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1、基因工程原理练习题及其答案一、填空题1 基因工程是_年代发展起来的遗传学的一个分支学科。2 基因工程的两个基本特点是： (1)_，(2)_。3 基因克隆中三个基本要点是：_；_和_。4碱裂解提取溶液I中的葡萄糖的作用_、_、_。5同一质粒不同构型在电泳过程中迁移速率为 。6部分酶切可采取的措施有：(1)_(2)_ (3)_等。7第一个分离的限制性内切核酸酶是_；而第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是_。8限制性内切核酸酶BsuRI和Hae的来源不同，但识别的序列都是_，它们属于_。9DNA聚合酶I的Klenow大片段是用_切割DNA聚合酶I得到的分子量为76kDa的大片段，具有两种酶活性：

2、 (1)_； (2)_的活性。10为了防止DNA的自身环化，可用_去双链DNA_。11EGTA是_离子螯合剂。12测序酶是修饰了的T7 DNA聚合酶，它只有_酶的活性，而没有_酶的活性。13切口移位(nick translation)法标记DNA的基本原理在于利用_的_和_的作用。14欲将某一具有突出单链末端的双链DNA分子转变成平末端的双链形式，通常可采用_或_。15反转录酶除了催化DNA的合成外，还具有_的作用，可以将DNA- RNA杂种双链中的_水解掉。16基因工程中有3种主要类型的载体： _、_、_。17就克隆一个基因(DNA片段)来说，最简单的质粒载体也必需包括三个部分：_、_、_。

3、另外，一个理想的质粒载体必须具有低分子量。 18琼脂糖凝胶的分辨力与胶浓度的关系是 。19如果改变反应条件就会影响酶的专一性和切割效率，称为_。20影响限制性内切酶活性的因素_、_、_、_。21连接反应的实用温度为_。22pUCl8质粒是目前使用较为广泛的载体。pUC系列的载体是通过 和 两种质粒改造而来。它的复制子来自 ，Amp 抗性基因则是来自 。23噬菌体之所以被选为基因工程载体，主要有两方面的原因：一是 ； 二是 。24 野生型的M13不适合用作基因工程载体，主要原因是 和 。25 黏粒(cosmid)是质粒噬菌体杂合载体，它的复制子来自 、COS位点序列来自 ，最大的克隆片段达到 k

4、b。26 野生型的l噬菌体DNA不宜作为基因工程载体，原因是：(1) (2) (3) 。27噬菌粒是由质粒和噬菌体DNA共同构成的，其中来自质粒的主要结构是 ，而来自噬菌体的主要结构是 。28l噬菌体载体由于受到包装的限制，插入外源DNA片段后，总的长度应在噬菌体基 因组的 的范围内。29 在分离DNA时要使用金属离子螯合剂，如EDTA和柠檬酸钠等，其目的是 。30 用乙醇沉淀DNA时，通常要在DNA溶液中加人单价的阳离子，如NaCl和NaAc， 其目的是 。31 引物在基因工程中至少有4个方面的用途：(1) (2) (3) (4) 。32Clark发现用Taq DNA聚合酶得到的PCR反应产

5、物不是平末端，而是有一个突出 碱基末端的双链DNA分子。根据这一发现设计了克隆PCR产物的 。33在cDNA的合成中要用到S1核酸酶，其作用是切除在 。34乙醇沉淀DNA的原理是 。35 假定克隆一个编码某种蛋白质的基因，必须考虑其表达的三个基本条件： (1)_ (2)_ (3)_。36 受体细胞的感受态是_。37 DNA重组连接的方法大致分为四种：(1)_(2)_ (3)_(4)_。38 将含有外源基因组一个酶切片段的质粒称之为含有一个_，各种此类质 粒的集合体称之为构建了一个_。39将含有一个mRNA的DNA拷贝的克隆称作一个_，源于同一批RNA制备 物的克隆群则构建了一个_。40只要知道

