输血科自身免疫溶血性贫血患者血清学检查.docx

1、输血科自身免疫溶血性贫血患者血清学检查1、目的：规范实验室工作人员的操作程序，确保实验过程及结果的准确性与可靠性。2、范围：本规程适用于本实验室自身免疫溶血性贫血患者的试验检查操作。3、职责3.1工作人员对进行红细胞意外抗体筛查和鉴定试验技术操作应熟练掌握。4、AIHA患者血清学检查4.1 基本原理自身免疫性溶血性贫血(AIHA)是一种临床常见疾病，患者体内自身抗体导致红细胞寿命缩短，失代偿后即出现贫血症状。AIHA可以分为温抗体型、冷抗体型(CAS)混合型、阵发性冷性血红蛋白尿(PCH)以及药物诱导型(DIIHA)o自身抗体引起的配血不相合，是困扰医护人员和输血科实验室无法做出输血决策的疑难

2、问题之一。AIHA患者血清学上还有一个重要特征，就是合并存在意外抗体的比率要明显大于非AIHA患者。意外抗体的存在，使AIHA患者的输血风险进一步加大，自身抗体可能会掩盖意外抗体，导致意外抗体漏检而引起溶血性输血反应。本节介绍的方法主要用于识别或去除温自身抗体、冷自身抗体以及药物性抗体，消除其对常规相容性试验的干扰，更好地发现、鉴定意外抗体，提高AIHA患者地输血安全性，也可以为临床诊断提供实验室依据。试验内容分别为直接抗人球蛋白试验、冷自身抗体的吸收试验、冷自身抗体的特异性鉴定试验、冷凝集抗体效价测定试验、疏基试剂处理红细胞自凝集试验、温自身抗体的吸收试验、同种红细胞吸收自身温抗体试验、冷热

3、溶血试验、通过药物处理红细胞检测药物抗体、通过存在的药物检测药物性抗体。4.3 直接抗人球蛋白试验4.3.1 方法原理利用抗人球蛋白试剂可以与患者体内已经被抗体或者补体致敏的红细胞产生凝集反应，用以检查红细胞是否已经在体内被抗体（自身抗体或意外抗体）致敏。4.3.2 仪器、试剂与耗材1）仪器：台式低速离心机、血型血清学专用离心机、阅片灯箱、显微镜、试管架、全自动检测系统（条件具备时）。2）试剂：0.9%生理盐水；多特异性抗人球蛋白试剂（lgGC3d）、单特异性抗IgG抗体、单特异性抗人C3d抗体、微柱凝集抗人球蛋白卡（多特异性、单特异性）、稀释液。3）耗材N硬试管、一次性塑料滴管、载玻片、记号

4、笔等。1）推荐使用EDTA抗凝静脉血，静脉血管条件不好或紧急情况下也可以使用动脉血，标本采集量3mL;2）标本标识清晰、准确、完整，能反映受血者当前的免疫学状态；3）标本质量符合要求，无血液稀释、细菌污染，离心后无溶血及明显乳糜；4）标本采集后应及时进行相关检测。4.3.4 操作步骤I、试管法1）受检红细胞经生理盐水洗涤3次后，配制成2%-5%红细胞生理盐水悬液。2）取洁净试管，做好标记，分别加入2%.5%红细胞生理盐水悬液1滴和多特异性抗人球蛋白试剂1滴（或遵照试剂使用说明书）。3）以100Og离心15秒，观察有无红细胞凝集。4）试验结果为阴性，试验结束。5）试验结果为阳性，可以根据需要，选

