基因工程原理练习题及其答案.doc

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1、基因工程原理练习题及其答案一、填空题1 基因工程是_年代发展起来的遗传学的一个分支学科。2 基因工程的两个基本特点是: (1)_,(2)_。3 基因克隆中三个基本要点是:_;_和_。4碱裂解提取溶液I中的葡萄糖的作用_、_、_。5同一质粒不同构型在电泳过程中迁移速率为 。6部分酶切可采取的措施有:(1)_(2)_ (3)_等。7第一个分离的限制性内切核酸酶是_;而第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是_。8限制性内切核酸酶BsuRI和Hae的来源不同,但识别的序列都是_,它们属于_。9DNA聚合酶I的Klenow大片段是用_切割DNA聚合酶I得到的分子量为76kDa的大片段,具有两种酶活性:

2、 (1)_; (2)_的活性。10为了防止DNA的自身环化,可用_去双链DNA_。11EGTA是_离子螯合剂。12测序酶是修饰了的T7 DNA聚合酶,它只有_酶的活性,而没有_酶的活性。13切口移位(nick translation)法标记DNA的基本原理在于利用_的_和_的作用。14欲将某一具有突出单链末端的双链DNA分子转变成平末端的双链形式,通常可采用_或_。15反转录酶除了催化DNA的合成外,还具有_的作用,可以将DNA- RNA杂种双链中的_水解掉。16基因工程中有3种主要类型的载体: _、_、_。17就克隆一个基因(DNA片段)来说,最简单的质粒载体也必需包括三个部分:_、_、_。

3、另外,一个理想的质粒载体必须具有低分子量。 18琼脂糖凝胶的分辨力与胶浓度的关系是 。19如果改变反应条件就会影响酶的专一性和切割效率,称为_。20影响限制性内切酶活性的因素_、_、_、_。21连接反应的实用温度为_。22pUCl8质粒是目前使用较为广泛的载体。pUC系列的载体是通过 和 两种质粒改造而来。它的复制子来自 ,Amp 抗性基因则是来自 。23噬菌体之所以被选为基因工程载体,主要有两方面的原因:一是 ; 二是 。24 野生型的M13不适合用作基因工程载体,主要原因是 和 。25 黏粒(cosmid)是质粒噬菌体杂合载体,它的复制子来自 、COS位点序列来自 ,最大的克隆片段达到 k

4、b。26 野生型的l噬菌体DNA不宜作为基因工程载体,原因是:(1) (2) (3) 。27噬菌粒是由质粒和噬菌体DNA共同构成的,其中来自质粒的主要结构是 ,而来自噬菌体的主要结构是 。28l噬菌体载体由于受到包装的限制,插入外源DNA片段后,总的长度应在噬菌体基 因组的 的范围内。29 在分离DNA时要使用金属离子螯合剂,如EDTA和柠檬酸钠等,其目的是 。30 用乙醇沉淀DNA时,通常要在DNA溶液中加人单价的阳离子,如NaCl和NaAc, 其目的是 。31 引物在基因工程中至少有4个方面的用途:(1) (2) (3) (4) 。32Clark发现用Taq DNA聚合酶得到的PCR反应产

5、物不是平末端,而是有一个突出 碱基末端的双链DNA分子。根据这一发现设计了克隆PCR产物的 。33在cDNA的合成中要用到S1核酸酶,其作用是切除在 。34乙醇沉淀DNA的原理是 。35 假定克隆一个编码某种蛋白质的基因,必须考虑其表达的三个基本条件: (1)_ (2)_ (3)_。36 受体细胞的感受态是_。37 DNA重组连接的方法大致分为四种:(1)_(2)_ (3)_(4)_。38 将含有外源基因组一个酶切片段的质粒称之为含有一个_,各种此类质 粒的集合体称之为构建了一个_。39将含有一个mRNA的DNA拷贝的克隆称作一个_,源于同一批RNA制备 物的克隆群则构建了一个_。40只要知道