6、基因组中某一特定区域的部分核苷酸组成，用_可以将这段DNA 进行百万倍的扩增。41人工感受态的大肠杆菌细胞在温度为_时吸附DNA, _时摄人DNA。42目前，在重组体的筛选中，已经发展了许多构思巧妙、具有极高准确性的筛选方法。 大致可以分为： (1)_(2)_(3)_ (4)_等。43PCR扩增筛选重组体是比较简便的筛选方法，它适合于_。44 核酸杂交探针可分为两大类： DNA探针和RNA探针。其中DNA探针又分为_ 探针和_探针。45RNaseH的活性为_ 。46第一个用于基因克隆的天然质粒 。47噬菌粒载体的包装需要_的帮助下才能完成。48cDNA文库的特点： 、 、 、 。49用_处理大

7、肠杆菌，能增加膜的通透性。50在_技术中，DNA限制性片段经凝胶电泳分离后，被转移到硝酸纤维素膜(或尼龙膜)上，然后与放射性的DNA探针杂交。51可用T4 DNA聚合酶进行平末端的DNA标记，因为这种酶具有_和_的活性。52根据外源片段提供的遗传表型筛选重组体，必需考虑三种因素： (1)_ (2)_(3)_。53Northern印迹和Southern印迹有两点根本的区别： (1)_ (2)_。54外源基因导入植物细胞的方法有： 。答案1702(1)分子水平上的操作；(2)细胞水平上的表达3克隆基因的类型；受体的选择；载体的选择4增加溶液的粘度，维持渗透压，防止DNA受机械力（震荡）的作用而降解

8、5超螺旋大于线性大于开环。6(1)减少酶量；(2)缩短反应时间；(3)增大反应体积7EcoK；EcoRl8GGCC；异源同工酶9 枯草杆菌蛋白酶；(1)5-3合成酶的活性；(2)3-5外切核酸酶10碱性磷酸酶；5端的磷酸基团11 Ca2+12 5-3合成； 3-5外切13 DNA聚合酶I：5一3外切核酸酶；5一3合成酶14S1核酸酶切割；DNA聚合酶补平15核酸水解酶H；RNA16 质粒DNA；病毒DNA；质粒和病毒DNA杂合体17 复制区： 含有复制起点；选择标记： 主要是抗性基因；克隆位点： 便于外源DNA的插入18 正比19， 星号（*）活性20 DNA的纯度、 DNA的甲基化程度 、

9、 温度、缓冲液(Buffer) 21. 416 C22 pBR322和M13；pMBl；转座子23 它在细菌中能够大量繁殖，这样有利于外源DNA的扩增；对某些噬菌体(如l噬菌)的遗传结构和功能研究得比较清楚，其大肠杆菌宿主系统的遗传也研究得比较详尽 24 没有合适的限制性内切核酸酶识别位点；选择标记25质粒；l噬菌体； 4526 (1)分子量大，(2)酶的多切点，(3)无选择标记27复制区； IG区287510529 螯合Mg2+离子，抑制核酸酶的活性30 中和DNA分子的负电荷，增加DNA分子间的凝聚力31(1)合成探针；(2)合成cDNA；(3)用于PCR反应；(4)进行序列分析32T载体

10、33第二链合成时形成的发夹环34乙醇使DNA分子脱水35(1)保持正确的可读框 (2)能够使其转录的启动子 (3)具有翻译的起始和终止信号36接受外源DNA的生理状态37(1)黏性末端连接； (2)平末端连接； (3)同聚物接尾连接； (4)接头连接法38 基因组DNA克隆； 基因组DNA文库39cDNA克隆；cDNA文库40聚合酶链式反应(PCR)410C；42C42(1)遗传学方法； (2)物理筛选法； (3)核酸杂交法； (4)表达产物分析法43插入外源片段的种类较多，大小又极为相似的重组体的筛选44基因组DNA；cDNA4553或35方向特异地水解RNA-DNA杂交双链中的RNA链46