5、择是否继续使用抗IgG和抗C3d抗人球蛋白试剂重复（2）、（3）步骤，确认红细胞致敏类型。n、微柱凝集法1）手工操作：参照微柱凝集抗人球蛋白卡说明书操作。2）全自动检测：参照全自动检测系统使用说明书操作。4.3.5 结果判定与解释阳性结果：红细胞形成凝集或发生溶血；说明受检红细胞已被抗体和（或）补体致敏。阴性结果：红细胞无溶血，肉眼及镜下均未见凝集。说明受检红细胞未被抗体或补体致敏。4.3.6 室内质控详见红细胞意外抗体筛查试验盐水抗人球蛋白法。4.3.7 室间质评：不适用。4.3.8 注意事项：1）受检红细胞必须经过充分洗涤，以去除游离抗体和红细胞表面黏附的蛋白。2）添加抗人球蛋白试剂后，I

6、gG致敏的红细胞通常在直接离心后出现凝集,补体致敏的红细胞通常是经过室温孵育一段时间后离心检测出来。3）多数WAIHA同时存在抗IgG和抗C3d,在多特异性抗人球蛋白试剂作用下呈阳性结果；少数情况下，红细胞表面只有IgG或补体C3d；极少数个体多特异性抗人球蛋白试剂为阳性，单独使用抗IgG或者抗C3d血清为阴性，可能是抗IgM和抗IgA抗体致敏。4）混合型AIHA的患者同时可以检出IgG和补体C3do5）CAS和PCH患者只有抗补体C3d阳性，而抗IgG阴性。4.4冷自身抗体的吸收试验4.4.1 方法原理冷自身抗体的存在是较为普遍的现象，但一般效价都不高，而冷凝集素综合征（CAS）患者的冷自身

7、抗体效价通常都很高。高效价的冷自身抗体会干扰ABO血型鉴定、交叉配血以及掩盖血清中可能同时存在的有临床意义的意外抗体。因此需要用自身红细胞吸收去除自身冷抗体，以消除其对血型鉴定和抗体筛查（鉴定）的影响。4.4.2 仪器、试剂与耗材1）仪器：台式低速离心机、血型血清学专用离心机、4。C冰箱、37恒温水浴箱、显微镜、试管架、阅片灯箱。2）试剂：0.9%生理盐水；ZZAP试剂盒（0.5ml1%半胱氨酸活性的木瓜蛋白酶+2.5ml0.2molLDTT+2mlPH7.3PBS混匀,或者Iml1%无花果蛋白酶+2.5ml0.2molLDTT+1.5mlpH7.3PBS混匀）。3）耗材；硬试管、一次性塑料滴

8、管、载玻片、记号笔等。4.4.3 标本要求详见本节直接抗人球蛋白试验。4.4.4 操作步骤1）待吸收血清的制备：不抗凝的血液标本采集后，置4冰箱放置1-2小时。必要时可放置过夜，让自身红细胞充分吸收冷抗体以后，离心分离血清备用。2）吸收用自身红细胞的制备：抗凝血液标本采集后，立即置于37。C恒温水浴箱中孵育10分钟，以100Og离心5分钟，获取压积红细胞备用。3）在试管中将Iml压积红细胞和2mlZZAP试剂充分混合后，置37恒温水浴箱中孵育30分钟。4）用生理盐水洗涤ZZAP处理后的红细胞3次，以100Og离心至少5分钟，尽可能去除上清液。5）向ZZAP处理后红细胞加入Iml待吸收自身血清（

9、步骤1制备）,充分混匀并置4。C冰箱中孵育30分钟。6）血清和红细胞混合物经100og离心5分钟后，将血清转移到另外一只洁净试管中。7）另取一只洁净试管，分别加入1滴ZZAP处理后2%-5%红细胞悬液和2滴吸收后自身血清，经IooOg离心15秒后观察结果。若结果为阴性，吸收后血清可备用；若结果仍为阳性，重复操作步骤3-6,直到结果为阴性为止。4.4.5 结果判定与解释1）结果判定标准阳性结果：红细胞形成凝集或发生溶血;阴性结果：红细胞无溶血，肉眼及镜下均未见凝集。2）结果解释操作步骤7出现阴性结果，说明冷抗体已经被自身红细胞完全吸收掉，可以进行后续试验。相反，如果操作步骤7出现阳性结果，说明自

