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1、大肠杆菌内源过氧化氢检测方法的建立 班级： 姓名： 指导老师： 一、研究的意义 二、内容和方法 三、实验结果 四、结果分析 大肠杆菌内源过氧化氢检测方法的建立 一、研究的意义 常规滴定法 分光光度法 荧光光度法 色谱法 电化学法 过氧化氢测定方法 化学发光法 大肠杆菌内源过氧化氢检测方法的建立 二、内容和方法 本实验旨在找出一种检测细菌內源过氧化氢的模 型方法。 本实验以大肠杆菌突变体为研究对象，通过辣根 过氧化物酶 酚红法、荧光法、硫酸钛法三种不 同方法绘制出不同的标准曲线，最后根据不同的 标准曲线计算出 20个大肠杆菌抗氧化基因突变体 菌株在同一生长浓度时內源过氧化氢的释放量。 大肠杆菌内
2、源过氧化氢检测方法的建立 三、实验结果 浓 度梯度 100 m 80 m 60 m 40 m 20 m 10 m 1 m 吸光值0.6080.4610.3750.2480.1340.0570.022 020406080100 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 酚红 法标准曲 线（改 进 后） Y=0.0059x+0.0108 R 2 =0.9971 吸 光 值 浓 度 大肠杆菌内源过氧化氢检测方法的建立 三、实验结果 酚红法测不同大肠杆菌菌株內源过氧化氢含量柱状图 1234567891011121314151617181920 0 2 4 6 8 10 12 过
3、氧 化 氢 含 量 （ M ） 大 肠 杆 菌 菌 种 酚红 法 测大肠杆菌 內源过 氧 化氢 含量 大肠杆菌内源过氧化氢检测方法的建立 三、实验结果 浓度 梯度 10 M 8 M 6 M 4 M 2 M 1 M 0.8 M 荧光 强度 32601146976656385256220 0123456789 200 400 600 800 1000 1200 荧光 法 标准曲线 Y=132.64x+124.58 R 2 =0.9936 荧 光 强 度 浓 度 大肠杆菌内源过氧化氢检测方法的建立 三、实验结果 荧光法测不同大肠杆菌菌株內源过氧化氢含量柱状图 12345678910111213141
4、51617181920 2 4 6 8 10 12 內 源 过 氧 化 氢 含 量 （ M ） 大肠 杆菌 菌 株 荧 光 法 测大肠杆菌 內源过 氧 化氢 含量 大肠杆菌内源过氧化氢检测方法的建立 三、实验结果 0100200300400500 0.00 0.05 0.10 0.15 0.20 0.25 0.30硫酸钛法 标准曲 线 Y=0.0005x+0.014 R 2 =0.9626 吸 光 值 浓 度 梯度500 M250 M125 M50 M25 M 吸光值0.2360.1630.0740.0290.017 大肠杆菌内源过氧化氢检测方法的建立 硫酸钛法检测过氧化氢时，检测范围区间在
5、10M 100M 之间，而大肠杆菌內源过氧化 氢的释放量在 10M 以下，所以无法检测出来。 三、实验结果 大肠杆菌内源过氧化氢检测方法的建立 （1）通过酚红法和荧光法的对比，由于误差 的存在，不同方法测的內源过氧化氢的含量 有些差别，但总的来说，使用两种方法测得 內源过氧化氢含量时，各突变株的过氧化氢 含量与野生型突变菌株相比较，其升高或降 低的趋势是一致的。 虽然不同的大肠杆菌突变株內源过氧化氢的 释放量是有明显的差异的，不论用哪种方法 检测，结果都是一致的。 四、结果分析 大肠杆菌内源过氧化氢检测方法的建立 四、结果分析 （2）由于荧光法具有很高的灵敏性且操作也较 简单，且当荧光物质的浓度较低时,其荧光强度 与该物质的浓度通常会有良好的正比关系，因 此，采用荧光法测定细菌内源过氧化氢比较好。 大肠杆菌内源过氧化氢检测方法的建立 谢谢！ 大肠杆菌内源过氧化氢检测方法的建立