11、pSC10147辅助噬菌体48（1）不含内含子序列。（2）可以在细菌中直接表达。 （3）包含了所有编码蛋白质的基因。 （4）比DNA文库小的多，容易构建49CaCl250Southern印迹5153合成酶；3 5外切核酸酶52(1)克隆的是完整的基因；(2)使用的是表达载体；(3)不含内含子53(1)印迹的对象不同：Northern是RNA，Southern是DNA；(2)电泳条件不同，前者是变性条件，后者是非变性条件54叶盘法、电击法、基因枪法二、选择题(单选或多选)1 因研究重组DNA技术而获得诺贝尔奖的科学家是( ) (a)AKornberg (b)WGilbert (c)PBerg (

12、d)BMcClintock2 第一个作为重组DNA载体的质粒是( ) (a)pBR322 (b)ColEl (c)pSCl01 (d)pUCl83 关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有( )不太恰当。 (a)由作用于同一DNA序列的两种酶构成 (b)这一系统中的核酸酶都是类限制性内切核酸酶 (c)这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA进行修饰 (d)不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统4型限制性内切核酸酶： ( ) (a)有内切核酸酶和甲基化酶活性且经常识别回文序列 (b)仅有内切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供 (c)限制性识别非甲基化的核苷酸序列 (d)有外切

13、核酸酶和甲基化酶活性 (e)仅有外切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供5下面有关限制酶的叙述哪些是正确的?( ) (a)限制酶是外切酶而不是内切酶 (b)限制酶在特异序列(识别位点)对DNA进行切割 (c)同一种限制酶切割DNA时留下的末端序列总是相同的 (d)一些限制酶在识别位点内稍有不同的点切割双链DNA，产生黏末端 (e)一些限制酶在识别位点内相同的位置切割双链DNA，产生平末端6第一个被分离的类酶是： ( ) (a)EcoK (b)Hind (c)Hind (d)EcoB7在下列进行DNA部分酶切的条件中，控制那一项最好?( ) (a)反应时间 (b)酶量 (c)反应体积 (d)

14、酶反应的温度8在下列试剂中，那一种可以螯合Ca2+离子?( ) (a)EDTA (b)柠檬酸钠 (c)SDS (d)EGTA9在下列工具酶中，那一种可以被EGTA抑制活性?( )(a)S1单链核酸酶 (b)末端转移酶 (c)碱性磷酸酶 (d)Bal 31核酸酶10.限制性核酸内切酶切割DNA后产生 （ ）(a)5磷酸基和3羟基基团的末端 (b) 5磷酸基和3磷酸基团的末端 (c) 5羟基和3羟基基团的末端 (d) 3磷酸基和5羟基基团的末端 (e) 以上都不是 11. 可识别并切割特异DNA序列的酶是 （ ）(a) 非限制性核酸外切酶 (b) 限制性核酸内切酶 (c) 限制性核酸外切酶 (d)

15、 非限制性核酸内切酶 (e) DNA酶12. 克隆所依赖的DNA载体的最基本性质是 （ ）(a)卡那霉素抗性 (b) 青霉素抗性 (c) 自我复制能力 (d)自我表达能力 (e) 自我转录能力 13下列哪种克隆载体对外源DNA的容载量最大? （ ）(a)质粒 (b).黏粒 (c)酵母人工染色体(YAC) (d).l噬菌体 (e) cDNA表达载体14关于cDNA的最正确的说法是：（ ）(a)同mRNA互补的单链DNA (b)同mRNA互补的双链DNA (c).以mRNA为模板合成的双链DNA (d)以上都正确15关于感受态细胞性质的描述，下面哪一种说法不正确? （ ）(a)功具有可诱导性 (b