10、身冷抗体吸收不完全，需要重复操作步骤3-6,直到出现阴性结果为止。4.4.6 室内质控：不适用。4.4.7 室间质评：不适用。4.4.8 注意事项：D冷自身抗体通常经过1-2次自身吸收可以被有效去除掉。2） ZZAP试剂处理自身红细胞后，红细胞上吸附的自身抗体可能去除地不理想,ZZAP试剂中地蛋白酶或DTT可能会破坏目标抗原，这种情况下，可以考虑直接使用37。C温盐水反复多次洗涤红细胞。4.5 冷反应自身抗体的特异性鉴定试验4.5.1 方法原理冷反应自身抗体通常也会表现出一定特异性，以抗-I最常见，也可能为抗不抗中1、抗Pr等，通过使用表达特定抗原的红细胞组合，以及对受检者血清（或血浆）适度稀

11、释处理，通常可以识别、鉴定出冷反应自身抗体的特异性。4.5.2 仪器、试剂与耗材1）仪器：台式低速离心机、血型血清学专用离心机、4。C冰箱、37。C恒温水浴箱、显微镜、试管架、冰浴锅（槽）、阅片灯箱。2）试剂成人Ol型成熟红细胞：可以多人份混合（抗体鉴定谱细胞中获得）。（2）0i型脐带血红细胞。与患者同型的ABo型红细胞。如果患者时A型或AB型，需要Al和A2型红细胞。酶试剂、生理盐水、PBS（pH7.3）o3）耗材：硬试管、一次性塑料滴管、记号笔等。4.5.3 标本要求1）推荐EDTA抗凝静脉血，标本量3ml,37。C孵育15分钟，期间翻转混匀。也可以使用不抗凝静脉血，采集后置37。C直到血

12、清析出。2）红细胞经37。C盐水洗涤至少3遍，配制成2%-5%红细胞生理盐水悬液备用。3）标本标识清晰、完整、规范。4.5.4 操作步骤1）用生理盐水或PBS连续倍比稀释待检血清（或血浆），未稀释血清、1：2、1：4、1：8.1：4096共13管。计算好用量，稀释量应足够用。2）标记三排（例如成人红细胞、脐带血细胞、自身红细胞）稀释的试管（稀释倍数标记1、2、4、8、16）O3）加2滴稀释的血清于对应各试管中。4）各排试管加1滴对应的2%-5%的红细胞悬液。5）混匀，室温孵育30-60分钟。6）以100Og离心15秒，从最高稀释度开始逐一观察各试管的凝集强度，评分并记录结果。7）再将各试管4。

13、C孵育1-2小时。8）以IoOOg离心15秒，立即将试管放入冰浴，按步骤6的观察顺序观察结果，评级并记录结果。4.5.5 结果判定与解释D结果判定标准阳性结果：红细胞形成凝集或发生溶血；阴性结果：红细胞无溶血，肉眼及镜下均未见凝集。2）结果解释常见的冷反应抗体的特异性反应格局见下表。冷凝集综合征以抗-I最常见，也可能为抗-i。如果是抗-i抗体，脐血红细胞比成人红细胞反应强，应该进一步用成人i型红细胞确定是抗-i而不是抗-IT。抗-I通常与表达强H抗原（例如，。型和A2型细胞）的细胞有强反应，这种抗体也成为抗-IH。抗-Pr抗体较为少见，它的特点为各检测管的反应强度都一样。抗-Pr可用酶处理的细

14、胞进行鉴定，抗-Pr不与酶处理的红细胞反应，而抗-I和抗-i与酶处理的细胞均有强反应。抗-Pr与I型或i型未处理细胞的反应强度一样。冷自身抗体特异性反应格局红细胞抗体特异性抗-1抗一i抗F抗TH抗-PrOI型成人红细胞+0/10/I+Oi型脐血细胞0/1+I+Oi型成人红细胞0/1+0/1I+Al型成人红细胞+0/I0/1I+患者自身红细胞+0/10/1I+OI型酶处理的红细胞Itt0注：+,有反应：0,无反应：I,弱反应：f,强反应。456室内质控：不适用。457室间质评：不适用。458注意事项:1）有些冷自身抗体稀释到一定的倍数时才表现出特异性，有些在室温或者4。C也无法确定其特异性，这种

