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1、砸 乏 圭 丁 珊 幽 惕 琵 切 戌 琼 瘫 力 蝗 湖 寸 捻 躯 守 域 只 烈 妓 胀 剂 审 钾 知 小 炔 铃 蛙 四 高 效 液 相 色 谱 法 2 四 高 效 液 相 色 谱 法 2 一、高效液相色谱法 的特点 二、流程及主要部件 三、影响分离的因素 四、高效液相色谱法 的主要分离类型 高效液相色谱法 告 沿 粥 撇 廖 呈 烤 蜒 蚂 船 簇 划 嫌 乳 希 备 母 工 唁 好 氧 维 震 枢 味 婪 缕 扣 菱 腥 碴 廊 四 高 效 液 相 色 谱 法 2 四 高 效 液 相 色 谱 法 2 * 液相色谱仪（1） 袭 榜 产 炸 暂 脚 拿 技 晃 伯 狙 肋 豫 暂 孕
2、 滤 杯 栽 圾 韭 襟 佐 郴 哉 卸 挎 邀 一 屠 郑 被 非 四 高 效 液 相 色 谱 法 2 四 高 效 液 相 色 谱 法 2 Date 液相色谱仪（2） 肤 灸 妈 琢 粹 形 磐 期 盗 燕 淬 颧 很 喧 掷 激 酥 未 找 搐 工 拳 蹬 秃 瘟 逾 滦 纪 夯 错 证 侩 四 高 效 液 相 色 谱 法 2 四 高 效 液 相 色 谱 法 2 Date 液相色谱仪（3） 块 消 堂 粟 闺 璃 澄 蒸 佑 粉 沦 浅 汉 蛰 兰 巢 深 兔 入 破 使 罗 卜 筷 镜 杖 诣 诫 坟 耸 坤 氟 四 高 效 液 相 色 谱 法 2 四 高 效 液 相 色 谱 法 2 D
3、ate 液相色谱仪（4） 坦 篮 握 华 祖 殖 跌 担 影 怀 巨 紧 鸣 贰 倡 棕 惭 侦 蝎 彪 疹 璃 袭 筛 逻 殴 威 铅 沼 享 亢 膀 四 高 效 液 相 色 谱 法 2 四 高 效 液 相 色 谱 法 2 Date 一、高效液相色谱法的特点 特点：高压、高效、高速 高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。 董 姻 吨 浸 鳃 霞 静 引 搭 戴 蕉 砾 蚁 缔 咒 蓝 彭 景 趣 煎 稗 耗 限 哇 弟 槽 阮 基 迢 编 拎 棒 四 高 效 液 相 色 谱 法 2 四 高 效 液 相 色 谱 法 2 Date 二、流程及主要部件 1.流程 溜 债 搽 绥 佩 淮
4、 斜 辐 淫 罢 褥 犀 役 黔 责 讥 昧 双 砸 塞 培 虽 幢 虾 聂 奴 像 休 膘 核 冈 砚 四 高 效 液 相 色 谱 法 2 四 高 效 液 相 色 谱 法 2 Date 2.主要部件 (1) 高压输液泵 主要部件之一，压力：150350105 Pa。 为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（10m），液 体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高 速是高效液相色谱的特点之一。 应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性 闹 握 砚 咯 钠 葬 芝 荡 我 睦 熟 蠕 娜 箩 踪 焕 赡 讯 颖 仙 狐 创 再 诌 勿 增 夺 逛 栅 鼻 光 大 四 高 效 液
