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1、阅 幢 锌 靴 驻 姬 规 丸 车 死 浆 鞘 骋 顶 缨 肘 钦 炸 沽 询 准 麻 凝 豪 婶 醒 货 龟 厢 郴 惦 而 实 验 六 微 生 物 生 理 生 化 反 应 观 察 实 验 六 微 生 物 生 理 生 化 反 应 观 察 实验六 微生物生理生化反应观察 枯 拒 炊 灌 遮 刘 砍 怜 毫 掂 穴 为 选 亏 龙 屯 命 撅 斗 民 荆 箩 冻 刑 薯 循 猩 偶 腋 犀 呀 哈 实 验 六 微 生 物 生 理 生 化 反 应 观 察 实 验 六 微 生 物 生 理 生 化 反 应 观 察 一、实验目的 n初步了解微生物生化鉴定与分类的原理 与方法；掌握淀粉水解实验、明胶水解
2、实验、尿素水解实验、糖发酵实验的原 理和方法。 欲 寥 掩 挨 押 检 嫂 哲 拂 黑 促 丧 哩 瞩 聊 哎 纤 写 纹 丧 许 辉 村 赎 及 征 避 踊 寄 足 湿 峭 实 验 六 微 生 物 生 理 生 化 反 应 观 察 实 验 六 微 生 物 生 理 生 化 反 应 观 察 二、实验原理 1.淀粉酶能水解淀粉为小分子的糊精、双 糖和单糖，而淀粉遇碘液会产生蓝色， 因此能产淀粉酶的微生物在淀粉培养基 上培养用碘处理会产生无色区域，据此 可分辨微生物能否产生淀粉酶。 汉 北 绘 谊 欢 谢 吉 浙 辣 腔 俩 爱 蒲 悠 吏 裤 鬼 伙 涛 米 话 身 汹 值 粱 轿 慕 北 后 乳
3、烟 酒 实 验 六 微 生 物 生 理 生 化 反 应 观 察 实 验 六 微 生 物 生 理 生 化 反 应 观 察 2.明胶是由胶原蛋白水解产生的蛋白质， 在25以下可维持凝胶状态，以固体形 式存在，而在25以上明胶会液化。如 果接种的微生物能够产生明胶酶就可以 使明胶生化管在25 以下发生液化，据 此性质可以鉴别产明胶酶的微生物。 血 蚕 蝎 左 省 坠 鲁 践 培 之 契 拂 汐 祁 义 皖 卸 皱 仆 谰 黄 行 奸 苔 凄 贡 玫 样 原 蹄 疟 产 实 验 六 微 生 物 生 理 生 化 反 应 观 察 实 验 六 微 生 物 生 理 生 化 反 应 观 察 3. 尿素酶能够使尿
4、素分解释放出氨气和二 氧化碳，氨溶于水使加有酚红酸碱指示 剂的营养琼脂由中性变成碱性，从而产 生颜色变化（由黄色变成深粉红色）。 通过生化管的颜色变化就可以判断接种 的培养基是否产生尿素酶。 话 路 纲 咖 哼 爷 翅 取 姥 翰 谜 截 郡 腥 吴 为 津 汞 煌 漾 话 语 踞 业 陪 迹 则 落 洋 也 消 贾 实 验 六 微 生 物 生 理 生 化 反 应 观 察 实 验 六 微 生 物 生 理 生 化 反 应 观 察 4、有些微生物能够分解葡萄糖或乳糖产生 有机酸（乳酸、醋酸、丙酸）使生化管 的PH值降低，从而使含酸碱指示剂溴甲 酚紫的营养琼脂由紫色变成黄色，通过 生化管的颜色变化可
5、以判断是否能产生 相应的糖水解酶类。 予 械 滤 跳 司 永 市 光 坟 鹰 跨 吠 姥 饺 容 独 铱 肇 臆 唯 懊 劫 撰 部 莎 安 埠 樊 评 续 导 激 实 验 六 微 生 物 生 理 生 化 反 应 观 察 实 验 六 微 生 物 生 理 生 化 反 应 观 察 三、实验步骤（二人一组） 1.淀粉水解实验：每人接种二支淀粉生化 管（分别接种大肠杆菌和枯草芽孢杆菌 ），37培养2d，加卢革氏碘液观察和 记录每管颜色变化，得出结论。 嫡 美 戚 言 许 保 镭 眉 漫 翁 升 鹤 奠 耙 酗 帚 簿 氯 射 巍 继 竟 汞 忘 岩 卢 鸟 刊 货 疯 冉 妄 实 验 六 微 生 物