15、情况下，可以在30-37oC下孵育，延长反应时间可以增加反应强度，孵育2小时可以使结果更准确。2）此操作既可以确定抗体的特异性，又可以检查其效价。如果反应是在37。C开始（试剂在使用之前也需在37。C预温），进而可以在不同温度（如37,30,室温、4）下孵育观察试验结果，可以确定抗体的特异性、效价和热幅。3）如果检测在37。（:和30。（:下进行，未稀释的原始血清应该同时进行平行试验。4）有条件的情况下，可适当增加鉴定细胞种类（如孟买或类孟买型、OlAllA2型iadult和Iadult、唾液酸甘酶处理细胞等），用以鉴别I、i、用IH、iH、IA、iAPrGd、Rx、LUd、Vo、Li、Me等

16、冷自身抗体特异性。4.6 冷凝集抗体效价测定试验4.6.1 方法原理如果自身冷凝集抗体效价很高，可能会引起病理性冷凝集素病,进而会引起溶血反应和全身系统症状，并预示有发生B细胞瘤的潜在风险。通过测定冷凝集抗体效价，可以为临床诊断提供参考依据。4.6.2 仪器、试剂与耗材1）仪器：台式低速离心机、血型血清学专用离心机、4。C冰箱、37恒温水浴箱、显微镜、试管架、冰浴锅（槽）、阅片灯箱。2）试剂2%-5%成人Ol型成熟红细胞悬液：可以多人份混合（抗体鉴定谱细胞中获得）。酶试剂、生理盐水、PBS（pH7.3）o3）耗材；硬试管、一次性塑料滴管、记号笔等。4.6.3 标本要求1）推荐EDTA抗凝静脉血

17、标本量3ml,37。C孵育15分钟，期间翻转混匀。也可以使用不抗凝静脉血，采集后置37。C直到血清析出。2）标本标识清晰、完整、规范。4.6.4 操作步骤1）用生理盐水或PBS连续倍比稀释待检血清（或血浆），未稀释血清、1：2、1：4、1：8,1：4096共:L3管。计算好用量，稀释量应足够用。2）在标记好的试管中分别加入2滴对应稀释的血清和1滴2%-5%成人Ol型红细胞悬液，混匀。3）于4C孵育1-2小时。4）以IOoOg离心15秒，立即将试管放入冰浴，从最高稀释度开始观察各试管的凝集强度，评级并记录结果。4.6.5 结果判定与解释1）结果判定标准阳性结果：红细胞形成凝集或发生溶血；阴性结

18、果：红细胞无溶血，肉眼及镜下均未见凝集。2）结果解释产生肉眼可见凝集（1+）最高稀释度的倒数即为抗体效价。自身冷凝集素的效价64视为有临床意义，如果效价1000可能会引起溶血性贫血，但这种情况很少见。效价低于100O可能发生于自身冷凝集抗体（如抗i）或者是低效价、高热幅反应类型的抗体。如果患者是补体引起的DAT阳性，并具有溶血症状，应进一步进行特异性和热幅范围研究。4.6.6 室内质控：不适用。4.6.7 室间质评：不适用。4.6.8 注意事项：同本节冷反应自身抗体的特异性鉴定试验。4.7 筑基试剂处理红细胞自凝集试验4.7.1 方法原理IgM冷自身抗体可以和自身红细胞结合，导致红细胞自发凝集