16、)细菌生长的任何时期都可以出现 (c)具有可转移性 (d)不同细菌出现感受态的比例是不同的16Southem印迹的DNA探针（ ）杂交。(a)只与完全相同的片段 (b)可与任何含有相同序列的DNA片段 (c)可与任何含有互补序列的DNA片段(d)可与用某些限制性内切核酸酶切成的DNA片段 (e).以上都是17在利用lacZ失活的显色反应筛选法中，IPTG的作用是（ ）(a)诱导宿主的肽的合成 (b)诱导宿主的肽的合成(c)作为酶的作用底物 (d)作为显色反应的指示剂18用免疫化学法筛选重组体的原理是（ ）(a)根据外源基因的表达 (b)根据载体基因的表达(c)根据mRNA同DNA的杂交 (d)

17、根据DNA同DNA的杂交19. 在基因工程中，DNA重组体是指 （ ）(a) 不同来源的两段DNA单链的复性 (b) 目的基因与载体的连接物(c)不同来源的DNA分子的连接物 (d)原核DNA与真核DNA的连接物(e)两个不同的结构基因形成的连接物20. 重组DNA的筛选与鉴定不包括哪一方法 （ ）(a)限制酶酶切图谱鉴定 (b). PCR扩增鉴定(c) 显微注射 (d) 蓝白筛选(e)抗药筛选21. 下面关于多克隆位点(multipleclonesite,MCS)的描述，不正确的句是（ ）(a)仅位于质粒载体中 (b)具有多种酶的识别序列(c)不同酶的识别序列可以有重叠 (d)一般是人工合成

18、后添加到载体中 22. 在cDNA技术中，所形成的发夹环可用（ ）(a)限制性内切核酸酶切除 (b)用31外切核酸酶切除 (c)用S1核酸酶切除 (d)用51外切核酸酶切除23. 下列对逆转录酶描述正确的是：（ ）(a)依赖于RNA的DNA聚合酶或称为RNA指导的DNA聚合酶(b)依赖于cDNA的DNA聚合酶或称为cDNA指导的DNA聚合酶(c)依赖于DNA的DNA聚合酶或称为DNA指导的DNA聚合酶(d) 依赖于RNA的RNA聚合酶或称为rNA指导的RNA聚合酶24. T 4 -DNA 连接酶是通过形成磷酸二酯键将两段 DNA 片段连接在一起，其底物的关键基团是（ ）(a)2 -OH 和 5

19、 P (b)2 -OH 和 3 P (c) 3 -OH 和 2 P (d) 3 -OH 和 5 -P25. 下列哪一种酶作用时需要引物? （ ） (a) 限制酶 (b)末端转移酶 (c) 反转录酶 (d) DNA连接酶26. 用下列方法进行重组体的筛选，只有（ ）说明外源基因进行了表达。 (a) Southem印迹杂交 (b)Northem印迹杂交 (c) Western印迹 (d) 原位菌落杂交27. Klenow酶与DNA聚合酶相比，前者丧失了（ ）的活性。 (a) 5，-3，合成酶， (b) 3，-5，外切酶 (c) 5，-3，外切酶 (d) 转移酶28. 在下列进行DNA部分酶切的条件

20、中，控制那一项最好? （ ） (a) 反应时间 (b) 酶量 (c)反应体积 (d)酶反应的温度29. 黏性末端连接法，不仅操作方便，而且（ ） (a) 产生新切点 (b)易于回收外源片段 (c) 载体不易环化 (d) 影响外源基因的表达30能够用来克隆32kb以下大小的外源片段的质粒载体是( ) (a)charomid (b)plasmid (C)cosmid (d)phagemid31第一个作为重组DNA载体的质粒是( ) (a)pBR322 (b)ColEl (c)pSCl01 (d)pUCl832. Ti质粒：( ) (a)可从农杆菌转到植物细胞中 (b)作为双链DNA被转移 (c)在