6、基因组中某一特定区域的部分核苷酸组成,用_可以将这段DNA 进行百万倍的扩增。41人工感受态的大肠杆菌细胞在温度为_时吸附DNA, _时摄人DNA。42目前,在重组体的筛选中,已经发展了许多构思巧妙、具有极高准确性的筛选方法。 大致可以分为: (1)_(2)_(3)_ (4)_等。43PCR扩增筛选重组体是比较简便的筛选方法,它适合于_。44 核酸杂交探针可分为两大类: DNA探针和RNA探针。其中DNA探针又分为_ 探针和_探针。45RNaseH的活性为_ 。46第一个用于基因克隆的天然质粒 。47噬菌粒载体的包装需要_的帮助下才能完成。48cDNA文库的特点: 、 、 、 。49用_处理大

7、肠杆菌,能增加膜的通透性。50在_技术中,DNA限制性片段经凝胶电泳分离后,被转移到硝酸纤维素膜(或尼龙膜)上,然后与放射性的DNA探针杂交。51可用T4 DNA聚合酶进行平末端的DNA标记,因为这种酶具有_和_的活性。52根据外源片段提供的遗传表型筛选重组体,必需考虑三种因素: (1)_ (2)_(3)_。53Northern印迹和Southern印迹有两点根本的区别: (1)_ (2)_。54外源基因导入植物细胞的方法有: 。答案1702(1)分子水平上的操作;(2)细胞水平上的表达3克隆基因的类型;受体的选择;载体的选择4增加溶液的粘度,维持渗透压,防止DNA受机械力(震荡)的作用而降解

8、5超螺旋大于线性大于开环。6(1)减少酶量;(2)缩短反应时间;(3)增大反应体积7EcoK;EcoRl8GGCC;异源同工酶9 枯草杆菌蛋白酶;(1)5-3合成酶的活性;(2)3-5外切核酸酶10碱性磷酸酶;5端的磷酸基团11 Ca2+12 5-3合成; 3-5外切13 DNA聚合酶I:5一3外切核酸酶;5一3合成酶14S1核酸酶切割;DNA聚合酶补平15核酸水解酶H;RNA16 质粒DNA;病毒DNA;质粒和病毒DNA杂合体17 复制区: 含有复制起点;选择标记: 主要是抗性基因;克隆位点: 便于外源DNA的插入18 正比19, 星号(*)活性20 DNA的纯度、 DNA的甲基化程度 、

9、 温度、缓冲液(Buffer) 21. 416 C22 pBR322和M13;pMBl;转座子23 它在细菌中能够大量繁殖,这样有利于外源DNA的扩增;对某些噬菌体(如l噬菌)的遗传结构和功能研究得比较清楚,其大肠杆菌宿主系统的遗传也研究得比较详尽 24 没有合适的限制性内切核酸酶识别位点;选择标记25质粒;l噬菌体; 4526 (1)分子量大,(2)酶的多切点,(3)无选择标记27复制区; IG区287510529 螯合Mg2+离子,抑制核酸酶的活性30 中和DNA分子的负电荷,增加DNA分子间的凝聚力31(1)合成探针;(2)合成cDNA;(3)用于PCR反应;(4)进行序列分析32T载体

10、33第二链合成时形成的发夹环34乙醇使DNA分子脱水35(1)保持正确的可读框 (2)能够使其转录的启动子 (3)具有翻译的起始和终止信号36接受外源DNA的生理状态37(1)黏性末端连接; (2)平末端连接; (3)同聚物接尾连接; (4)接头连接法38 基因组DNA克隆; 基因组DNA文库39cDNA克隆;cDNA文库40聚合酶链式反应(PCR)410C;42C42(1)遗传学方法; (2)物理筛选法; (3)核酸杂交法; (4)表达产物分析法43插入外源片段的种类较多,大小又极为相似的重组体的筛选44基因组DNA;cDNA4553或35方向特异地水解RNA-DNA杂交双链中的RNA链46