19、进而干扰红细胞血型抗原鉴定。疏基试剂（DTT或2-Me）可以破坏IgM分子二硫键，减低其多价性，使其丧失直接凝集红细胞的能力，从而消除IgM冷自身抗体对血型抗原鉴定结果的影响。472仪器、试剂与耗材1）仪器：台式低速离心机、血型血清学专用离心机、37恒温水浴箱、显微镜、试管架、阅片灯箱。2）试剂：0.01molLDTT或0.1molL2-Me、pH为7.3PBS缓冲液、生理盐水、对照细胞（目标抗原单剂量表达）、6%白蛋白、IgM抗血清（由目标血型抗原确定）。3）耗材：硬试管、一次性塑料滴管、记号笔等。4.7.3 标本要求IgM冷自身抗体导致自凝集的红细胞。4.7.4 操作步骤1）生理盐水洗涤待

20、检红细胞和对照细胞3次，使用PBS将洗涤后压积红细胞稀释为浓度50%的红细胞悬液。2）分别取1体积红细胞悬液和0.0ImOI/LDTT（或0.1molL2-Me）混匀。3)37C孵育15分钟(DDT)或10分钟(2-Me)04）生理盐水洗涤3次后，取少量待检红细胞配制成2%-5%红细胞生理盐水悬液。5）取1支洁净试管，加入待检1滴2%-5%红细胞生理盐水悬液和和1滴6%白蛋白。6）以100Og离心15秒。观察结果。7）结果阴性，待检红细胞悬液可用于进一步血型抗原鉴定。结果阴性，需要重复上述1-6步骤，同步处理对照细胞。4.7.5 结果判定与解释1）结果判定标准阳性结果：红细胞形成凝集或发生溶血

21、阴性结果：红细胞无溶血，肉眼及镜下均未见凝集。2）结果解释处理前后对照细胞抗原强度无变化，待检红细胞处理后，加6%白蛋白直接离心结果阴性，说明处理适度。处理前后对照细胞抗原强度无变化，待检细胞处理后加6%白蛋白直接离心观察结果阳性，说明处理不足，需要延长处理时间，重复试验。处理后对照细胞抗原强度较处理前明显减弱，说明处理过度,目标抗原受到破坏，需要调整试验条件或更换其他方法。476室内质控通过设置对照细胞，实现对筑基处理过程的内部质量控制，防止处理过度，破坏目标抗原。477室间质评：不适用。4.7.8 注意事项1)此方法通常用于受到冷自身抗体影响的ABO正定型试验和Rh分型试验前处理红细胞。

22、2) Kell系统抗原可能会被DTT或2-Me破坏，Jsa和Jsb抗原可能比Kell系统抗原更易于被0.01molLDTT破坏。4.8 温自身抗体的吸收试验4.8.1 方法原理有温自身抗体的患者血液循环中的红细胞包被了自身抗体，导致DAT阳性；当抗体数量达到一定数量级后，其血清中也可以存在着游离的温自身抗体。温自身抗体会干扰抗体筛查和交叉配血的试验结果，因此，需要用自身红细胞吸收除去温自身抗体，以消除其对有临床意义的意外抗体的遮蔽作用。由于自身红细胞已包被了抗体，不能直接用于自身吸收，因此需要先将包被在红细胞上的温抗体除去，暴露红细胞抗原位点，才能作为用于自身吸收的红细胞，最有效的处理方法是使

23、用ZZAP试剂。4.8.2 仪器、试剂与耗材1）仪器：台式低速离心机、血型血清学专用离心机、4。C冰箱、37。C恒温水浴箱、显微镜、试管架、阅片灯箱。2）试剂：生理盐水、ZZAP试剂盒。3）耗材：硬试管、一次性塑料滴管、记号笔等。4.8.3 标本要求1） EDTA抗凝静脉血4ml,吸收效率低下时，还需增加标本量,以获得足够自身红细胞用于多次吸收。2）标本标识清晰、完整、规范。4.8.4 操作步骤1）抗凝血液标本采集后，以100Og,离心5分钟，不必洗涤，获取自身压积红细胞和血浆备用。2）在试管中将Iml自身压积红细胞和2mlZZAP试剂充分混合后，置37。C孵育30分钟，孵育期间，周期性混匀试