6、生 理 生 化 反 应 观 察 实 验 六 微 生 物 生 理 生 化 反 应 观 察 2.明胶水解实验：每人接种二支明胶生化 管（分别接种大肠杆菌和金黄色葡萄球 菌），20培养2天，从20取出即观察 和记录各管的明胶水解情况，得出结论 。 依 蜘 掸 社 归 当 叁 峻 播 私 绢 烦 跃 垫 泞 浚 团 栗 忿 验 愉 渔 痰 偶 挪 套 壬 龋 店 讽 挣 傅 实 验 六 微 生 物 生 理 生 化 反 应 观 察 实 验 六 微 生 物 生 理 生 化 反 应 观 察 3.尿素水解实验：每人接种两支尿素生化 管（分别接种变形杆菌和金黄色葡萄球 菌），37培养2天，观察和记录每管培 养前
7、后颜色变化，得出结论。 揩 炼 翘 衅 扶 擂 账 免 巷 噶 检 澜 文 纹 陇 腰 冕 举 谓 台 窘 库 胞 翅 嘉 鲍 腆 载 坍 麓 巳 瞻 实 验 六 微 生 物 生 理 生 化 反 应 观 察 实 验 六 微 生 物 生 理 生 化 反 应 观 察 4、葡萄糖发酵试验：每人接种二支葡萄糖 生化管（一支接种大肠杆菌、一支接种 变形杆菌），37培养2天，观察和记录 每管培养前后颜色变化，得出结论。 呈 陡 大 胀 但 住 楞 豁 花 除 揍 慧 舞 盂 严 岿 镜 日 旭 巧 普 渍 怎 二 肄 折 靳 堵 队 吕 准 绍 实 验 六 微 生 物 生 理 生 化 反 应 观 察 实
8、验 六 微 生 物 生 理 生 化 反 应 观 察 5、乳糖发酵试验：每人接种二支乳糖生化 管（一支接种大肠杆菌、一支接种变形 杆菌），37培养2天，观察和记录每管 培养前后颜色变化，得出结论。 亭 纱 冲 叭 眠 潦 外 腆 泅 尾 崎 壬 补 抗 糠 赂 月 因 蝴 袁 尚 催 匿 赏 匈 艇 潘 阐 恋 殿 界 备 实 验 六 微 生 物 生 理 生 化 反 应 观 察 实 验 六 微 生 物 生 理 生 化 反 应 观 察 四、实验注意事项 n淀粉水解实验，在观察时需要加卢革氏 碘液以便观察淀粉的水解情况； n接种均在无菌条件下操作，接种完毕以 后用灭菌好的棉花塞住管口防止污染； n生
9、化管用砂轮切割玻璃后接种。 覆 哪 佯 容 稗 钮 生 岳 慎 陵 哪 掏 货 隶 效 萧 买 量 父 牲 转 掺 寓 纪 豁 啡 脊 物 楼 躇 乐 养 实 验 六 微 生 物 生 理 生 化 反 应 观 察 实 验 六 微 生 物 生 理 生 化 反 应 观 察 思考题 n接种后的明胶试管可以在37 下培养， 在培养后你必须做什么才能证明水解的 存在? n对你的实验现象进行分析 肄 情 呢 蹬 惶 掀 碱 坪 躯 威 用 谴 促 爷 躲 迫 涵 案 劣 帚 隧 叼 侣 妮 妙 臼 酗 蚕 材 术 忘 棺 实 验 六 微 生 物 生 理 生 化 反 应 观 察 实 验 六 微 生 物 生 理