11、pSC10147辅助噬菌体48(1)不含内含子序列。(2)可以在细菌中直接表达。 (3)包含了所有编码蛋白质的基因。 (4)比DNA文库小的多,容易构建49CaCl250Southern印迹5153合成酶;3 5外切核酸酶52(1)克隆的是完整的基因;(2)使用的是表达载体;(3)不含内含子53(1)印迹的对象不同:Northern是RNA,Southern是DNA;(2)电泳条件不同,前者是变性条件,后者是非变性条件54叶盘法、电击法、基因枪法二、选择题(单选或多选)1 因研究重组DNA技术而获得诺贝尔奖的科学家是( ) (a)AKornberg (b)WGilbert (c)PBerg (

12、d)BMcClintock2 第一个作为重组DNA载体的质粒是( ) (a)pBR322 (b)ColEl (c)pSCl01 (d)pUCl83 关于宿主控制的限制修饰现象的本质,下列描述中只有( )不太恰当。 (a)由作用于同一DNA序列的两种酶构成 (b)这一系统中的核酸酶都是类限制性内切核酸酶 (c)这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA进行修饰 (d)不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统4型限制性内切核酸酶: ( ) (a)有内切核酸酶和甲基化酶活性且经常识别回文序列 (b)仅有内切核酸酶活性,甲基化酶活性由另外一种酶提供 (c)限制性识别非甲基化的核苷酸序列 (d)有外切

13、核酸酶和甲基化酶活性 (e)仅有外切核酸酶活性,甲基化酶活性由另外一种酶提供5下面有关限制酶的叙述哪些是正确的?( ) (a)限制酶是外切酶而不是内切酶 (b)限制酶在特异序列(识别位点)对DNA进行切割 (c)同一种限制酶切割DNA时留下的末端序列总是相同的 (d)一些限制酶在识别位点内稍有不同的点切割双链DNA,产生黏末端 (e)一些限制酶在识别位点内相同的位置切割双链DNA,产生平末端6第一个被分离的类酶是: ( ) (a)EcoK (b)Hind (c)Hind (d)EcoB7在下列进行DNA部分酶切的条件中,控制那一项最好?( ) (a)反应时间 (b)酶量 (c)反应体积 (d)

14、酶反应的温度8在下列试剂中,那一种可以螯合Ca2+离子?( ) (a)EDTA (b)柠檬酸钠 (c)SDS (d)EGTA9在下列工具酶中,那一种可以被EGTA抑制活性?( )(a)S1单链核酸酶 (b)末端转移酶 (c)碱性磷酸酶 (d)Bal 31核酸酶10.限制性核酸内切酶切割DNA后产生 ( )(a)5磷酸基和3羟基基团的末端 (b) 5磷酸基和3磷酸基团的末端 (c) 5羟基和3羟基基团的末端 (d) 3磷酸基和5羟基基团的末端 (e) 以上都不是 11. 可识别并切割特异DNA序列的酶是 ( )(a) 非限制性核酸外切酶 (b) 限制性核酸内切酶 (c) 限制性核酸外切酶 (d)

15、 非限制性核酸内切酶 (e) DNA酶12. 克隆所依赖的DNA载体的最基本性质是 ( )(a)卡那霉素抗性 (b) 青霉素抗性 (c) 自我复制能力 (d)自我表达能力 (e) 自我转录能力 13下列哪种克隆载体对外源DNA的容载量最大? ( )(a)质粒 (b).黏粒 (c)酵母人工染色体(YAC) (d).l噬菌体 (e) cDNA表达载体14关于cDNA的最正确的说法是:( )(a)同mRNA互补的单链DNA (b)同mRNA互补的双链DNA (c).以mRNA为模板合成的双链DNA (d)以上都正确15关于感受态细胞性质的描述,下面哪一种说法不正确? ( )(a)功具有可诱导性 (b