24、管内容物。3）生理盐水洗涤ZZAP处理后红细胞3次，以100Og,离心至少5分钟，尽可能去除上清液。4）取少量ZZAP处理后红细胞做DAT试验；DAT阴性，红细胞待用；DAT阳性，重复2-3步骤直到出现阴性结果。5）在ZZAP处理后红细胞中加入等体积待吸收自身血浆（步骤1制备），充分混匀并置37,孵育30-40分钟。6）血清和红细胞混合物以100Og,离心5分钟后，将血清转移到另外一只洁净试管中。7）另取一只洁净试管，分别加入1滴2%-5%ZZAP处理自身红细胞悬液和2滴吸收后自身血清。采用抗人球蛋白法检测：结果为阴性，吸收后血清备用（意外抗体检测）；结果仍为阳性，重复步骤5-6,直到结果为阴

25、性为止。4.8.5 结果判定与解释D结果判定标准阳性结果：红细胞形成凝集或发生溶血；阴性结果：红细胞无溶血，肉眼及镜下均未见凝集。2）结果解释操作步骤4DAT出现阴性结果，说明红细胞致敏的自身抗体已经完全去除掉，可以进行后续吸收试验。操作步骤4DAT出现阳性结果，说明红细胞致敏的自身抗体没有完全去除掉,需要重复操作步骤2-3,直到出现阴性结果为止。操作步骤7出现阴性结果，说明自身温抗体已经被自身红细胞完全吸收掉，可以进行后续试验。操作步骤7出现阳性结果，说明自身温抗体吸收不完全，需要重复操作步骤5-6,直到出现阴性结果为止。4.8.6 室内质控：不适用。4.8.7 室间质评：不适用。4.8.8

26、 注意事项D患者如果近3个月内输过异体红细胞，则不能使用自身红细胞做自身抗体吸收试验，以防意外抗体被残存的异体红细胞吸收掉,导致漏检。2） ZZAP试剂会破坏Kell系统抗原以及M、N、FyaFyb等血型抗原，如果怀疑自身抗体具有这些高频抗原特异性（类抗体），可以考虑使用1%无花果酶或木瓜酶处理自身红细胞。3）自身抗体在LISS抗人球蛋白介质中的最初凝集强度为1+时，一般通过一次吸收即可去除干净；如果凝集强度达到2+.3+,通常需要吸收2-3次。如果自身吸收次数超过4次，可能导致意外抗体被稀释而增加漏检风险。4.9 同种红细胞吸收自身温抗体试验4.9.1 方法原理可以通过已知表型的同种红细胞吸

27、收去除自身抗体，吸收后的血清可用谱细胞进行意外抗体特异性的检测。这种方法适用于近期有输血史的患者或者无法获取足量自身细胞的患者。用酶或ZZAP处理细胞可以增强吸收效果，DTT和（或）酶处理细胞，可以增强部分抗原表达（RhPlPkLKiddLeWiS系统抗原），也可能会破坏部分红细胞抗原，具体见下表。不同试剂处理红细胞破坏的血型抗原处理试剂破坏抗原酶蛋白M、N、S、Fy4、Fyo、Yt4、Ch、Rg、Pr、Tn、Mg、JMH等DDTYt4、JMHnLWa、LWbYkaKnaLutheranallKel1Dombrock等ZZAP上面所列全部抗原4.9.2 仪器、试剂与耗材1)仪器：台式低速离心机

28、血型血清学专用离心机、4。C冰箱、37恒温水浴箱、显微镜、试管架、阅片灯箱。2)试剂：生理盐水、ZZAP试剂盒。I、1%半胱氨酸活性的木瓜蛋白酶或1%无花果蛋白酶、ZZAP试剂、PBS(pH7.3)、生理盐水。、n、异体吸收红细胞的选择如果患者红细胞表型已知，应尽量选择表型匹配的异体红细胞。至少Rh和Kidd表型匹配(高级要求是需要RhMNSKidd表型匹配)。如果患者细胞表型未知，分别选择RIR1、R2R2和rr表型的O型红细胞，其中一个为Jk(a-)、一个为Jk(b-)o此外，如果红细胞仅用酶处理，至少有一组细胞为K-。3)耗材：硬试管、一次性塑料滴管、记号笔等。4.9.3 标本要求1）

