，主要用于培养基灭菌；紫 外线照射适用于物体表面灭菌和空气灭菌，如接种室、接种箱、超净工作台等，使用前用紫 外线照射约 30 min。 4不同的微生物对营养物质的需要各不相同。下列有关一种以 CO2为唯一碳源的自养微 生物营养的描述，错误的是( ) A氮源物质为该微生物提供必要的氮元素 B碳源物质也是该微生物的能源物质 C无机盐是该微

26、生物不可缺少的营养物质 D水是该微生物的营养要素之一 解析：选 B 由题干以 CO2为唯一碳源可知，该微生物可以利用 CO2合成有机物，CO2不能 为微生物提供能量，其能源来自光能或氧化无机物释放出的化学能。 5将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入 37 恒温箱的目的是( ) A对比观察培养基有没有被微生物利用 B对比分析培养基是否被杂菌污染 C没必要放入未接种的培养基 D为了下次接种时再使用 解析 ： 选 B 对未接种的培养基进行培养，起到对照作用，可确定培养基是否被杂菌污染。 6下列有关平板划线操作的描述，错误的是( ) A将接种环放在酒精灯火焰上灼烧，直到接种环烧红 B接种环在平板

27、上划线的位置是随机的 C在挑取菌种前和接种完毕后均要将试管口通过酒精灯火焰 D最后一区的划线不能与第一区相连 解析：选 B 接种环在平板上划线的位置并不是随机的：将沾有菌种的接种环伸入平板内， 划三至五条平行线后应盖上皿盖，并灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始 往第二区域内划线，重复以上操作，在三、四、五区域内划线。 7图甲、乙是微生物接种常用的两种方法，回答相关问题： (1)图甲是利用_法进行微生物接种，图乙是利用_法进行微生物 接种。这两种方法所用的接种工具分别是_和_；对这两种接种工具进行灭菌 和消毒的方法依次是_和酒精消毒。 (2)平板划线时，为保证微生物的数目随划线次数

28、的增加而逐步减少，每次划线都要从 _开始，平板划线结束后，最后一次划的线不能与第一次划的线 _。 (3)接种操作为什么一定要在火焰附近进行？ _。 (4)下图是接种后培养的效果图解，其接种方法是_(填“图甲”或“图乙”)。 (5)假设用图乙所示方法接种培养结束后，发现培养基上菌落连成一片，可能的原因是什 么？_ _。 解析：(1)图甲和图乙分别是平板划线法和稀释涂布平板法进行微生物接种，这两种方法 所用的接种工具分别是接种环和涂布器。(2)平板划线时，每次划线前都要从上一次划线的末 端开始，最后一次划线不能与第一次划线相连。(3)由于在酒精灯火焰附近存在着无菌区域， 因此接种常在火焰附近进行。

29、(4)培养基上的菌落分布均匀，接种方法为稀释涂布平板法。(5) 采用稀释涂布平板法进行菌种分离时，稀释度要足够高，否则会使微生物不能分散成单个细 胞。 答案：(1)平板划线 稀释涂布平板 接种环 涂布器 灼烧灭菌 (2)上一次划线的末 端 相连(或相接、相交、交叉等) (3)火焰附近存在着无菌区域 (4)图乙 (5)稀释倍数不够，菌液的浓度太高 课时跟踪检测 一、选择题 1下列关于微生物的营养，说法正确的是( ) A同一种物质不可能既作碳源又作氮源 B凡是碳源都能提供能量 C除水以外的无机物仅提供无机盐 D无机氮源也可能提供能量 解析：选 D 对一些微生物来说，含 C、H、O、N 的化合物既是

30、碳源，又是氮源。CO2是光 能自养细菌的碳源，但不能提供能量。CO2和 N2是无机物，也是微生物的碳源和氮源。硝化细 菌所利用的氮源是无机氮源氨，同时氨也为硝化细菌提供用以化能合成作用的能源。 2培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌或消毒方法 依次是( ) 化学消毒 灼烧灭菌 干热灭菌 紫外线消毒 高压蒸汽灭菌 巴氏消毒 A B C D 解析：选 A 培养基用高压蒸汽灭菌；培养皿耐高温，需用干热灭菌；接种环可用灼烧灭 菌达到迅速彻底地灭菌的效果 ； 实验操作者的双手可用化学药剂进行消毒， 如用酒精擦拭双手 ； 空气可用紫外线消毒；为不破坏牛奶中的营养成分，可采用巴氏

31、消毒。 3(江苏高考)做“微生物的分离与培养”实验时，下列叙述正确的是( ) A高压灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖 B倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上 C为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落 D用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上 解析：选 D 在高压灭菌的操作过程中，加热结束后应让灭菌锅内温度自然下降，待压力 表的压力降到零时，打开放气阀，旋松螺栓，打开盖子。倒平板时，用左手将培养皿打开一 条稍大于瓶口的缝隙，而不是完全取下放到一边。接种环经火焰灼烧灭菌后应在火焰旁冷却 后，再用其挑取菌落。在微生物的培养中，一般在皿底上用记