16、)细菌生长的任何时期都可以出现 (c)具有可转移性 (d)不同细菌出现感受态的比例是不同的16Southem印迹的DNA探针( )杂交。(a)只与完全相同的片段 (b)可与任何含有相同序列的DNA片段 (c)可与任何含有互补序列的DNA片段(d)可与用某些限制性内切核酸酶切成的DNA片段 (e).以上都是17在利用lacZ失活的显色反应筛选法中,IPTG的作用是( )(a)诱导宿主的肽的合成 (b)诱导宿主的肽的合成(c)作为酶的作用底物 (d)作为显色反应的指示剂18用免疫化学法筛选重组体的原理是( )(a)根据外源基因的表达 (b)根据载体基因的表达(c)根据mRNA同DNA的杂交 (d)

17、根据DNA同DNA的杂交19. 在基因工程中,DNA重组体是指 ( )(a) 不同来源的两段DNA单链的复性 (b) 目的基因与载体的连接物(c)不同来源的DNA分子的连接物 (d)原核DNA与真核DNA的连接物(e)两个不同的结构基因形成的连接物20. 重组DNA的筛选与鉴定不包括哪一方法 ( )(a)限制酶酶切图谱鉴定 (b). PCR扩增鉴定(c) 显微注射 (d) 蓝白筛选(e)抗药筛选21. 下面关于多克隆位点(multipleclonesite,MCS)的描述,不正确的句是( )(a)仅位于质粒载体中 (b)具有多种酶的识别序列(c)不同酶的识别序列可以有重叠 (d)一般是人工合成

18、后添加到载体中 22. 在cDNA技术中,所形成的发夹环可用( )(a)限制性内切核酸酶切除 (b)用31外切核酸酶切除 (c)用S1核酸酶切除 (d)用51外切核酸酶切除23. 下列对逆转录酶描述正确的是:( )(a)依赖于RNA的DNA聚合酶或称为RNA指导的DNA聚合酶(b)依赖于cDNA的DNA聚合酶或称为cDNA指导的DNA聚合酶(c)依赖于DNA的DNA聚合酶或称为DNA指导的DNA聚合酶(d) 依赖于RNA的RNA聚合酶或称为rNA指导的RNA聚合酶24. T 4 -DNA 连接酶是通过形成磷酸二酯键将两段 DNA 片段连接在一起,其底物的关键基团是( )(a)2 -OH 和 5

19、 P (b)2 -OH 和 3 P (c) 3 -OH 和 2 P (d) 3 -OH 和 5 -P25. 下列哪一种酶作用时需要引物? ( ) (a) 限制酶 (b)末端转移酶 (c) 反转录酶 (d) DNA连接酶26. 用下列方法进行重组体的筛选,只有( )说明外源基因进行了表达。 (a) Southem印迹杂交 (b)Northem印迹杂交 (c) Western印迹 (d) 原位菌落杂交27. Klenow酶与DNA聚合酶相比,前者丧失了( )的活性。 (a) 5,-3,合成酶, (b) 3,-5,外切酶 (c) 5,-3,外切酶 (d) 转移酶28. 在下列进行DNA部分酶切的条件

20、中,控制那一项最好? ( ) (a) 反应时间 (b) 酶量 (c)反应体积 (d)酶反应的温度29. 黏性末端连接法,不仅操作方便,而且( ) (a) 产生新切点 (b)易于回收外源片段 (c) 载体不易环化 (d) 影响外源基因的表达30能够用来克隆32kb以下大小的外源片段的质粒载体是( ) (a)charomid (b)plasmid (C)cosmid (d)phagemid31第一个作为重组DNA载体的质粒是( ) (a)pBR322 (b)ColEl (c)pSCl01 (d)pUCl832. Ti质粒:( ) (a)可从农杆菌转到植物细胞中 (b)作为双链DNA被转移 (c)在