29、推荐EDTA抗凝静脉血，特殊情况下也可以使用动脉血，标本量3ml,37。殍育15分钟，期间翻转混匀，离心后获得血浆。也可以使用不抗凝静脉血，采集后置37。C直到血清析出。2）标本标识清晰、完整、规范。4.9.4 操作步骤1）生理盐水洗涤Iml试剂细胞、离心去除上清液，留取压积红细胞（ZZAP处理红细胞之前可以不洗洗涤红细胞）2）向洗涤红细胞中加入等体积1%的酶液或者是2倍体积的ZZAP,颠倒混匀。3）如果加入酶液,需37孵育15分钟（如果加入ZZAP,需37孵育30分钟），期间混匀数次。4）生理盐水洗涤红细胞至少3次，末次洗涤离心至少5分钟，尽可能去除洗涤液。5）每一个红细胞标本加入等量患者的

30、血清，37。C孵育30分钟，期间混匀数次。6）以100og离心5分钟，获取上层血清液。7）用未经处理的红细胞检测吸收后的血清，如果存在反应（盐水介质法或抗人球蛋白法），说明吸收不完全，重复步骤5-6,直到吸收完全为止。1）结果判定标准阳性结果：红细胞形成凝集或发生溶血；阴性结果：红细胞无溶血，肉眼及镜下均未见凝集。2）结果解释操作步骤7出现阴性结果，说明温自身抗体已经被处理后的异体红细胞完全吸收掉，可以进行后续试验。、操作步骤7出现阳性结果，说明温自身抗体未能被处理后的异体红细胞完全吸收掉，需要重复操作步骤5-6,直到出现阴性结果为止。在评估完全吸收时，要注意红细胞的表型，如红细胞膜上的相应抗

31、原被酶或DTT破坏掉了，它不能吸收相应的抗体，用未处理的红细胞进行检测时会一直存在反应，例如吸收后的血清中的抗-Fya与未经处理的Fy（a+）细胞会存在反应。此时，可以使用多个谱细胞来判断阳性反应是由自身抗体（均为阳性、强度无差异）导致；还是意外抗体（阴性结果、阳性结果同时存在，或者均为阳性，但存在强度差异）导致，确认自身抗体吸收干净后，对吸收后的血清可进行抗体鉴定试验。4.9.6 室内质控：不适用。4.9.7 室间质评：不适用。1）特定的酶或ZZAP不会使s抗原变性，被处理后的细胞膜应该确定存在何种抗原。P、I、Lewis系统抗体可能被吸收而漏检，尽管其多数为无临床意义抗体。2）如果存在很强

32、的自身抗体，应准备3次更多次可用作吸收的红细胞。作为参考，如果患者LlSS-IAT试验检测自身抗体反应强度只有1+,通常做一次吸收试验即可；如果反应强度2+-3+,一般要进行2-3次吸收。如果吸收试验大于4次，存在稀释意外抗体的风险。适当增加吸收时红细胞的比例可以提高吸收效果。3）酶或ZZAP处理的红细胞与血清混合时出现凝集，说明吸收效果较好，特别时高效价抗体存在的时候更容易出现。4）因为DTT和（或）酶处理的红细胞会被破坏一部分红细胞膜抗原，有些自身抗体不能用处理的红细胞吸收除去的话，可以考虑用未经处理的红细胞进行吸收。5）如果血清中除自身抗体以外，存在两种或两种以上意外抗体，由于吸收用红细胞抗原表达的限制，可能会漏检其中的部分意外抗体。