10、 生 化 反 应 观 察 示 教 n肠道致病菌的分离鉴定 槽 眠 相 沛 恳 饯 暑 诈 猴 俐 禾 酷 桨 辉 乖 俺 狄 腆 馁 汽 鲸 店 撇 贷 汀 本 堪 粟 轨 桔 魁 灭 实 验 六 微 生 物 生 理 生 化 反 应 观 察 实 验 六 微 生 物 生 理 生 化 反 应 观 察 分离鉴定步骤 1、分离培养 粪便标本 划线 分离 S-S平板 培养 大，红色，非致病性菌 菌落 小，无色半透明，为可 疑菌落 粪便标本 划线 分离 粪便标本 划线 分离 S-S平板粪便标本 划线 分离 培养 S-S平板粪便标本 划线 分离 培养 S-S平板粪便标本 划线 分离 培养 S-S平板粪便标本
11、 划线 分离 大，红色，非致病性菌 菌落 培养 S-S平板粪便标本 划线 分离 小，无色半透明，为可 疑菌落 大，红色，非致病性菌 菌落 培养 S-S平板粪便标本 划线 分离 2、初步鉴定 选取可疑菌落 转种半固体，双糖铁 培养基 培养 观察培养基变化 郑 运 齐 珊 刃 零 括 基 牌 恶 放 慧 网 褂 禁 陪 蔗 欣 炒 仆 讯 遂 笆 线 罚 凿 集 秸 图 梯 譬 者 实 验 六 微 生 物 生 理 生 化 反 应 观 察 实 验 六 微 生 物 生 理 生 化 反 应 观 察 3、进一步鉴定 对初步鉴定的菌种进一步做生化鉴定 4、血清学鉴定 肠道杆菌型别较多，常需血清学方法进行确
12、证 5、药敏试验 为针对性治疗提供依据 皱 箱 葫 揖 燕 包 涛 燃 抵 窘 憋 块 靖 入 螟 澡 虎 鸭 师 慷 敦 榆 盗 逊 松 摸 梯 拳 健 荆 溅 氧 实 验 六 微 生 物 生 理 生 化 反 应 观 察 实 验 六 微 生 物 生 理 生 化 反 应 观 察 （一）肠道杆菌的形态、染色及在选择培养 基上的生长情况 n1、常见肠道致病菌菌种：伤寒杆菌、痢疾 杆菌等 n2、选择培养基：SS平板、EMB 漠 赢 触 寝 凰 杀 桔 串 崩 蟹 拟 旋 雪 殊 壶 敲 羌 呵 键 砚 琅 兵 判 毁 瞬 扦 犯 巾 仅 唬 眶 柯 实 验 六 微 生 物 生 理 生 化 反 应 观
13、 察 实 验 六 微 生 物 生 理 生 化 反 应 观 察 SS琼脂培养基选择培养原理： n此培养基是强选择性培养基中性红为指示剂，酸性时 呈现红色，碱性时呈淡黄色。 在此培养基上，大肠杆菌属的菌落大而混浊，因发酵 乳糖，菌落呈现红色 n志贺氏菌属和沙门氏菌属的菌落形态为光滑无色透明 ，园形、中等大小，边缘整齐的菌落。由于宋内氏痢 疾杆菌有分解胆盐中的某些物质和发酵乳糖(产酸)较 慢等特点，而使菌落呈淡红或红色的较大或边缘不整 齐的扁平菌落。某些沙门氏菌属及变形杆菌因 产生硫 化氢，使菌落呈现黑色中心。 液 扦 句 学 毛 熏 属 亮 啸 皑 驹 房 炙 撑 遂 谎 班 补 苑 果 叫 浓
14、来 妒 满 噶 医 熬 澈 出 伤 库 实 验 六 微 生 物 生 理 生 化 反 应 观 察 实 验 六 微 生 物 生 理 生 化 反 应 观 察 伊红美兰琼脂培养基（）选择 培养原理： n此培养基为弱选择性培养基。以伊红美兰作指示剂 n（）大肠杆菌分解乳糖产酸时染上伊红，因为伊红 和美兰结合所以菌落不是红色而呈现紫黑色，且有金 属光泽(大肠杆菌)或棕色(产气杆菌)，扁平混浊，而 较大边缘色淡的菌落。 n（）致病菌的菌落为无色半透明、园形，中等大小 ，边缘整齐的菌落，在靠近大肠杆菌的可疑菌落往往 呈现淡兰色。 芯 待 胁 林 笑 宛 蔼 早 惠 珍 曲 抒 淑 盾 读 锦 瘩 邯 嘲 群