21、植物中导致肿瘤 (d)介导冠瘿碱的合成,作为细菌的营养物和植物的生长激素 (e)需要细菌的vir基因帮助转移 (f)在植物细胞中作为染色体外质粒33黏粒(cosmid)是一种人工建造的载体,( ) (a)它具有COS位点,因而可进行体外包装 (b)它具有质粒DNA的复制特性 (c)进入受体细胞后,可引起裂解反应 (d)进入受体细胞后,可引起溶源化反应34有两种确定核酸中核苷酸序列的方法:化学序列分析法(Maxam-Glbert)和酶学序列分析法(Sanger)。酶学测序法的基本原理优点是:( ) (a)碱基与特殊染料间不同的相互作用 (b)一个合成引物的延伸和DNA修复合成的可靠终止 (c)限

22、制性位点与DNA末端标记的相关性 (d)可同时对DNA双螺旋的两条链进行测序 (e)反应是DNA特异的,RNA不会带来干扰。这样既减少纯化步骤,也节约了开支。35关于cDNA的最正确的说法是:( ) (a)同mRNA互补的单链DNA (b)同mRNA互补的双链DNA (c)以mRNA为模板合成的双链DNA (d)以上都正确36用碱法分离质粒DNA时,染色体DNA之所以可以被除去,是因为:( ) (a)染色体DNA断成了碎片 (b)染色体DNA分子量大,而不能释放 (c)染色体变性后来不及复性 (d)染色体未同蛋白质分开而沉淀37. 关于碱解法分离质粒DNA,下面哪一种说法不正确?( ) (a)

23、溶液I的作用是悬浮菌体 (b)溶液的作用是使DNA变性 (c)溶液的作用是使DNA复性 (d)质粒DNA分子小,所以没有变性,染色体变性后不能复性38. Clark做了一个有趣的实验,发现TaqDNA聚合酶可以不需要模板,在双链DNA的 末端加一个碱基,主要是加( ) (a)dGTP (b)dATP (c)dCTP (d)dTTP39根据构建方法的不同,基因文库分为基因组文库、cDNA文库等。在下列文库中, ( )属cDNA文库 (a) YAC文库 (b) MAC文库 (c) 扣减文库 (d) BAC文库40下面关于多克隆位点(multiple clone site,MCS)的描述,不正确的句

24、是( ) (a)仅位于质粒载体中 (b)具有多种酶的识别序列 (c)不同酶的识别序列可以有重叠 (d)一般是人工合成后添加到载体中41在cDNA技术中,所形成的发夹环可用( ) (a)限制性内切核酸酶切除 (b)用3外切核酸酶切除 (c)用S1核酸酶切除 (d)用5外切核酸酶切除42在DNA的酶切反应系统中,通常:( ) (a)用SSC缓冲液 (b)加入Mg2+作辅助因子 (c)加入BSA等保护剂 (d)上述说法中,有两项是正确的43 黏性末端连接法,不仅操作方便,而且( ) (a)产生新切点 (b)易于回收外源片段 (c)载体不易环化 (d)影响外源基因的表达44在下列表型中,( )是基因工

25、程上理想的受体菌表型 (a)r+m+rec* (b)r-m-rec- (C)r-m-rec+ (d)r+m+rec-45关于DNA接头在基因工程中的作用,下列说法中哪一项不正确?( ) (a)给外源DNA添加适当的切点 (b)人工构建载体 (c)调整外源基因的可读框 (d)增加调控元件46cDNA文库包括该种生物的( ) (a)某些蛋白质的结构基因 (b)所有蛋白质的结构基因 (c)所有结构基因 (d)内含子和调控区47下列关于建立cDNA文库的叙述中,哪一项是错误的?( ) (a)从特定组织或细胞中提取DNA或RNA (b)用反转录酶合成mRNA的对应单链DNA (c)以新合成的单链DNA为