32、号笔做标记。 4下列有关平板划线法操作的叙述，错误的是( ) A第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物 B每次划线前，灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种 C在每一区域内划线时，接种环上的菌种直接来源于菌液 D划线结束后，灼烧接种环能及时杀死接种环上的菌种，避免细菌污染环境和感染操作 者 解析：选 C 在用平板划线法分离大肠杆菌的实验中，接种环取菌种前灼烧的目的是为了 避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；以后每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划 线后残留的菌种；划线结束后仍需灼烧接种环，是为了避免细菌污染环境和感染操作者；从 第二次划线开始，每次划线

33、时接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端。 5为了保持菌种的纯净需要进行菌种的保藏，下列有关叙述错误的是( ) A对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法 B临时保藏的菌种一般是接种到试管的斜面培养基上 C临时保藏菌种容易被污染或产生变异 D对于需要长期保存的菌种，可以采用低温4 保藏的方法 解析：选 D 对于需要长期保存的菌种，可采用甘油管藏法，即在 3 mL 甘油瓶中加入 1 mL 甘油后灭菌，将 1 mL 培养的菌液转移到甘油瓶中，与甘油充分混匀后，放在20 的冷 冻箱中保存。 6用平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时( ) 可以用相同的培养基 都需要使用接种针进行接种 都需要在酒

34、精灯火焰旁进行 接种 都可以用来计数活菌 A B C D 解析：选 C 平板划线法或稀释涂布平板法都使用固体培养基；平板划线法采用接种针或 接种环进行操作， 而稀释涂布平板法采用涂布器进行操作 ； 进行接种操作时， 要进行无菌操作， 需要在酒精灯火焰旁接种，避免空气中的微生物污染培养基；平板划线法一般用于分离菌体 而不能计数活菌。 7下表是对四种生物的能源、碳源、氮源、新陈代谢类型的描述，正确的是( ) 选项项目硝化细菌乳酸菌根瘤菌衣藻 A能源NH3乳酸N2光能 B碳源CO2糖类等糖类等CO2 C氮源NH3N2N2NO 3 D代谢类型自养需氧异养厌自养需自养需 型氧型氧型氧型 解析：选 B 从

35、能源来看，硝化细菌的能源是氧化氨气为硝酸盐过程释放的能量，乳酸菌 和根瘤菌需糖类等有机物供能；从氮源看，乳酸菌需要 NH 、NO ；从代谢类型看，根瘤菌为 4 3 异养需氧型；从碳源看，硝化细菌与衣藻需 CO2，乳酸菌和根瘤菌需要糖类等有机物。 8 下面是微生物平板划线示意图， 划线的顺序为 1、 2、 3、 4、 5。 下列叙述正确的是( ) A在五个区域中划线前后都要对接种环和培养基进行灭菌 B划线操作时完全打开皿盖，划完立即盖上 C接种时不能划破培养基，否则难以达到分离单菌落的目的 D第 1 区和第 5 区的划线最终要连接起来，以便比较前后的菌落数 解析：选 C 在每次划线前后都要对接种

36、环进行灭菌；进行划线操作时，左手将培养皿 的皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上 皿盖；注意接种时不能划破培养基，否则难以达到分离单菌落的目的；第 1 区和第 5 区的划 线不能相连。 9某研究小组从有机废水中分离微生物用于废水处理，下列叙述正确的是( ) A培养基分装到培养皿后进行灭菌 B转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线 C接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养 D培养过程中每隔一周观察一次 解析：选 B 在配制培养基的过程中要先灭菌后倒平板；转换划线角度后要对接种环进行 灼烧灭菌，杀灭接种环上残留的菌种，再进行划线；接种后的培养皿应放置在恒温培养

37、箱中 培养；微生物生长、繁殖较快，在培养过程中一般要隔天观察一次。 10科学家通过实验发现了细菌的快速进化过程。人们发现，用肉汤培养假单胞杆菌， 如果肉汤保持不动，不久后，在肉汤的不同部位，如表面、底部或其他部位，细菌的形态发 生了如图所示的变化，出现一定数量的变异株。下列有关说法错误的是( ) A这个实验说明了细菌在不同的小环境中发生了进化 B细菌的生命周期短，繁殖速度快，容易受到外界环境影响而发生变化 C用静置的肉汤培养 FS 细菌，其菌落形状将趋于一致 D用不断摇动的肉汤培养 SM 细菌，不会出现 FS 细菌和 WS 细菌 解析：选 C 分析题干信息可知，最初的 SM 细菌在静置的肉汤表