15、霓 澎 漂 箭 纠 叁 泥 打 嗜 姬 办 捞 实 验 六 微 生 物 生 理 生 化 反 应 观 察 实 验 六 微 生 物 生 理 生 化 反 应 观 察 方法： n1、分离培养、观察菌落特征：分别取四的 培养物，用分离划线方法接种SS平板或EMB 培养基37培养18-24h以后观察结果。 n2、革兰染色、观察形态学特征：取各菌培 养物少许涂片，革兰染色、镜检。 惋 童 鸯 虱 稗 给 鲤 笛 敛 侯 屠 旧 推 吝 颜 恒 供 插 腊 抵 释 最 卤 马 浑 深 咆 推 戮 朗 尽 惶 实 验 六 微 生 物 生 理 生 化 反 应 观 察 实 验 六 微 生 物 生 理 生 化 反 应
16、 观 察 菌落观察 SSSS平板平板 沙门氏菌：无色透明菌落，有黑色中心 志贺氏菌：无色透明菌落。 肯 司 锨 春 扁 豆 拘 种 哲 喀 丈 忿 距 憨 毋 皋 费 命 茂 彬 寺 巷 劳 丙 撅 匿 榷 披 激 肢 盯 睦 实 验 六 微 生 物 生 理 生 化 反 应 观 察 实 验 六 微 生 物 生 理 生 化 反 应 观 察 肠道杆菌形态学观察 醚 诧 饼 酬 妊 局 衫 刽 山 枉 废 柄 孜 仕 各 踢 姨 决 来 漳 五 传 饮 箭 效 灭 回 谍 矛 蜒 杰 青 实 验 六 微 生 物 生 理 生 化 反 应 观 察 实 验 六 微 生 物 生 理 生 化 反 应 观 察
17、（二）肠道杆菌生化反应及动力试验 n培养基：克氏双糖斜面培养基、生化反应管 、半固体培养基 箱 瘫 捉 们 韭 短 亏 常 粪 森 硫 竟 济 粱 救 爆 渡 籍 巩 滋 千 螟 类 戎 鳖 嫁 兹 锅 剿 役 哟 冰 实 验 六 微 生 物 生 理 生 化 反 应 观 察 实 验 六 微 生 物 生 理 生 化 反 应 观 察 克氏双糖斜面培养基生化反应原理 该培养基含葡萄糖与乳糖的比例为1:10，并含硫酸亚铁和指 示剂酚红。 n大肠杆菌发酵乳糖和葡萄糖产酸产气，所以上层呈黄色，直立段 有气泡存在 n肠道病原菌不能发酵乳糖，只能发酵葡萄糖，分解葡萄糖产酸， 使PH下降，因斜面部分先呈现黄色，
18、由于葡萄糖含量少，所生之 酸接触空气而氧化，又因细苗的生长利用含氮物质生成碱性化合 物，所以斜面部分后来又变成红色由于直立段(底层)呈厌氧状 态，细菌发酵葡萄糖所生的酸不被氧化，所以一直呈黄色。大肠 杆菌产气，有动力(沿穿刺线向周围扩散生长)伤寒杆菌有动力， 而痢疾杆菌则没有动力 n某些细菌如变形杆菌，乙型副伤寒杆菌能分解培养基中含硫氨基 酸（如胱氨酸）产生硫化氢、硫化氢与硫酸亚铁中的亚铁离子结 合形成黑色的硫化铁，而痢疾杆菌不产生硫化铁 讥 贱 鳃 桅 水 颇 渴 演 务 河 雌 翠 纺 徐 荒 敲 坝 饶 巨 吱 补 逐 域 捧 却 遥 中 仰 载 味 迭 谓 实 验 六 微 生 物 生
19、理 生 化 反 应 观 察 实 验 六 微 生 物 生 理 生 化 反 应 观 察 生化反应管原理（1） n尿素试验：此培养基鉴别沙门氏菌和变形杆菌属细 菌，自铁质双糖培养基上取菌苔作斜面接种，置 37恒温箱内培养1824小时同时作镜检观其是 否为纯培养 n变形杆菌含有尿素酶，经24小时培养能分解培养 基中较多量尿素产生大量的氨，使培养基PH变为硷 性，而呈现红色。即阳性反应，阳性反应可弃之。 痢疾杆菌属及沙门氏菌属之细菌不能分解尿素而不 呈现碱性反应即阴性反应，阴性反应 需继续作生 化反应及血清学试验。 挪 攫 淹 华 员 灭 梁 牙 仰 阀 闹 姥 蹄 麻 藻 炸 眠 烩 你 箔 砧 店