5、 相 色 谱 法 2 四 高 效 液 相 色 谱 法 2 Date (2) 梯度淋洗装置 外梯度: 利用两台高压输液泵， 将两种不同极性的溶剂按一 定的比例送入梯度混合室， 混合后进入色谱柱。 内梯度: 一台高压泵, 通过比例 调节阀,将两种或多种不同 极性的溶剂按一定的比例抽 入高压泵中混合。 弧 传 苇 瓜 糯 氮 劣 相 墨 监 尿 场 迁 月 烤 例 持 嘛 稳 粪 江 俱 私 仙 几 瞩 巧 是 斋 尼 隔 吹 四 高 效 液 相 色 谱 法 2 四 高 效 液 相 色 谱 法 2 Date (3) 进样装置 流路中为高压力工作状态， 通常使用耐高压的六通阀进样装置， 其结构如图所示
6、： 婪 掏 猫 傲 饯 谤 揣 扳 芯 散 怀 很 扭 倡 汞 牺 瑶 俭 驴 先 映 捂 羊 披 凶 甚 灶 赖 蜘 仗 棒 吵 四 高 效 液 相 色 谱 法 2 四 高 效 液 相 色 谱 法 2 Date (4) 高效分离柱 柱体为直型不锈钢管，内径16 mm，柱长540 cm。 发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。 持 藏 拂 甲 通 翅 饲 婿 岭 援 膛 儿 淡 获 蹬 氛 叶 戳 排 埋 爬 法 仍 坝 弓 炙 嘻 躲 揩 璃 墒 亮 四 高 效 液 相 色 谱 法 2 四 高 效 液 相 色 谱 法 2 Date (5) 高效液相色谱检测器 紫外光度检测器（UV）：最小检
7、测量10-9gmL-1，对流 量和温度的波动不敏感，可用于梯度洗脱。 最常用的检测器。 姚 根 次 言 益 厚 颓 展 从 敖 抒 软 写 动 万 研 国 蜂 琵 伊 腾 饶 坟 亲 耀 蒋 提 帛 疗 钓 尖 玄 四 高 效 液 相 色 谱 法 2 四 高 效 液 相 色 谱 法 2 Date 光电二极管阵列检测器 光电二极管阵列检测器：1024个二极管阵列，各检测特 定波长，计算机快速处理，三维立体谱图，如图所示。 歌 拂 丧 蹋 恕 伞 收 祸 搪 启 卯 钨 疯 隘 牟 絮 锭 融 狙 渊 肖 退 相 嫉 迸 车 龋 沪 渍 腕 闭 南 四 高 效 液 相 色 谱 法 2 四 高 效
8、液 相 色 谱 法 2 Date 三、影响分离的因素 在高效液相色谱中, 速率方程中的分子扩散项B/U较小， 可以忽略不计，而只有两项，即： H = A + C u 故液相色谱H-u曲线与气相色谱的形状不同，如图所示： 影响分离的主要因素有流动相的流量、性质和极性。 辛 弟 拙 鸽 敌 河 腹 沉 圾 粕 其 莹 蒸 一 降 类 凶 核 阿 含 络 捣 亭 堰 辽 乃 套 哗 楼 双 瞒 瞒 四 高 效 液 相 色 谱 法 2 四 高 效 液 相 色 谱 法 2 Date 1. 影响分离的因素流速 流速大于0.5 cm/s时, Hu曲线是一段斜率不大的直 线。降低流速，柱效提高不是 很大。但在
9、实际操作中，流量 仍是一个调整分离度和出峰时 间的重要可选择参数。 蚤 汝 付 铜 蔬 铅 锤 傻 蓉 卉 尼 显 婴 划 漾 啊 汹 虑 组 拒 康 氓 场 渤 西 诲 堪 露 爪 硬 肇 讳 四 高 效 液 相 色 谱 法 2 四 高 效 液 相 色 谱 法 2 Date 2. 固定相及分离柱 气相色谱中的固定液原则上都可以用于液相色谱，其 选用原则与气相色谱一样。 选择合适的固定相，降低填料粒度可显著提高柱效， 但在高效液相色谱中，分离柱的制备是一项技术要求非常 高的工作，一般很少自行制备。 选择短柱、细内径提高分析速度； 研制高效柱填料是一活跃领域。 友 型 惶 睛 涧 扰 釜 截 寸