21、植物中导致肿瘤 (d)介导冠瘿碱的合成，作为细菌的营养物和植物的生长激素 (e)需要细菌的vir基因帮助转移 (f)在植物细胞中作为染色体外质粒33黏粒(cosmid)是一种人工建造的载体，( ) (a)它具有COS位点，因而可进行体外包装 (b)它具有质粒DNA的复制特性 (c)进入受体细胞后，可引起裂解反应 (d)进入受体细胞后，可引起溶源化反应34有两种确定核酸中核苷酸序列的方法：化学序列分析法(Maxam-Glbert)和酶学序列分析法(Sanger)。酶学测序法的基本原理优点是：( ) (a)碱基与特殊染料间不同的相互作用 (b)一个合成引物的延伸和DNA修复合成的可靠终止 (c)限

22、制性位点与DNA末端标记的相关性 (d)可同时对DNA双螺旋的两条链进行测序 (e)反应是DNA特异的，RNA不会带来干扰。这样既减少纯化步骤，也节约了开支。35关于cDNA的最正确的说法是：( ) (a)同mRNA互补的单链DNA (b)同mRNA互补的双链DNA (c)以mRNA为模板合成的双链DNA (d)以上都正确36用碱法分离质粒DNA时，染色体DNA之所以可以被除去，是因为：( ) (a)染色体DNA断成了碎片 (b)染色体DNA分子量大，而不能释放 (c)染色体变性后来不及复性 (d)染色体未同蛋白质分开而沉淀37. 关于碱解法分离质粒DNA，下面哪一种说法不正确?( ) (a)

23、溶液I的作用是悬浮菌体 (b)溶液的作用是使DNA变性 (c)溶液的作用是使DNA复性 (d)质粒DNA分子小，所以没有变性，染色体变性后不能复性38. Clark做了一个有趣的实验，发现TaqDNA聚合酶可以不需要模板，在双链DNA的 末端加一个碱基，主要是加( ) (a)dGTP (b)dATP (c)dCTP (d)dTTP39根据构建方法的不同，基因文库分为基因组文库、cDNA文库等。在下列文库中， ( )属cDNA文库 (a) YAC文库 (b) MAC文库 (c) 扣减文库 (d) BAC文库40下面关于多克隆位点(multiple clone site,MCS)的描述，不正确的句

24、是( ) (a)仅位于质粒载体中 (b)具有多种酶的识别序列 (c)不同酶的识别序列可以有重叠 (d)一般是人工合成后添加到载体中41在cDNA技术中，所形成的发夹环可用( ) (a)限制性内切核酸酶切除 (b)用3外切核酸酶切除 (c)用S1核酸酶切除 (d)用5外切核酸酶切除42在DNA的酶切反应系统中，通常：( ) (a)用SSC缓冲液 (b)加入Mg2+作辅助因子 (c)加入BSA等保护剂 (d)上述说法中，有两项是正确的43 黏性末端连接法，不仅操作方便，而且( ) (a)产生新切点 (b)易于回收外源片段 (c)载体不易环化 (d)影响外源基因的表达44在下列表型中，( )是基因工

25、程上理想的受体菌表型 (a)r+m+rec* (b)r-m-rec- (C)r-m-rec+ (d)r+m+rec-45关于DNA接头在基因工程中的作用，下列说法中哪一项不正确?( ) (a)给外源DNA添加适当的切点 (b)人工构建载体 (c)调整外源基因的可读框 (d)增加调控元件46cDNA文库包括该种生物的( ) (a)某些蛋白质的结构基因 (b)所有蛋白质的结构基因 (c)所有结构基因 (d)内含子和调控区47下列关于建立cDNA文库的叙述中，哪一项是错误的?( ) (a)从特定组织或细胞中提取DNA或RNA (b)用反转录酶合成mRNA的对应单链DNA (c)以新合成的单链DNA为