26、模板合成双链DNA (d)新合成的双链DNA甲基化 48下列对黏性末端连接法的评价中,哪一项是不正确的? ( ) (a)操作方便 (b)易于回收片段 (c)易于定向重组 (d)载体易于自身环化,降低重组率49关于感受态细胞性质的描述,下面哪一种说法不正确?( ) (功具有可诱导性 (b)具有可转移性 (c)细菌生长的任何时期都可以出现 (d)不同细菌出现感受态的比例是不同的50下面关于用T4多核苷酸激酶标记5 端制备探针的描述中( )是不正确的。 (a)既能标记DNA,又能标记RNA (b)既能标记双链DNA又能标记单链DNA (c)只能标记突出的5 端不能标记其他类型末端 (d)DNA或RN

27、A必须有5-OH的存在51Southem印迹的DNA探针( )杂交。 (a)只与完全相同的片段 (b)可与任何含有相同序列的DNA片段 (c)可与任何含有互补序列的DNA片段 (d)可与用某些限制性内切核酸酶切成的DNA片段 (e)以上都是52 用下列方法进行重组体的筛选,只有( )说明外源基因进行了表达。 (a)Southem印迹杂交 (b)Northem印迹杂交 (c)Western印迹 (d)原位菌落杂交53下列哪一个不是Southern印迹法的步骤?( ) (a)用限制酶消化DNA (a)DNA与载体的连接 (c)用凝胶电泳分离DNA片段 (d)DNA片段转移至硝酸纤维素膜上 (e)用

28、一个标记的探针与膜杂交54 报告基因( ) (a)以其易于分析的编码序列代替感兴趣基因的编码序列 (b)以其易于分析的启动子区代替感兴趣基因的启动子区 (c)能用于检测启动子的活性 (d)能用于确定启动子何时何处有活性55 在利用lacZ失活的显色反应筛选法中,IPTG的作用是( ) (a)诱导宿主的肽的合成 (b)诱导宿主的肽的合成 (c)作为酶的作用底物 (d)作为显色反应的指示剂56. 切口移位是指在( )作用下,使( )带上放射性标记。 (a)DNA聚合酶I,RNA (b)DNA聚合酶I,DNA (c)DNA聚合酶,RNA (d)DNA聚合酶,DNA57用于核酸分子杂交的探针可以是放射

29、性标记的( ) (a)DNA (b)RNA (c)抗体 (d)抗原58Southern印迹是用DNA探针检测DNA片段,而Northern印迹则是:( ) (a)用RNA探针检测DNA片段 (b)用RNA探针检测RNA片段 (c)用DNA探针检测RNA片段 (d)用DNA探针检测蛋白质片段59用免疫化学法筛选重组体的原理是( ) (a)根据外源基因的表达 (b)根据载体基因的表达 (c)根据mRNA同DNA的杂交 (d)根据DNA同DNA的杂交 60随机引物标记探针,下列各项中哪一项是不正确的?( ) (a)双链DNA、单链DNA、RNA都是可以标记的 (b)不需要用Dnase I预处理 (c

30、)反应时可用Klenow酶 (d)反应时可用DNA聚合酶1 61在切口移位标记DNA探针时只能使用( ) (a)Klenow酶 (b)DNA聚合酶I (c)DNA聚合酶 (d)DNA聚合酶 62要对一双链的DNA分子进行3末端标记,可用( ) (a)Klenow酶 (b)DNA聚合酶I (c)T4DNA聚合酶 (d)T7DNA聚合酶答案1c;2c; 3b; 4b 5b,c,d,e; 6c; 7b; 8d;9d; 10a; 11b; 12c; 13c; 14c 15b; 16c;17a;18a;19b;20c;21a;22c; 23a; 24d;25c;26c;27c;28a; 29b;30a;