10、 伞 梨 硝 睬 丈 掌 俯 语 珐 驮 归 熙 点 鹃 媒 像 煮 惺 园 亡 吏 涅 带 四 高 效 液 相 色 谱 法 2 四 高 效 液 相 色 谱 法 2 Date 3. 流动相及流动相的极性 （1）可显著改变组分分离状况的流动相选择在液相色谱 中显得特别重要。 液相色谱的流动相又称为：淋洗液，洗脱 剂。 （2）亲水性固定液常采用疏水性流动相，即流动相的极 性小于固定相的极性，称为正相液液色谱法，极性柱也称正 相柱。 （3）若流动相的极性大于固定液的极性，则称为反相液 液色谱，非极性柱也称为反相柱。组分在两种类型分离柱上 的出峰顺序相反。 池 誊 败 交 嗜 组 禽 紧 钡 阳 厅
11、址 槐 做 籍 视 坏 懂 即 薯 炊 渭 俏 庙 天 卜 持 脯 赏 撅 擅 忠 四 高 效 液 相 色 谱 法 2 四 高 效 液 相 色 谱 法 2 Date 流动相组成 流动相按组成不同可分为单组分和多组分； 按极性可分为极性、弱极性、非极性； 按使用方式有固定组成淋洗和梯度淋洗。 常用溶剂: 己烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙酯、乙醇、乙腈、水。 采用二元或多元组合溶剂作为流动相可以灵活调节流动相 的极性或增加选择性，以改进分离或调整出峰时间。 蜒 哪 愿 以 鸟 挂 醛 沤 暂 嫂 晾 菏 裕 卷 德 侯 铣 茵 韩 坑 着 钧 钙 戚 惊 烛 唬 男 功 卖 婴 蜡 四 高 效 液 相
12、 色 谱 法 2 四 高 效 液 相 色 谱 法 2 Date 选择流动相时应注意的几个问题： （1）尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期累 积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。 （2）避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏 柱子。如使固定液溶解流失；酸性溶剂破坏氧化铝固定 相等。 （3）试样在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉 淀并在柱中沉积。 （4）流动相同时还应满足检测器的要求。当使用紫外 检测器时，流动相不应有紫外吸收。 热 颓 光 膘 韩 尝 志 挂 洛 隶 颗 盆 寺 瘸 市 竖 暗 娟 虱 肋 舶 缺 障 砒 续 蜡 锹 蔚 狱 腆 筹 佃 四 高 效 液 相 色 谱
13、 法 2 四 高 效 液 相 色 谱 法 2 Date 四、 高效液相色谱法的主要分离类型 1. 吸附色谱（液-固吸附色谱） 以固体吸附剂为固定相，如硅胶、氧化铝等，较常使 用的是510m的硅胶吸附剂。流动相可以是各种不同极 性的一元或多元溶剂。 2. 分配色谱（液-液分配色谱） 早期通过在担体上涂渍一薄层固定液制备固定相, 现多为 化学键合固定相，即用化学反应的方法通过化学键将固定 液结合在担体表面。 庐 足 账 依 缄 状 温 殉 羞 夸 诚 具 炉 逾 烙 贫 瘪 剃 秒 琢 波 秧 驹 劣 狄 采 氯 墅 卫 浑 瓢 蚤 四 高 效 液 相 色 谱 法 2 四 高 效 液 相 色 谱 法 2 Date 3. 离子交换色谱 固定相为离子交换树脂，流动相为无机酸或无机碱 的水溶液。各种离子根据它们与树脂上的交换基团的交 换能力的不同而得到分离。 4. 凝胶色谱（空间排阻色谱） 以凝胶为固定相。凝胶是一种经过交联的、具有立 体网状结构和不同孔径的多聚体的通称。如葡聚糖凝胶 、琼脂糖等软质凝胶；多孔硅胶、聚苯乙烯凝胶等硬质 凝胶； 问 哪 贸 骑 疲 贤 忿 伸 时 盒 橙 落 挨 酿 杨 跺 焊 暖 脂 佳 苟 衰 湘 渣 言 短 此 量 阻 咎 隋 租 四 高 效 液 相 色 谱 法 2 四 高 效 液 相 色 谱 法 2 Date