26、模板合成双链DNA (d)新合成的双链DNA甲基化 48下列对黏性末端连接法的评价中，哪一项是不正确的? ( ) (a)操作方便 (b)易于回收片段 (c)易于定向重组 (d)载体易于自身环化，降低重组率49关于感受态细胞性质的描述，下面哪一种说法不正确?( ) (功具有可诱导性 (b)具有可转移性 (c)细菌生长的任何时期都可以出现 (d)不同细菌出现感受态的比例是不同的50下面关于用T4多核苷酸激酶标记5 端制备探针的描述中( )是不正确的。 (a)既能标记DNA，又能标记RNA (b)既能标记双链DNA又能标记单链DNA (c)只能标记突出的5 端不能标记其他类型末端 (d)DNA或RN

27、A必须有5-OH的存在51Southem印迹的DNA探针( )杂交。 (a)只与完全相同的片段 (b)可与任何含有相同序列的DNA片段 (c)可与任何含有互补序列的DNA片段 (d)可与用某些限制性内切核酸酶切成的DNA片段 (e)以上都是52 用下列方法进行重组体的筛选，只有( )说明外源基因进行了表达。 (a)Southem印迹杂交 (b)Northem印迹杂交 (c)Western印迹 (d)原位菌落杂交53下列哪一个不是Southern印迹法的步骤?( ) (a)用限制酶消化DNA (a)DNA与载体的连接 (c)用凝胶电泳分离DNA片段 (d)DNA片段转移至硝酸纤维素膜上 (e)用

28、一个标记的探针与膜杂交54 报告基因( ) (a)以其易于分析的编码序列代替感兴趣基因的编码序列 (b)以其易于分析的启动子区代替感兴趣基因的启动子区 (c)能用于检测启动子的活性 (d)能用于确定启动子何时何处有活性55 在利用lacZ失活的显色反应筛选法中，IPTG的作用是( ) (a)诱导宿主的肽的合成 (b)诱导宿主的肽的合成 (c)作为酶的作用底物 (d)作为显色反应的指示剂56. 切口移位是指在( )作用下，使( )带上放射性标记。 (a)DNA聚合酶I，RNA (b)DNA聚合酶I，DNA (c)DNA聚合酶，RNA (d)DNA聚合酶，DNA57用于核酸分子杂交的探针可以是放射

29、性标记的( ) (a)DNA (b)RNA (c)抗体 (d)抗原58Southern印迹是用DNA探针检测DNA片段，而Northern印迹则是：( ) (a)用RNA探针检测DNA片段 (b)用RNA探针检测RNA片段 (c)用DNA探针检测RNA片段 (d)用DNA探针检测蛋白质片段59用免疫化学法筛选重组体的原理是( ) (a)根据外源基因的表达 (b)根据载体基因的表达 (c)根据mRNA同DNA的杂交 (d)根据DNA同DNA的杂交 60随机引物标记探针，下列各项中哪一项是不正确的?( ) (a)双链DNA、单链DNA、RNA都是可以标记的 (b)不需要用Dnase I预处理 (c

30、)反应时可用Klenow酶 (d)反应时可用DNA聚合酶1 61在切口移位标记DNA探针时只能使用( ) (a)Klenow酶 (b)DNA聚合酶I (c)DNA聚合酶 (d)DNA聚合酶 62要对一双链的DNA分子进行3末端标记，可用( ) (a)Klenow酶 (b)DNA聚合酶I (c)T4DNA聚合酶 (d)T7DNA聚合酶答案1c；2c； 3b； 4b 5b，c，d，e； 6c； 7b； 8d；9d； 10a； 11b； 12c； 13c； 14c 15b； 16c；17a；18a；19b；20c；21a；22c； 23a； 24d；25c；26c；27c；28a； 29b；30a；