31、31c; 32a,c,d,e, 33a,b,c;34b; 35c;36c; 37d; 38b;39c;40a;41c; 42a,b,c; 43b; 44b; 45d; 46a;47a; 48c; 49c;50b;51c; 52c; 53b; 54a,c,d;55a; 56b;57a,b; 58c;59a;60d;61b; 62c;三、简答题1说明Sanger DNA测序法的原理。2某学生在用EcoRI切割外源DNA片段时,出现了星号活性,请分析可能的原因?3在序列5-CGAACATATGGAGT-3中含有一个6bp的类限制性内切核酸酶的识别序列,该位点的序列可能是什么?4下面几种序列中你认为哪

32、一个(哪些)最有可能是类酶的识别序列: GAATCG,AAATTT, GATATC, ACGGCA? 为什么?5当两种限制性内切核酸酶的作用条件不同时,若要进行双酶切,应采取什么措施?为什么?6套嵌引物7同尾酶8载体 9质粒10穿梭质粒载体11目的基因12文库的查询13免疫化学检测法 14无细胞翻译系统15柯斯克隆16 简述以黏粒为载体构建基因文库的原理。17 酵母人工染色体要在酵母细胞中稳定存在,必须有哪些基本的结构?18 何谓YAC? 主要特性是什么? 19 Muller的PCR反应同大肠杆菌体内的DNA复制有哪些不同?你认为根本的差别在 哪里?20欲将一真核生物的结构基因克隆后转移到原核

33、生物(如Ecoli)中进行表达,克隆时应 注意哪些问题?21假定你分离到一个Ecoli的Thy- 突变体,并推测有可能是ThyA基因突变。请设计 一个方案用PCR从染色体DNA扩增突变的ThyA基因,测定突变的序列。(注:Ecoli 野生型的ThyA基因的序列是已知的)22 你在做Southern印迹分析,并且刚完成了凝胶电泳这一步。根据方案,下面一步骤 是用NaOH溶液浸泡凝胶,使DNA变性为单链。为了节省时间,你略过了这一步, 直接将DNA从凝胶转至硝酸纤维素膜上。然后用标记探针杂交,最后发现放射自 显影片是空白。错在哪里?23切口移位(nick translation)标记探针的主要步骤

34、有哪些?24用EcoRI和Hind 分别切割同一来源的染色体DNA,并进行克隆,在前者的克隆 中筛选到A基因,但在后者的克隆中未筛选到A基因,请说明原因。25什么是Western印迹?它与Southern印迹有什么不同?26用一限制性内切核酸酶切割Lac+ Tet+的质粒载体,已知该酶识别的是4个碱基序列, 并产生有两个碱基突出的单链末端,该酶在lac基因内有切割位点,并在第二个氨基 酸密码子内,该位点可以被任何氨基酸所取代而不影响酶活性。用该酶切割后,用 DNA聚合酶将单链末端补齐为双链的平末端,然后重新连接成环,转化Lac- Tets受体菌,筛选Tetr转化子,问:Lac的基因型是什么?并

35、说明原因。27在基因工程中,为了在细菌细胞中表达真核生物的基因产物,为什么通常要用cDNA 而不用基因组DNA?为什么要在cDNA前加上细菌的启动子?答案 1 答: Sanger DNA测序法是建立在两个基本原理之上:(1)核酸是依赖于模板在聚合酶的 作用下由5端向3端聚合(DNA聚合酶参与了细菌修复DNA合成过程);(2)可延 伸的引物必须能提供游离的3羟基末端,双脱氧核苷酸由于缺少游离的3羟基末 端,因此会终止聚合反应的进行。如果分别用4种双脱氧核苷酸终止反应,则会获 得4组长度不同的DNA片段。通过比较所有DNA片段的长度可以得知核苷酸的 序列。 2 答: 盐离子浓度不对,温度不对,甘油浓度过高。 3 答: 回文序列是:5-CATATG-3, 4 答: GATATC;AAATTT,因为它们是回文序列。5答: 注意星活性,先低盐,后高盐;先低温酶,后

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