38、面繁殖，一段时间后， 有一部分在肉汤底部繁殖，这部分可能向厌氧方向进化，故细菌在不同的小环境下可发生进 化。细菌生命周期短，繁殖速度快，容易受外界环境因素(如温度、氧气)的影响。用静置的 肉汤培养 FS 细菌，该细菌也有可能向不同方向进化，如进化成 WS 细菌。不断摇动，肉汤中 的溶氧会抑制厌氧型的 FS 细菌；不断摇动，容器与肉汤无固定接触面，WS 细菌无法附着生长 繁殖。 二、非选择题 11(1)在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑_、_和渗 透压等条件。由于该细菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、_、_ 等优点，因此常作为遗传学研究的实验材料。 (2)在微生物培养操作过

39、程中， 为防止杂菌污染， 需对培养基和培养皿进行_(填 “消 毒”或“灭菌”)；操作者的双手需要进行清洗和_(填“消毒”或“灭菌”)；空气中 的 细 菌 可 用 紫 外 线 杀 灭 ， 其 原 因 是 紫 外 线 能 使 蛋 白 质 变 性 ， 还 能 _。 (3)若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除 应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的_。 (4)通常，对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的 _。 (5)培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检 测方法是_。 解析：(1)大肠杆菌具有

40、体积小、结构简单、变异类型容易选择、易培养、生活周期短等 优点，培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑温度、酸碱度和渗透压等条件。(2)对培养 基和培养皿应进行灭菌，操作者的双手需要进行清洗和消毒。紫外线能使蛋白质变性，还能 损伤 DNA 的结构。(3)稀释涂布平板法要先将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度 的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养，操作中应保证样品稀释的比例合适。(4) 对获得的纯菌种可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的鉴定。(5)检测培养 基是否被污染的方法是将未接种的培养基在适宜条件下进行培养，观察是否有菌落形成。 答案：(1)温度 酸碱度 易培

41、养 生活周期短 (2)灭菌 消毒 损伤 DNA 的结构 (3) 比例合适 (4)鉴定(或分类) (5)将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察 培养基上是否有菌落产生 12下面为牛肉膏蛋白胨培养基的成分列表，据此回答： 成分牛肉膏蛋白胨NaClH2O 含量0.5 g1 g0.5 g100 mL (1)蛋白胨在培养基中的作用是_。 (2)要用此材料配制观察细菌菌落状况的培养基，还需添加的成分是_。 (3)确定表中各成分含量依据的原则是_。 (4)培养基配制好后，分装前应进行的工作是_。 (5)从 配 制 培 养 基 直 到 培 养 完 成 ， 所 采 用 的 预 防 杂 菌 污 染 的

42、 方 法 有 _。 (6)在培养基凝固前要搁置斜面，其目的是 _。 解析：蛋白胨中含有大量的蛋白质降解而成的多肽类物质等，因而在培养基中提供碳源、 氮源和生长因子。细菌菌落是在固体培养基上形成的。确定各营养成分含量要依据所培养的 微生物的需要。培养基配制好后，首先要调整 pH，然后再分装，整个操作过程都要保证无杂 菌污染。 答案：(1)提供碳源、氮源、生长因子 (2)琼脂(凝固剂) (3)所培养微生物对各营养成 分的需要量 (4)调整 pH (5)对培养基进行高压蒸汽灭菌、灼烧接种环、酒精棉擦手、在火 焰旁接种、在火焰旁迅速用棉塞塞住试管口 (6)扩大接种面积 13在培养基上将细菌稀释或分散成

43、单个细胞，使其长成单个的菌落，这个菌落就是一 个纯化的细菌菌落。实验基本步骤如下： 配制培养基灭菌、倒平板培养观察 请回答下列有关问题： (1)配制培养基时，各成分含量确定的原则是_。不论何种培养 基，在各种成分都溶化后分装前，要进行的是_。 (2)倒平板的适宜温度是 50 左右，原因是_。待平板冷 凝 后 ， 要 将 平 板 倒 置 ， 这 样 既 可 使 培 养 基 表 面 的 水 分 更 好 地 挥 发 ， 又 可 防 止 _。 (3)纯化菌株时，若使用稀释涂布平板法进行接种，应选择的涂布工具是图中的_ ； 若使用平板划线法进行接种，应选择的接种工具是图中的_。 (4)划线的某个平板培养

44、后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，第二划线区 域所划的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误有 _。 (5)若用大肠杆菌进行实验， 使用过的培养基及培养物必须经过_处理后才能丢弃， 以防止培养物的扩散。 解析：培养基中各成分含量要根据微生物的生长需要来确定。微生物生长需要一定的 pH， 所以培养基装瓶前需要调节 pH。由图可知，A 为接种环，B 为涂布器，C 为胶头滴管，D 为接 种针，稀释涂布平板法应选择的涂布工具是 B，平板划线法应选择的接种工具是 A。第二划线 区域所划的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落，造成此现象的原因可能有两个：一是接 种环灼烧后未冷却，菌种接触到高温的接种环而死亡；二是划第二划线区域第一条线时未从 第一区域末端开始。有的大肠杆菌会释放一种强烈的毒素，因此，使用过的培养基及其培养 物必须经过灭菌处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。 答案：(1)所培养微