31、31c； 32a,c,d,e， 33a，b，c；34b； 35c；36c； 37d； 38b；39c；40a；41c； 42a，b，c； 43b； 44b； 45d； 46a；47a； 48c； 49c；50b；51c； 52c； 53b； 54a,c,d；55a； 56b；57a，b； 58c；59a；60d；61b； 62c；三、简答题1说明Sanger DNA测序法的原理。2某学生在用EcoRI切割外源DNA片段时，出现了星号活性，请分析可能的原因?3在序列5-CGAACATATGGAGT-3中含有一个6bp的类限制性内切核酸酶的识别序列，该位点的序列可能是什么?4下面几种序列中你认为哪

32、一个(哪些)最有可能是类酶的识别序列： GAATCG，AAATTT， GATATC， ACGGCA? 为什么?5当两种限制性内切核酸酶的作用条件不同时，若要进行双酶切，应采取什么措施?为什么?6套嵌引物7同尾酶8载体 9质粒10穿梭质粒载体11目的基因12文库的查询13免疫化学检测法 14无细胞翻译系统15柯斯克隆16 简述以黏粒为载体构建基因文库的原理。17 酵母人工染色体要在酵母细胞中稳定存在，必须有哪些基本的结构?18 何谓YAC? 主要特性是什么? 19 Muller的PCR反应同大肠杆菌体内的DNA复制有哪些不同?你认为根本的差别在 哪里?20欲将一真核生物的结构基因克隆后转移到原核

33、生物(如Ecoli)中进行表达，克隆时应 注意哪些问题?21假定你分离到一个Ecoli的Thy- 突变体，并推测有可能是ThyA基因突变。请设计 一个方案用PCR从染色体DNA扩增突变的ThyA基因，测定突变的序列。(注：Ecoli 野生型的ThyA基因的序列是已知的)22 你在做Southern印迹分析，并且刚完成了凝胶电泳这一步。根据方案，下面一步骤 是用NaOH溶液浸泡凝胶，使DNA变性为单链。为了节省时间，你略过了这一步， 直接将DNA从凝胶转至硝酸纤维素膜上。然后用标记探针杂交，最后发现放射自 显影片是空白。错在哪里?23切口移位(nick translation)标记探针的主要步骤

34、有哪些?24用EcoRI和Hind 分别切割同一来源的染色体DNA，并进行克隆，在前者的克隆 中筛选到A基因，但在后者的克隆中未筛选到A基因，请说明原因。25什么是Western印迹?它与Southern印迹有什么不同?26用一限制性内切核酸酶切割Lac+ Tet+的质粒载体，已知该酶识别的是4个碱基序列， 并产生有两个碱基突出的单链末端，该酶在lac基因内有切割位点，并在第二个氨基 酸密码子内，该位点可以被任何氨基酸所取代而不影响酶活性。用该酶切割后，用 DNA聚合酶将单链末端补齐为双链的平末端，然后重新连接成环，转化Lac- Tets受体菌，筛选Tetr转化子，问：Lac的基因型是什么?并

35、说明原因。27在基因工程中，为了在细菌细胞中表达真核生物的基因产物，为什么通常要用cDNA 而不用基因组DNA?为什么要在cDNA前加上细菌的启动子?答案 1 答： Sanger DNA测序法是建立在两个基本原理之上：(1)核酸是依赖于模板在聚合酶的 作用下由5端向3端聚合(DNA聚合酶参与了细菌修复DNA合成过程)；(2)可延 伸的引物必须能提供游离的3羟基末端，双脱氧核苷酸由于缺少游离的3羟基末 端，因此会终止聚合反应的进行。如果分别用4种双脱氧核苷酸终止反应，则会获 得4组长度不同的DNA片段。通过比较所有DNA片段的长度可以得知核苷酸的 序列。 2 答： 盐离子浓度不对，温度不对，甘油浓度过高。 3 答： 回文序列是：5-CATATG-3， 4 答： GATATC；AAATTT，因为它们是回文序列。5答： 注意星活性，先低盐，后高盐；先低温酶，后