20、褒 幂 稳 糠 香 淆 物 但 把 繁 实 验 六 微 生 物 生 理 生 化 反 应 观 察 实 验 六 微 生 物 生 理 生 化 反 应 观 察 生化反应管原理（2） n糖发酵试验，细菌具有多种酶系统能分解糖类，产 酸产气。不同的细菌对各种糖类的分解不同，因而 可以利用糖发酵进行各种细菌(特别是肠道细菌)的 鉴别。 n大肠杆菌能发酵乳糖、葡萄糖产酸产气。 n志贺痢疾杆菌、沙门氏菌、变形杆菌不分解乳糖， 但能分解葡萄糖产酸。 n宋内氏痢疾杆菌迟缓发酵乳糖产酸，能分解葡萄糖 产酸。 骨 鹃 篆 鞋 薛 电 淋 娩 鬼 拔 姐 魂 铱 脏 弃 慈 弃 炮 茹 售 呛 夸 皮 怒 饺 哟 你 延
21、 簇 赞 腐 启 实 验 六 微 生 物 生 理 生 化 反 应 观 察 实 验 六 微 生 物 生 理 生 化 反 应 观 察 生化反应管原理（3） n硫化氢试验：某些细菌能分解培养基中硫氨基 酸（如胱胺酸）产生硫化氢、硫化氢与硫酸亚 铁中的亚铁离子结合形成黑色的硫化铁， n变形杆菌，乙型副伤寒杆菌能产生硫化铁 n痢疾杆菌不产生硫化铁。 珍 废 臭 骋 的 应 甲 割 想 蒋 出 责 础 盲 孝 朗 萄 橡 靴 彼 悸 铂 嘘 褂 卡 尤 衅 肖 辛 卡 咖 汰 实 验 六 微 生 物 生 理 生 化 反 应 观 察 实 验 六 微 生 物 生 理 生 化 反 应 观 察 方法： n1、克氏
22、双糖铁斜面培养基：分别取四种肠道杆菌 的培养物，用穿刺加斜面划线接种方法接种于4支 克氏双糖斜面培养基，37培养18-24h以后观察 结果。 n2、生化反应管：取尿素反应管、硫化氢反应、葡 萄糖反应、乳糖反应管，每种反应管分别穿刺接 种大肠杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌、变形杆菌， 37培养18-24h以后观察结果。 n3、动力试验：分别取四种肠道杆菌的培养物，用 穿刺接种方法接种于4支半固体培养培养基，37 培养18-24h以后观察结果。 炙 诫 厦 租 误 彦 殃 笨 消 叔 叠 煽 嚏 毕 竖 哺 声 睹 辽 廷 钞 戍 屁 发 鸡 忌 俐 作 眩 偿 嘉 察 实 验 六 微 生 物 生 理
23、生 化 反 应 观 察 实 验 六 微 生 物 生 理 生 化 反 应 观 察 + 结果观察 大肠杆菌大肠杆菌 伤寒杆菌伤寒杆菌 痢疾杆菌痢疾杆菌 变形杆菌变形杆菌 克氏双糖铁克氏双糖铁 葡萄糖葡萄糖乳糖 乳糖 硫化氢硫化氢 动动 力力 尿素尿素HH 2 2S S 生化反应管生化反应管 葡萄糖葡萄糖乳糖乳糖 + + - - - - - - + + + + 黄黄 色色 + + - - + + - - + + - - - - - - - - - - + + + + + + - - + + 黄黄 色色 红红 色色 黑黑 色色 红红 色色 黄黄 色色 红红 色色 黄黄 色色 黑黑 色色 + + + + + 胸 初 冗 勇 篙 绳 坚 污 脾 囤 售 演 詹 湃 解 粟 瞅 袋 缀 窟 儿 歌 尽 十 和 媒 妓 党 退 质 刺 耙 实 验 六 微 生 物 生 理 生 化 反 应 观 察 实 验 六 微 生 物 生 理 生 化 反 应 观 察